Nhuộm bạc là phương pháp nhuộm rất nhạy đối với protein và được sử dụng nhuộm gel khi điện di để đánh giá sự tinh khiết của mẫu protein. Nhuộm bạc cho phép phát hiện một cách nhanh chóng, chính xác và rất nhạy đối với các băng protein trên gel ngoại trừ những protein không được phân tách trên gel. Đồng thời nhuộm bạc là phương pháp phù hợp để phân lập các băng protein sai khác giữa các mẫu phục vụ cho việc phân tích khối phổ sau này. Vì thế, lượng glycoprotein thu được trên màng tế bào sau khi gene ST3Gal-I bị knock-down được chúng tôi tiến hành điện di và nhuộm bạc để phát hiện sự sai khác. Kết quả về quá trình nhuộm bạc được trình bày trong hình 4.7.
Với hàm lượng Glycoprotein thu được trên màng tế bào sau khi gene ST3Gal-I bị knock-down ở trên, chúng tôi đã tiến hành điện di và nhuộm bạc để phát hiện sự sai khác sau khi gene ST3Gal-I bị knock-down. Từ đó tiến hành in-gel digestion để chuẩn bị mẫu cho quá trình phân tích khối
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
phổ. Các kết quả phân tích phổ khối (Mass spectrophotometer - MS) giúp nhận dạng sự sai khác của các glycoprotein sau khi gene ST3Gal-I bị knock-down sẽ phần nào cho phép tìm hiểu mối liên quan giữa ST3Gal-I và đặc tính di căn của tế bào ung thư. Kết quả nhuộm bạc được trình bày trong hình 4.7.
ST3 SC Ledder
Hình 4.7. Hình ảnh nhuộm bạc các glycoprotein màng của mẫu đối chứng (SC) và knock-down gene ST3Gal-I (ST3)
Kết quả nhuộm bạc cho thấy các băng protein thu được là rõ ràng. Hình ảnh này cho thấy các băng protein kích thước khoảng 35 kDa, 60 kDa, 70 kDa và 100 kDa đã có sự sai khác rõ rệt giữa mẫu đối chứng (SC) và mẫu knock-down gene ST3Gal-I (ST3). Vì vậy, các băng protein trên đã được cắt khỏi bản gel và đưa vào hệ thống thí nghiệm in-gel digestion phục vụ cho thí nghiệm phân tích khối phổ nhằm kiểm tra sự sai khác của các protein có mặt trong các băng giữa 2 mẫu nghiên cứu.