2.1.1.1. Các chất chuẩn đối chiếu
- Chuẩn quốc gia Lamivudine (200mg/ lọ) hàm lƣợng 99,45 % C8H11N3O3S
tính theo nguyên trạng, SKS 031214603, bảo quản nhiệt độ 50C, tránh ánh sáng - Viện kiểm nghiệm – Bộ Y Tế.
- Chuẩn quốc gia Zidovudin (200 mg/ lọ) hàm lƣợng 99,64 % C10H13N5O4 (HPLC) tính theo nguyên trạng, SKS 0105143, bảo quản nhiệt độ 50C, tránh ánh sáng – Viện kiểm nghiệm - Bộ Y Tế.
- Chuẩn quốc gia Nevirapin (200 mg/ lọ) hàm lƣợng 99,49 % C15H14N4O tính theo nguyên trạng, SKS WS 0109263, bảo quản nhiệt độ 20C – 80C, tránh ánh sáng – Viện kiểm nghiệm - Bộ Y Tế.
2.1.1.2. Hóa chất:
- Nƣớc cất deion: là nƣớc cất hai lần mới, đƣợc lọc qua bộ lọc tinh khiết có cột trao đổi anion và cation, sau đó lọc qua màng lọc 0,2µm.
- Axít Boric H3BO3, muối natri tetraborat Na2B4O7.10H2O, chất hoạt động bề mặt Natri dodecyl sunfat SDS, NaOH, NaH2PO4.2H2O, Na2HPO4… của hãng MERCK KGaA Germany
2.1.1.3.Thiết bị và dụng cụ
- Máy điện di mao quản Aligent CE system 9001 đƣợc điều khiển bằng phần mềm Chemstation 100001 (sản xuất tại hãng Hewlett Packard, Đức) của bộ môn Hóa phân tích- Độc chất, Trƣờng đại học Dƣợc Hà Nội.
- Máy lọc nƣớc tinh khiết Sartorius arium 611: model SARTORIUS AG GOTYINGEN, áp suất tối đa 100psi/ 6,9bar.
- Máy siêu âm Ultrasonic LC 60H ( sản xuất tại hãng Elma, Đức). - Máy đo pH EUTECH Instrument.
25 - Cân phân tích Sartorius TE214S.
- Giấy lọc đƣờng kính lỗ lọc 11cm- Trung Quốc. - Màng lọc PTFE với kích thƣớc lỗ lọc 0,2 µm.
- Bộ lọc hút chân không màng lọc cenlulose với kích thƣớc lỗ lọc 0,45 µm.
- Các dụng cụ chính xác: bình định mức, pipet chính xác với các thể tích khác nhau. - Các dụng cụ khác: cốc có mỏ, ống nghiệm, đũa thủy tinh, chày và cối.
2.1.2. ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU
2.1.2.1. Chế phẩm làm việc
- Chế phẩm làm việc Lamivudine 150mg, Nevirapine 200mg & Zidovudine 300mg do công ty Ranbaxy laboratories Limited Ấn Độ sản xuất . Ngày sản xuất 9/2011. Hạn sử dụng 9/ 2013.
- Chế phẩm làm việc Lamivudine 150mg & Zidovudine 300mg do công ty Matrix Laboratories Limited Ấn Độ sản xuất. Ngày sản xuất 9/2011. Hạn sử dụng 10/2013
2.1.2.2. Chuẩn bị mẫu
* Pha dung dịch chuẩn và dung dịch thử:
- Dung dịch gốc chuẩn: cân chính xác khoảng 30,9 mg Lamivudin, 39,7 mg Nevirapin và 59,6 mg Zidovudin vào cốc có mỏ. Thêm vào 10,0 ml MeOH hòa tan, sau đó thêm nƣớc cất deion hòa tan. Chuyển hết vào bình định mức 100 ml, siêu âm cho tan hoàn toàn, thêm nƣớc deion đến thể tích vừa đủ và lắc đều.
- Dung dịch chuẩn: hút chính xác 5,0ml dung dịch gốc chuẩn pha vào bình định mức 10ml, thêm nƣớc deion vừa đủ thể tích và lắc đều. Lọc qua màng lọc 0,2µm. - Dung dịch mẫu thử: Cân 20 viên thuốc viên, xác định khối lƣợng trung bình một viên và nghiền thành bột mịn. Cân một lƣợng bột viên tƣơng ứng với 15,00 mg Lamivudin, 20,00 mg Nevirapin và 30,00 mg Zidovudin cho vào bình định mức 100,0 ml, thêm 70 ml nƣớc deion siêu âm cho tan hết, thêm nƣớc deion đến vừa đủ thể tích, lắc đều. Lọc qua giấy lọc đƣờng kính lỗ lọc 11cm. Bỏ 20 ml dịch lọc đầu. Dịch lọc đƣợc tiếp tục lọc qua bộ lọc hút chân không màng lọc 0,45µm. Tiếp tục bỏ
26
20ml dịch lọc đầu. Dịch lọc đƣợc lọc qua màng lọc 0,2µm trƣớc khi tiêm vào lọ đựng mẫu.
-Dung dịch mẫu trắng: Chuẩn bị nhƣ mẫu chuẩn nhƣng không có chất phân tích. *Chuẩn bị dung dịch điện ly nền:
- Dung dịch điện ly nền Na2B4O7 10mM: Cân chính xác khoảng 0,1906 g Na2B4O7 vào bình định mức 50,0 ml thêm nƣớc để siêu âm và hòa tan hoàn toàn. Điều chỉnh nƣớc tới vạch và lắc đều.
- Dung dịch điện ly nền Na2B4O7 10mM + SDS 50mM : Cân chính xác khoảng 0,1906 g Na2B4O7 và 0,7210 g SDS vào bình định mức 50,0 ml thêm nƣớc để siêu âm đuổi khí và hòa tan hoàn toàn. Điều chỉnh nƣớc tới vạch và lắc đều. Dung dịch điện ly nền này điều chỉnh pH đến pH 8,5 ; pH 9,2 và pH 10.
- Dung dịch điện ly nền Na2B4O7 10mM + β-cyclodextrin 10mM: Cân chính xác khoảng 0,1906 g Na2B4O7 và 0,4820g β-cyclodextrin vào bình định mức 50,0 ml thêm nƣớc để siêu âm đuổi khí và hòa tan hoàn toàn. Điều chỉnh nƣớc tới vạch và lắc đều.
(adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});