Muốn chẩn ủoỏn ủược bất thường NST bước ủầu tiờn phải lấy ủược cỏc chất liệu di truyền của thai nhi từ cỏc tế bào nước ối, tua rau, mỏu hoặc da của thai nhi. Cỏc tỏc giả Evan AM Evan MI, D, Alton ME [48] chia cỏc kỹ thuật lấy mẫu tế bào của thai (fetal cell sampling) thành hai loại trực tiếp và giỏn tiếp.
1.4.4.1. Cỏc phương phỏp lấy tế bào thai trực tiếp (invasive procedures)
• Chọc hỳt nước ối (amniocentesis)
Lần ủầu tiờn vào năm 1965, Kingler ủó thực hiện thành cụng xột nghiệm nhiễm sắc ủồ từ mẫu nước ối lấy ra ủược [10]. Lấy nước ối xột nghiệm là kỹ thuật tiếp cận ủến thai dễ dàng và phổ biến nhất hiện nay. Chọc hỳt nước ối là thủ thật tương ủối ủơn giản, ớt tai biến cho thai. Cỏc tiến bộ
trong việc phõn tớch cỏc mẫu nước ối làm cho kỹ thuật này ngày càng phổ
biến [14]. Người ta phõn biệt thành:
+ Chọc hỳt nước ối sớm: giữa tuần thứ 13 và 15. + Chọc hỳt nước ối kinh ủiển: giữa tuần thứ 16 và 20. + Chọc hỳt nước ối muộn: sau 20 tuần.
- Thời gian ủể tiến hành chọc hỳt nước ối thường ở tuổi thai 17 - 18 tuần, khi ủú trong buồng ối cú khoảng 150 – 250ml nước ối. Đõy là thời ủiểm tối
ưu ủể chọc hỳt nước ối bởi vỡ kỹ thuật thực hiện tương ủối dễ dàng, cỏc tế bào
ối và tế bào bong của thai nhiều nhất. Chọc hỳt nước ối sớm cho phộp cú kết quả khi thai cũn nhỏ dễ dàng phỏ thai nếu cú chỉủịnh.
- Cỏc tai biến của chọc hỳt dịch ối gồm cú sẩy thai (1%), rũ nước ối (1%), nhiễm trựng ối sau khi chọc hỳt nước ối là hiếm gặp (0,5 – 1,5/ 1000
trường hợp), phản ứng Rh(+) Rh(-), chọc kim vào da thai nhi và dị tật cho thai nhi [49].
• Sinh thiết gai rau (chorionic villus sampling)
Tuổi thai ủể tiến hành sinh tiết gai rau cú thể tiến hành trong ba thỏng giữa hoặc trong ba thỏng ủầu của thai nghộn. Smidt – Jensen năm 1991 sinh thiết gai rau cho 210 thai phụ, tỷ lệ sẩy thai là 0,4% [61]. Tai biến của sinh tiết gai rau là sẩy thai (2-3%), chảy mỏu qua ủường õm ủạo (7 – 10%), nhiễm khuẩn và dị tật cho thai [63].
1.4.4.2. Phương phỏp lấy tế bào thai giỏn tiếp từ mỏu mẹ
- Sự thu thập, phõn tớch những tế bào thai từ mỏu ngoại vi của mẹ ủể
chẩn ủoỏn tỡnh trạng thai, trỏnh ủược nguy cơ cú thể xảy ra với thai khi sử
dụng cỏc kỹ thuật ủụng chạm ủến thai nhi, ủiều mà cỏc cặp vợ chồng thường hay lo ngại mỗi khi ủược chỉủịnh làm chẩn ủoỏn trước sinh.
1.4.4.3. Một số kỹ thuật di truyền ủể ỏp dụng chẩn ủoỏn thai bất thường NST
Sau khi lấy ủược tế bào thai theo phương phỏp trực tiếp hoặc giỏn tiếp, cỏc tế bào thai ủú ủược dựng ủể chẩn ủoỏn trước sinh, xỏc ủịnh xem thai nhi cú bị bất thường NST hay khụng và bất thường ở mức ủộ tế bào hay ở mức ủộ
phõn tử.
