CHƯƠNG III SẢN PHẨM
3.1.2.4Cách phát hiện Salmonella [3] •Nguyên tắc
• Nguyên tắc
Phương pháp phát hiện này làm cho số lượng nhỏ Salmonella có cơ hội phát triển trong môi trường lỏng không lựa chọn ở 370C để làm giàu trước. Một môi trường và nhiệt độ như thế sẽ cho phép các vi khuẩn khác phát triển, bởi thế tiếp theo nuôi cấy làm giàu trước trong môi trường lỏng chọn lọc và ủ ấm ở 42 – 430C, lần cuối thì cấy lên môi trường đặc chọn lọc và phân
biệt, và sau khi ủ ấm ở 370C thì kiểm tra về sự có mặt các khuẩn lạc có đặc điểm khả nghi là
Salmonella. Những khuẩn này sau đó được kiểm tra về đặc điểm sinh hóa và huyết thanh của
loài Salmonella spp. • Cách làm
- Đồng nhất mẫu thực phẩm
- Làm giàu vi khuẩn trước ( pre-enrichment)
- Chuyển 10ml thực phẩm đồng nhất (25g mẫu đã khấy với 225ml nước peptone) vào bình 500ml.
- Ủ ấm ở 370C ± 10C trong 16-20h. - Làm giàu vi khuẩn ( enrichment)
- Chuyển 10ml ở mỗi bình làm giàu trước vào 100ml môi trường tetrathionate và 10ml khác vào 100ml môi trường seleite đã làm ấm tới 42-430C.
- Ủ ấm 42-430C trong 48h - Ria ra đĩa
Sau 18-24h, từ mỗi bình làm giàu ria lên một cặp đĩa petri; môi trường thạch brillant green phenol red và thạch bismuth sulphite.
- Ủ ấm 37± 10C trong 20-24 h 24h sau lặp lại như trên
Kiểm tra khuẩn lạc Salmonella các đĩa môi trường đã ria cấy 24h và 48h để tìm khuẩn lạc
Salmonella điển hình.
• Xác định
Chọn 5 khuẩn lạc điển hình hoặc nghi ngờ tư mỗi đĩa môi trường ria lên đĩa thạch dinh dưỡng. Ủ ấm 370C trong 20-24h
Thạch TSI: ria lên mặt thạch nghiêng và chọc sâu dưới đáy ống, ủ ấm 370C trong 24-48h. Giải thích sự đổi màu như sau :
Đáy
Vàng : lên men glucose
Đỏ hoặc không đổi màu : glucose không lên men Đen : sinh H2S
Có bóng hơi hoặc vỡ thạch: sinh hơi từ glucose
Mặt nghiêng
Vàng: lactose hoặc sucrose lên men
Đỏ hoặc không đổi: lactose hoặc sucrose không lên men
Thạch ure: ria trên mặt thạch: ủ ấm 370C trong 24-48h. Màu hồng chỉ phản ứng dương tính.
Môi trường LDC : cấy đúng dưới mặt môi trường lỏng. Ủ ấm 370C trong 24h. Màu đỏ tía sau khi mọc là phản ứng dương tính.
Thuốc thử beta-galactosidase: Lấy một quai khuẩn lạc cấy vào ống nghiệm có 0.25ml nước muối. Thêm 1 giọt toluene. Để ống nghiệm trong chậu nước ấm 370C một lúc, cho thêm 0.25ml thuốc thử beta-galactosidase và trộn đều. Lại để ống trong nước ấm 370C trong 24h. Màu vàng là phản ứng dương tính.
Môi trường VP: lấy một quai cấy khuẩn lạc vào hai ống nghiệm đựng 0.2ml môi trường. Ủ ấm một ống ở nhiệt độ phòng và ống còn lại ở nhiệt độ 370C trong 48h. Cho thêm vào mỗi ống 2 giọt dung dịch creatinine, 3 giọt dung dịch ethanolic naphthol và 2 giọt KOH. Lắc đều mỗi khi cho thêm một thứ thuốc thử, và đọc kết quả trong vòng 15 phút. Màu hồng tới đỏ tươi là phản ứng dương tính.
Môi trường indole: cấy một khuẩn lạc vào môi trường indole và ủ trong 370C trong 24h. Cho thêm 1ml thuốc thử indole. Vòng đỏ hình thành là phản ứng dương.
(adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});