Czapek- Dox Agar:
Thí nghiệm nhằm so sánh tốc ñộ sinh trưởng và phát triển của T.viride
trên hai loại môi trường này kết quả thu ñược ở bảng sau:
Hình 3.7: Nấm mốc T. viride cấy ñược 4 ngày
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 38
Bảng 3.7: So sánh tốc ñộ sinh trưởng phát triển của T.viride trên môi trường PGA và Czapek- Dox Agar
ðường kính tản nấm Trichoderma viride (cm) Số ngày sau cấy
PGA Czapek- Dox Agar
1 1,28 0,58
2 4,24 3,62
3 7,25 5,67
4 8,75 7,83
5 9,0 8,84
Như chúng ta ñã biết môi trường Czapek- Dox Agar là môi trường nuôi cấy nấm tiêu chuẩn của Mỹ, tuy nhiên qua bảng trên kết quả thu ñược lại thấy nấm Trichoderma viride lại sinh trưởng và phát triển tốt trên môi trường PGA hơn là môi trường Czapek- Dox Agar. ðường kính tản nấm của T. viride trên môi trường PGA bao giờ cũng phát triển nhanh hơn trên môi trường Czapek- Dox Agar sau các ngày cấy (ở ngày thứ 4 sau cấy, ñường kính tản nấm T.viride trên môi trường PGA ñạt tối ña, còn trên môi trường Czapek- Dox Agar phải cần ñến 5 ngày, ñiều này cho thấy môi trường thích hợp cho nấm T. viride phát triển là môi trường PGA, cũng là môi trường cơ bản dùng cho trồng nấm P. ostreatus.
Bởi vậy trong vấn ñề nuôi cấy nấm P. ostreatus, người phân lập cần thường xuyên quan tâm theo dõi sự xuất hiện của nấm T. viride mà loại bỏ kịp thời.
3.2.2 Ảnh hưởng của nhiệt ñộ ñến sự sinh trưởng và phát triển của nấm T. viride trên môi trường PGA:
Bảng 3.8: Ảnh hưởng của nhiệt ñộ ñến sự phát triển của nấm T.viride trên môi trường PGA:
ðường kính tản nấm (cm) tại các nhiệt ñộ Ngày sau cấy 200C 250C 280C 300C 350C 1 0,73 1,32 3,71 2,32 0,56 2 2,64 4,01 7,89 6,57 1,13 3 5,25 7,21 8,68 8,45 1,74 4 7,23 8,76 9,0 9,0 2,78 5 8,46 9,0 9,0 9,0 4,52
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 39 Qua bảng 3.8 chúng ta thấy: trong khoảng 20-300C (trên môi trường PGA) nấm T.viride ñều có thể sinh trưởng và phát triển ñược. Tuy nhiên ở 28- 300C thì T.viride phát triển nhanh, mạnh và tốt hơn , ñây cũng là ngưỡng nhiệt ñộ thích hợp trồng nấm P. ostreatus. Trong ñó ở 280C là nấm phát triển nhanh và mạnh nhất với ñường kính sau 2 ngày cấy là 7,89 cm .Nếu ở nhiệt ñộ cao hoặc thấp hơn nấm sẽ phát triển chậm lại. ðiều này phù hợp với kết quả nghiên cứu của một số tác giả trước (Trần Thị Thuần và cs)
3.2.3 Ảnh hưởng của một số ngưỡng pH khác nhau ñến sự phát triển của nấm T. viride:
Bảng 3.9 Ảnh hưởng của pH môi trường ñến sinh trưởng của nấm
Trichoderma viride trên môi trường PGA
ðường kính tản nấm (cm) Số ngày sau cấy pH=4.0 pH=5.0 pH=6.0 pH=7.0 pH=8.0 1 1,19 1,87 2,58 3,25 1,21 2 3,52 4,38 5,82 6,61 2,68 3 5,56 6,71 8,56 8,38 4,24 4 7,62 8,67 9,0 9,0 6,75 5 8,71 9,0 9,0 9,0 8,79
Qua bảng 3.9, chúng tôi thấy ở các ngưỡng pH khác nhau từ 4-8, nấm
Trichoderma viride vẫn sinh trưởng tốt. Ở thời ñiểm 4 ngày sau cấy, ñường kính tản nấm T.virideñạt tối ña ở pH=5 và pH =7. Còn ở pH=4 và pH=8 thì ñường kính tản nấm T.viride ñạt tối ña sau 5 ngày cấy. Riêng ở ngưỡng pH=6 thì T.viride sinh trưởng nhanh nhất, sau 3 ngày cấy ñường kính ñạt tối ña trong ñĩa Petri là 8.56 cm.
