Phƣơng pháp sinh hóa

Một phần của tài liệu xác định đồng thời dư lượng kháng sinh nhóm phenicol trong một số loại thực phẩm tươi sống trên địa bàn hà nội bằng phương pháp sắc ký lỏng khối phổ (Trang 30 - 31)

Trong phân tích dƣ lƣợng kháng sinh, phƣơng pháp vi sinh vật (VSV) đã và đang đƣợc sử dụng rộng rãi và đóng một vai trò quan trọng trong kiểm soát dƣ lƣợng kháng sinh trong các sản phẩm có nguồn gốc động vật [28]. Nhiều phƣơng pháp VSV đã đƣợc nghiên cứu, thích ứng và ứng dụng trong chiến lƣợc kiểm soát ở các nƣớc phát triển [21] nhƣ phƣơng pháp bốn đĩa của Châu Âu (Four Plate Test) [19], test thận của Bỉ (Belgian Kidney Test) hay test một đĩa (One Plate Test) [24], phƣơng pháp năm đĩa mới của Hà Lan (NAT: Nouws antibiotic test) hay STAR (Screening Test for Antibiotic Residues) protocol của Pháp [28]… Trong bối cảnh cần kiểm soát và phân tích một số lƣợng mẫu lớn thì những phƣơng pháp sàng lọc này đã đƣợc khuyến cáo áp dụng trƣớc khi dùng các phƣơng pháp đặc hiệu để định lƣợng.

Là nhóm chất có hoạt tính sinh học, do đó dựa trên đặc tính này phƣơng pháp hóa sinh bán định lƣợng ELISA đã đƣợc ứng dụng phổ biến trong hầu hết các

phòng thí nghiệm trên thế giới cho phân tích kháng sinh đặc biệt là Chloramphenicol[6]. Về nguyên tắc: Phƣơng pháp ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay- xét nghiệm hấp thụ miễn dịch liên kết với enzyme) có rất nhiều dạng mà đặc điểm chung là đều dựa trên sự kết hợp đặc hiệu giữa kháng nguyên và kháng thể, trong đó kháng thể đƣợc gắn với một enzyme. Khi cho thêm cơ chất thích hợp (thƣờng là nitrophenol phosphate) vào phản ứng, enzyme sẽ thủy phân cơ chất thành một chất có màu. Sự xuất hiện màu chứng tỏ đã xảy ra phản ứng đặc hiệu giữa kháng thể với kháng nguyên và thông qua cƣờng độ màu mà biết đƣợc nồng độ kháng nguyên hay kháng thể cần phát hiện. Tuy nhiên ELISA chỉ có tính chất bán định lƣợng, các mẫu dƣơng tính và dƣơng tính giả sau đó cần kiểm tra lại bằng các kỹ thuật sắc ký. Tại Việt Nam, phòng thí nghiệm NAFIQAVED4 – thành phố Hồ chí Minh sử dụng phƣơng pháp này kết hợp với LC/MS để xác định Chloramphenicol trong các mẫu thủy sản với giới hạn phát hiện 0,1ppb.

Tuy nhiên, đối với yêu cầu kiểm soát và định lƣợng và đặc biệt với những kháng sinh đã bị cấm sử dụng thì áp dụng các phƣơng pháp hóa học lại tỏ ra ƣu việt và cần thiết. Ngày nay với sự phát triển các kỹ thuật phân tích công cụ việc định lƣợng chất phân tích đã trở nên dễ dàng hơn với độ nhạy và khả năng phát hiện cũng nhƣ khả năng định lƣợng ngày càng tốt. Trong phân tích ngƣời ta đã và đang tiến dần tới những mức định lƣợng ở cấp lƣợng vết, siêu vết và hơn nữa là cấp độ phân tử. Đối với việc định lƣợng nhóm Phenicol, trên Thế giới đã có nhiều nghiên cứu với các phƣơng pháp hiện đại từ quang phổ hấp thụ, sắc ký lỏng hiệu năng cao, điện di mao quản…

Một phần của tài liệu xác định đồng thời dư lượng kháng sinh nhóm phenicol trong một số loại thực phẩm tươi sống trên địa bàn hà nội bằng phương pháp sắc ký lỏng khối phổ (Trang 30 - 31)

Tải bản đầy đủ (PDF)

(92 trang)