• Phương phỏp di truyền học tế bào (phương phỏp xột nhiệm NST)
+ Nuụi cấy tế bào ối [3], [20].
Dịch ối là một tế bào khụng ủồng nhất, phụ thuộc vào giai ủoạn phỏt triển của thai, gồm cỏc tế bào màng ối, tế bào da, tế bào ủường tiết niệu,
ủường hụ hấp, khoảng 0,5% là tế bào mỏu của mẹ và thậm chớ cú cả tế bào mỏu của thai. Do ủú, phõn tớch NST của tế bào nuụi cấy từ dịch ối ủược xem như là phương phỏp thuận tiện nhất, tin cậy cho chẩn ủoỏn trước sinh.
Lượng nước ối cần ủể xột nghiệm NST ủược chia ủều vào 2 lọ nuụi cấy. Do cỏc tế bào nước ối là cỏc tế bào bong nờn nuụi cấy cần một chế ủộủặc biệt như mụi trường Chang, Amnio Max ủể tạo cỏc tế bào sợi bỏm dớnh vào mặt bỡnh nuụi cấy. Nuụi cấy theo phương phỏp hở trong tủ ấm 370C với 5% CO2
và 95% khụng khớ cựng nguồn ẩm. thời gian trung bỡnh ủể cú kết quả phõn tớch NST là 10 ủến 20 ngày.
+ Nuụi cấy tế bào mụ (tế bào tua rau, tế bào da, tế bào cơ thai) [3] + Nuụi cấy bạch cầu lympho[3], [66]
Cỏc phương phỏp di truyền học phõn tử
+ Kỹ thuật FISH ( Fluorescence In Situ Hybridization) [3],[20], [70].
FISH là kỹ thuật lai giữa kỹ thuật tế bào và kỹ thuật phõn tử, dựng một trỡnh tự ngắn của chuỗi ADN sợi ủơn, ủược gọi là mẫu ADN dũ (cỏc mẫu ADN dũ này ủược ủỏnh dấu bằng cỏc ủồng vị phúng xạ). Cỏc mẫu ADN dũ này ủược lai với trỡnh tự của ADN trờn tiờu bản NST ở kỳ giữa, kỳ ủầu hoặc gian kỳ. Qua sự lai của mẫu ADN dũ với trỡnh tự bổ xung, ta cú thể phỏt hiện, (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
ủịnh vịủược vị trớ chuỗi ADN ủặc hiệu qua phõn tớch dưới kớnh hiển vi huỳnh quang ủể xỏc ủịnh cỏc bất thường của NST. Ưu ủiểm của kỹ thuật FISH là phỏt hiện nhanh chúng những bất thường NST trong vũng 24 - 48 giờ do sử
dụng trực tiếp tế bào ối, tế bào tua rau khụng cần qua nuụi cấy. FISH cú thể
phỏt hiện cỏc rối loạn NST nhỏ, cỏc ủột biến gen mà phương phỏp phõn tớch NST khụng phỏt hiện ủược
+ Phương phỏp nhõn bản ADN in vitro hay phản ứng chuỗi polymerae PCR (polymerase chain reaction) [3], [67]
Trong chẩn ủoỏn trước sinh, PCR ủựợc dựng ủể chẩn ủoỏn cỏc hội chứng: HC Down, HC Edwards, HC Patau, hội chứng Tuner và một số bệnh khỏc như bệnh xơ nang, teo cơ Duchen....
Như vậy, cú rất nhiều phương phỏp ủể lấy ủược tế bào cú nguồn gốc từ
thai nhưng phương phỏp ủược sử dụng nhiều nhất là phương phỏp nuụi cấy tế
bào ối do cú nhiều ưu ủiểm và giỏ thành xột nghiệm dễ ủược chấp nhận hơn so với cỏc kỹ thuật khỏc.
Chương 2
ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIấN CỨU