3.3: Nghiên cứu khả năng ảnh hưởng của nấm T. viride ñến sự sinh trưởng
và phát triển của nấm P. ostreatus:
3.3.1 Khả năng ảnh hưởng của nấm T. viride ñến sự sinh trưởng và phát triển của nấm P. ostreatus trên môi trường PGA:
Kết quảở bảng 3.10 cho thấy tốc ñộ phát triển tơ nấm T. viride nhanh hơn nấm P. ostreatus. Nếu trên ñĩa petri cấy nấm P. ostreatus thì cần 8 ngày nuôi
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 40 cấy, hệ sợi tơ mới phát triển kín ñĩa. Trong khi ñó, nấm T. viride chỉ cần 4 ngày nuôi cấy ñã phát triển kín ñĩa mặt thạch. Ở công thức 2,3,4, dù rằng nấm P. ostreatus cấy cùng thời gian hay ñược cấy trước nấm T. viride 2 ngày, 4 ngày thì vẫn bị nấm T. viride lây nhiễm. Nhưng ở công thức 6, nấm P. ostreatus ñược nuôi cấy 6 ngày nên hệ sợi tơ phát triển mạnh, cho dù có lây nhiễm nấm T. viride
thì tơ nấm P. ostreatus vẫn phát triển mạnh, lấn át cả nấm T. viride . Do ñó, trong quá trình nhân nuôi tơ nấm trồng, cần theo dõi mỗi ngày sự phát triển của tơ nấm, cũng như theo dõi có nấm mốc lạ nào gây hại hay không. Và dù tơ nấm trồng ñã phát triển mạnh, nhưng chỉ cần phát hiện có ñiểm nhỏ nấm T. viride gây hại thì ñĩa petri ñó phải ñược loại bỏ.
Bảng 3.10: Nghiên cứu ảnh hưởng của nấm T. viride với nấm P. ostreatus trên môi trường PGA:
Kích thước tản nấm ngày sau cấy (cm)
2 ngày 4 ngày 6 ngày
Công thức
P. ostreatus T. viride P. ostreatus T. viride P. ostreatus T. viride
1 1,8d 4,66cd 8,54b
2 - 4,55bc - 8,78a - 9,0a
3 1,76d 4,50c 1,76e 8,75a 1,72e 8,93a
4 4,46c 6,53a 4,63d 9,0a 4,63d 9,06a
5 5,45b 6,45a 5,43b 9,0a 5,4c 9,0a
6 8,24a - 9,0a - 9,0a -
LSD% 0,37 0,9 0,13 0,32 0,14 0,36
CV% 4,6 0,8 1,4 1,8 1,3 2,0
- CT1: ðối chứng, chỉ cấy nấm P. ostreatus
- CT2: Chỉ cấy nấm T. viride
- CT3: Nấm T. viride và nấm P. ostreatus cấy cùng thời gian - CT4: Nấm T. viride cấy sau nấm P. ostreatus 2 ngày - CT5: Nấm T. viride cấy sau nấm P. ostreatus 4 ngày - CT6: Nấm T. viride cấy sau nấm P. ostreatus 6 ngày
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 41 Nấm P. ostreatusñược cấy trên môi trường PGA chỉ sau 6 ngày sau cấy ñã phát triển gần kín ñĩa (8,54 cm). Trong khi ñó nấm T. viride thì chỉ cần sau 4 ngày cấy ñã phát triển kín ñĩa (8,78 cm). Còn ở CT3, CT4, CT5 nấm T. viride
phát triển nhanh hơn nấm P. ostreatus, lan ñều khắp bề mặt thạch và vây kín nấm
P. ostreatus. Nhưng ñối với CT6, do nấm P. ostreatus ñã phát triển hệ sợi tơ dày ñặc lấn át nấm T. viride
Hình 3.8; 3.9; 3.10; 3.11: Nấm P. ostreatus cấy ñược 2 ngày, 4 ngày, 6 ngày, 8 ngày
Hình 3.12; 3.13; 3.14: CT4 (nấm mốc xanh cấy sau nấm bào ngư 2 ngày) sau 2,4,6 ngày nuôi cấy cấy
