Vào những năm 1940-1970, cỏc phỏt hiện về rối loạn chuyển húa ủặc trưng cho từng dũng tế bào ủó ủược vận dụng ủể hỡnh thành cỏc phương phỏp nhuộm HHTB như Myeloperoxydase (MPO), Sudan black, PAS, Esterase ủặc hiệu và khụng ủặc hiệu…
Kỹ thuật nhuộm myeloperoxydase (MPO) dựa trờn nguyờn lý cỏc tế bào tủy như bạch cầu hạt, monoxit… chứa men MPO, cũn tế bào Lympho khụng chứa cỏc men nàỵ Men peroxydase cú tỏc dụng oxy húa cỏc chất nền như gốc phenol, một số acid amin và acid thơm. Phản ứng này diễn ra rất chậm, nhưng sẽ diễn ra nhanh hơn nếu cú thờm hydrogen peroxydase (oxy già) trong phản ứng. Năm 1966, Graham R. sử dụng dẫn xuất của benzidine là 3,3’ diaminobenzidine làm chất nền và phương phỏp này ủược sử dụng ủến ngày nay, tuy nhiờn cú một số cải tiến. Kết quả dương tớnh thể hiện những hạt
to mầu vàng sẫm trong nguyờn sinh chất, tại vị trớ khu trỳ của men MPỌ Tế bào dũng hạt thường dương tớnh mạnh hơn tế bào dũng monọ
Cỏc chất lipid tồn tại trong nhiều dũng tế bào mỏu, ở dạng cỏc hạt rất nhỏ và ẩn trong cỏc phức hợp. Vỡ vậy, cần sử dụng thuốc nhuộm ưa lipid, cú khả năng thõm ngấm vào phức hợp lipoprotein hoặc cỏc hợp chất chứa lipid khỏc, hoặc sử dụng cỏc biện phỏp tỏch phõn tử lipid ra khỏi dạng phức hợp, ủể thấy ủược trờn tiờu bản húa học tế bào, như nhuộm Sudan ủen. Lyson (1934) lần ủầu tiờn giới thiệu phương phỏp nhuộm Sudan ủen ổn ủịnh. Năm 1939, Sheehan ỏp dụng phương phỏp này ủể nhuộm bạch cầu trờn tiờu bản mỏu ủể khụ tự nhiờn và cố ủịnh trong cồn methyl. Sheehan và Storey (1947), thay thế khõu cố ủịnh cồn methyl bằng hơi formalin và giữ dung dịch Sudan ủen ở pH trung tớnh hoặc hơi kiềm. Sau ủú nhiều nhà nghiờn cứu ủó phõn tớch mức ủộ dương tớnh của Sudan ủen ở cỏc dũng tế bào mỏu nhau và thống nhất nhận ủịnh, dũng bạch cầu hạt dương tớnh mạnh nhất, dũng mono dương tớnh ở cỏc mức ủộ khỏc nhau, cũn dũng lympho thường õm tớnh. Trờn cựng một tế bào, mức ủộ dương tớnh của Sudan ủen thường mạnh hơn MPO, nhưng thường cú sự song hành về kết quả phản ứng giữa 2 phương phỏp này [39].
Về phương diện húa học tế bào, esterase khụng ủặc hiệu giới hạn ở những men thủy phõn cỏc ester ủơn giản của cỏc alcol cú nhúm N tự do và cỏc acid hữu cơ. Esterase của tế bào mỏu tỏc dụng lờn chất nền tổng hợp (dẫn xuất của naphthalene). Phần naphthol (hoặc naphthyl) của dẫn xuất này ủược phúng thớch và kết hợp nhanh chúng với muối diazonium cú trong thuốc nhuộm, tạo kết tủa cú màu sỏng ngay tại gần vị trớ enzym hoạt ủộng. Nachlas và Seligman (1949) sử dụng chất nền acetate β-naphthol và nhận thấy dũng mono dương tớnh ở cỏc mức ủộ khỏc nhau nếu sử dụng cỏc chất nền hoặc chất ức chế khỏc nhaụ Gomori (1953) sử dụng α-naphthol và naphthol AS
chloroacetate, nhận thấy dưỡng bào và bạch cầu hạt từ myelocyte ủến bạch cầu hạt trưởng thành dương tớnh mạnh, trong khi myeloblast, monocyte và lymphocyte õm tớnh. Moloney (1959) sử dụng naphthyl AS-D chloroacetate, phỏt hiện cỏc hạt khư trỳ rừ trong bào tương hầu như toàn bộ cỏc giai ủoạn trưởng thành của bạch cầu ủoạn trung tớnh, cũn myeloblast, bạch cầu ưa acid, bạch cầu ưa bazơ, monocyte, lymphocyte, tương bào, nguyờn hồng cầu và mẫu tiểu cầu õm tớnh. Schmazl và Braunsteiner (1971) sử dụng fluoride ủể ức chế phản ứng esterase với naphthyl AS-D của dũng hạt, giỳp phõn biệt giữa dũng hạt và dũng monọ
Cỏc carbon hydrate như glycogen rất quan trọng trong hoạt ủộng chuyển húa của tế bào, ủặc biệt là cỏc tế bào ủang hoạt ủộng. Nhiều tỏc giả ủó ỏp dụng cỏc phương phỏp nhuộm carbon hydrate trong nghiờn cứu tế bào học. Wislocki, Storti và Zubiani (1949) xỏc nhận rằng nhuộm glycogen với Periodic Acid-Schiff (PAS) cho kết quả ổn ủịnh và chắc chắn nhất. Trong phản ứng này, acid periodic (HIO4) oxy húa ủặc hiệu nhúm glycol 1-2 (CHOH-CHOH) hoặc cỏc dẫn xuất amino/alkylamino, ủể tạo ra một aldehyt kộp, aldehyt kộp này sẽ phản ứng với thuốc thử Schiff ủể phúng thớch Fuchsin cú mầu ủỏ tớa ở những vựng bào tương chứa chất cú khả năng bị oxy húạ Phương phỏp nhuộm PAS cho thấy, cỏc dũng tế bào mỏu biểu hiện phõn bố glycogen khỏc nhau trong bào tương, và PAS ủược ứng dụng ủể phỏt hiện