HBeAg sẽ tạo thành phức hợp miễn dịch. Sau khi ủ, mẫu huyết thanh thừa sẽ được loại bỏ và các giếng được rửa sạch bằng đệm. Tiếp tục thêm cộng hợp anti HBe gắn peroxidase. Các KT của cộng hợp sẽ gắn vào phức hợp nói trên (nếu có). Sau khi rửa sạch và ủ với tetramethylbenzidine, phản ứng hiện màu vàng khi dùng H2SO4 để hãm phản ứng. Nồng độ của chất màu tương ứng với nồng độ của HBe trong huyết thanh. Sự vắng mặt của HBeAg trong huyết thanh biểu hiện bằng sự không bắt màu hoặc là rất yếu.
- Tiến hành:
* Gắn các giếng vào khay (stripholder), tốt nhất là sắp xếp đủ thành các strip (8 giếng).
* Nhỏ 100μl mẫu huyết thanh thử và chứng vào các giếng (nhỏ mẫu trước và chứng sau).
* Ủ ở 120°C trong 120 phút. * Rửa sạch các giếng 4 lần.
* Nhỏ 100μl cộng hợp vào các giếng. * Ủ ở 37°C trong 60 phút.
* Làm ngưng phản ứng bằng H2SO4 1mol/l.
2.2.3.3. Anti HBc IgG
- Phương pháp: Thực hiện bằng kỹ thuật ELISA dựa trên nguyên tắc cạnh tranh một giai đoạn.
- Thiết bị: Dùng bộ kit Hepanostika của hãng Bio Rad sản xuất tại Đức.
- Nguyên tắc: Cho mẫu huyết thanh thử cùng với kháng huyết thanh Anti HBc có gắn enzyme peroxidase (cộng hợp HRP) vào các giếng nhựa phủ kháng nguyên HBc. Nếu mẫu thử không có Anti HBc thì phức hợp
kháng nguyên HBc và cộng hợp HRP tạo thành. Do đó khi cho chất sinh màu TMB vào thì phản ứng sẽ chuyển sang màu xanh và tiếp tục đổi vàng nếu ta cho chất hãm phản ứng là axit sulfuric vào. Nếu trong mẫu thử không có Anti HBc thì nó sẽ cạnh tranh với cộng hợp HRP và phản ứng sinh màu sẽ không xảy ra sau khi rửa sạch loại bỏ kháng huyết thanh.
- Đọc kết quả với máy đọc ELISA ở bước sóng 450nm.
2.2.3.4. HBV DNA