Hình 3.15; 3.16; 3.17: CT5 (nấm mốc xanh cấy sau nấm bào ngư 4 ngày ) sau 2,4,6 ngày nuôi cấy
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 42
Hình 3.18; 3.19: CT6 (nấm mốc xanh cấy sau nấm bào ngư 6 ngày) sau 2 ngày nuôi cấy
3.3.2 Khả năng ảnh hưởng của nấm T. viride ñến sự sinh trưởng và phát triển của nấm P. ostreatus trên môi trường hạt thóc trong chai:
Tất cả nghiệm thức sau khi ñược nuôi cấy trên môi trường chai hạt, có kết quả như sau:
Bảng 3.11: Khảo sát kích thước lan sâu của hệ sợi tơ nấm P. ostreatus và nấm T. viride theo chiều dọc trên môi trường chai hạt:
Kích thước lan sâu của hệ sợi tơ sau ngày cấy (cm3)
2 ngày 4 ngày 6 ngày 8 ngày
Công thức
P. ostreatus T. viride P. ostreatus T. viride P. ostreatus T. viride P. ostreatus T. viride
1 3,17c - 115,34c - 323,21b - 438,76b -
2 3,57c 25,98 39,27d 288,04 34,69c 448,81 34,69c 452,16
3 264,59b 0,00 360,05b 0,00 442,11a 0,00 452,16a 0,00
4 452,16a 0,00 452,16a 0,00 452,16a 0,00 452,16a 0,00
LSD % 15,21 0,9 28,03 12,63 30,02 5,79 18,74 0,72
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 43 Chúng tôi nhận xét bảng 3.11 như sau:
Ở công thức 1 chai hạt chỉ cấy nấm P. ostreatus lan kín chai sau 8 ngày cấy. Nhưng nếu cấy chung cả hai nấm P. ostreatus và T. viridenhưở công thức 2, thì tơ nấm P. ostreatus hoàn toàn bị nấm T. viride cạnh tranh dinh dưỡng. Còn ở công thức 3 và công thức 4, khi tơ nấm P. ostreatus ñã phát triển mạnh, bung tơ khắp bề mặt chai hạt, có cấy nấm T. viride vào cũng không ảnh hưởng ñến tốc ñộ phát triển của tơ nấm P. ostreatus. Do vậy, cần ñặc biệt quan tâm ñến khâu kiểm tra ñịnh kỳ chai hạt làm giống, vì nếu nấm T. viride tấn công vào thời ñiểm tơ nấm P. ostreatus ñang phát triển mạnh sẽ lấn át và vây kín nấm T. viride , làm người kiểm tra không phát hiện chai meo hạt ñó có mầm nhiễm bệnh
Hình 3.20; 3.21; 3.22; 3.23: CT1(chỉ cấy nấm bào ngư) sau 2, 4, 6, 8 ngày cấy
Hình 3.24; 3.25; 3.26 : CT2 (nấm mốc xanh và nấm bào ngư cấy cùng thời gian) sau 4,6,8 ngày cấy
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 44
Hình 3.27; 3.28 : CT4 (nấm bào ngư cấy trước nấm mốc xanh nấm 6 ngày) T. viride bị vây kín trên bề mặt tơ nấm P.ostreatus
3.3.3 Khả năng ảnh hưởng của nấm T. viride ñến sự sinh trưởng và phát triển của nấm P. ostreatus trên giá thể mạt cưa:
Mức ñộ cạnh tranh dinh dưỡng và khả năng lan sợi, phát triển của nấm T. viride cần chú ý ñặc biệt.
Ở bảng 3.12, giai ñoạn ủ phôi cho tơ phát triển tốt là rất quan trọng, nếu bịch phôi phát triển tốt (CT1), không có dịch hại nấm T. viride tấn công thì giai ñoạn ủ phôi chỉ mất 15 ngày, tơ nấm P. ostreatus ñã lan kín cả bịch phôi nấm.
Ngay cả khi từ lúc ủ cho ñến ngày thứ 6 (CT2,CT3, CT4), bịch phôi nấm nếu bị nấm T. viride tấn công thì vô cùng nguy hiểm, tốc ñộ phát triển của nấm T. viride nhanh hơn tơ nấm P. ostreatus nên chúng dễ dàng lan tỏa khắp bịch phôi.
Nhưng khi bịch phôi ñã ủ qua ñược 6 ngày trở lên (CT5, CT6, CT7), dù nấm T. viride bên ngoài có tấn công vào bịch phôi nấm thì bịch phôi vẫn phát triển bình thường, do hệ sợi tơ nấm khỏe, phát triển dày ñặc, ngăn không ñể nấm mốc tấn công vào cơ chất.
Hình 3.29 : CT2 (nấm bào ngư và nấm mốc xanh cấy cùng ngày)
ñược 6 ngày nuôi cấy
Tản nấm
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 45
Bảng 3.12: So sánh kích thước lan sâu của hệ sợi tơ nấm P. ostreatus và nấm T.viride trên giá thể mạt cưa:
Kích thước của tản nấm sau cấy (cm3)
3 ngày 6 ngày 9 ngày 12 ngày 15 ngày
C ôn g th ứ c P. o T. v P. o T. v P. o T. v P. o T. v P. o T. v 1 6,39e - 137,32d - 308,84c - 619,77b - 811,76a -
2 4,81e 28,75c 8,49f 476,88a 7,3d 809,63a 7,3e 826,6a 7,3c 826,6a
3 24,25e 42,3b 43,59e 385,74b 36,35d 773,61a 36,35e 826,6a 36,35c 826,6a
4 72,79d 19,75d 137,32d 141,53c 313,68c 629,48b 284,24d 794,81b 284,24b 826,6a
5 199,64c 72,48a 336,99c 447,21a 472,64b 621,01b 442,97c 826,6a 442,97b 826,6a
6 531,99b - 716,38b - 826,6a - 826,6a - 826,6a -
7 733,34a - 826,6a - 826,6a - 826,6a - 826,6a -
LSD% 36,66 4,71 26,27 30,3 38,89 55,38 34,5 21,38 34,35 0,94
CV% 9,2 11,4 4,7 8,2 5,5 7,7 4,5 2,6 4,2 0,0
Ghi chú:
- CT 1: ðối chứng, chỉ cấy nấm P. ostreatus
- CT2: Cấy nấm P. ostreatus và nấm T. viride cùng thời gian
- CT3: Cấy nấm P. ostreatus trước nấm T. viride 2 ngày
- CT4: Cấy nấm P. ostreatus trước nấm T. viride 4 ngày
- CT5: Cấy nấm P. ostreatus trước nấm T. viride 6 ngày
- CT6: Cấy nấm P. ostreatus trước nấm T. viride 8 ngày
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 46
3.4 Nghiên cứu khả năng gây hại của nấm T. viride lên quả thể nấm P. ostreatus ở các giai ñoạn khác nhau: ostreatus ở các giai ñoạn khác nhau:
Sau khi lần lượt lây nhiễm nấm T. viride lên quả thể nấm P. ostreatus ở các giai ñoạn một ngày tuổi, hai ngày tuổi và ba ngày tuổi, chúng tôi thu ñược kết quảñược trình bày ở bảng sau:
Bảng 3.13: Khả năng lây nhiễm nấm T. viride lên quả thể nấm P. ostreatus: Công thức thí
nghiệm nhiễm T. v Khả năng Thời gian xuất hiện T. v Triệu chứng Sau khi cấy giống + + + Từ 3 ñến 7 ngày
sau cấy
Tản nấm T. viride
xuất hiện trước tơ nấm P. ostreatus
Giai ñoạn sinh
trưởng + Từ sau 8 ñến 20 ngày sau cấy Tản nấm T. viride xuất hiện xen kẻ tơ nấm P. ostreatus và lan nhanh hơn trong
phần cơ chất
Giai ñoạn quả thể
non - không không
Giai ñoạn quả thể
thu hoạch - không không
Giai ñoạn quả thể già - không không
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 47 Từ kết quả của bảng 3.13, chúng tôi có nhận xét như sau: Trong giai ñoạn sau cấy từ 3 ñến 7 ngày là thời gian “cực tốt” cho nấm T. viride tấn công bịch phôi nấm, nhưng khi tơ nấm ñang trong giai ñoạn sinh trưởng mạnh thì khả năng bị nhiễm nấm T. viride cũng ít lo ngại hơn và ñặc biệt khi nấm P. ostreatus ñã tạo quả thể, dù nấm T. viride có lây nhiễm quả thể ở giai ñoạn phát triển nào thì quả thể vẫn phát triển bình thường, không lo nấm T. viride gây hại.
3.5 Khảo sát một số biện pháp phòng trừ nấm T. viride gây hại lên nấm P. ostreatus: ostreatus:
3.5.1 Khảo sát các nồng ñộ vôi ảnh hưởng ñến sự phát triển của nấm T. viride:
Sau khi các bịch cơ chất bị nhiễm nấm T. viride ñã ñược xử lý bằng nhiều nồng ñộ vôi khác nhau, chúng tôi có kết quả sau ñây:
Bảng 3.14: Nghiên cứu ảnh hưởng của nồng ñộ nước vôi ñến sự phát triển của nấm T. viride trên bịch trồng nấm P. ostreatus:
Thể tích nhiễm nấm sau xử lý (cm3) Công thức
4 ngày 8 ngày 12 ngày 16 ngày
1 462,04a 826,6a 826,6a 826,6a
2 322,16b 381,5b 561,66b 826,6a 3 237,38c 174,85d 122,92c 61,69b 4 404,82a 277,65c 125,04c 33,12b 5 296,72bc 188,63d 67,13d 20,24c LSD% 79,46 46,71 49,6 19,05 CV% 12,2 6,7 7,7 2,9 Ghi chú:
- CT1: ðối chứng, không xử lý nước vôi. - CT2: xử lý bằng nước vôi có nồng ñộ 5% - CT2: xử lý bằng nước vôi có nồng ñộ 10% - CT2: xử lý bằng nước vôi có nồng ñộ 15% - CT2: xử lý bằng nước vôi có nồng ñộ 20%
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 48 Kết quả bảng 4.14 cho thấy, sau 16 ngày theo dõi, khi các chai phôi bị nhiễm nấm T. viride ñã ñược xử lý bằng dung dịch vôi với nhiều nồng ñộ khác nhau, chúng tôi thu ñược kết quả như sau: Ở công thức 1, công thức ñối chứng (không xử lý bịch phôi nhiễm bằng dung dịch vôi), nấm T. viride từ từ phát triển lấn át hoàn toàn tơ nấm P. ostreatus. Còn ở công thức 2, dù chai phôi ñã ñược xử lý từ dung dịch vôi 5 %, nhưng có thể do nồng ñộ vôi yếu, nên khi xử lý ñược 4 ngày, nấm T. viride có phần phát triển chậm lại, nhưng thời gian sau thì vẫn tiếp tục phát triển mạnh dần lên. ðến công thức 3, công thức 4 và công thức 5 sau khi ñược xử lý bằng dung dịch vôi 10%, 15%, 20% ñược thống kê theo bảng 4.8 cho kết quả thật khả quan. Tuy nhiên, ở dung dịch vôi 15% và dung dịch vôi 20% dù ñã khống chế sự phát triển của nấm T. viride, nhưng có thể do nồng ñộ vôi quá cao, nên có tác ñộng mạnh ñến sự phát triển của nấm T. viride và ñồng thời cũng làm tơ nấm P. ostreatus phát triển yếu ñi, hệ sợi tơ mỏng. Theo chúng tôi ñánh giá dung dịch ở nồng ñộ 10% là thích hợp nhất ñể xử lý nấm mốc xanh trên bịch cơ chất mạt cưa dùng cho trồng nấm P. ostreatus.
ðể có thể phân loại ñược bịch phôi trồng nấm P. ostreatus bị nhiễm nấm T. viride ở giai ñoạn nào còn có thể xử lý ñược, thì chúng tôi tiến hành thí nghiệm