3. Ý nghĩa của đề tài
2.3.5.2.Xác định hàm lượng đạm tổng số trong lá bằng phương pháp Kjeldahl
Kjeldahl.
Chất đạm đã được vô cơ hóa nằm dưới dạng (NH4)2SO4 đem cho tác dụng với dung dịch NaOH 30 % sẽ giải phóng NH3.
Sau đó lượng NH3 được hơi nước lôi cuốn trong máy Parnas-Wargner và được dẫn đến một bình tam giác có chứa một lượng dư H2SO4. Từ đây cho phép xác định được lượng NH3 phóng thích ra, có nghĩa là xác định được lượng đạm có trong mẫu nguyên liệu.
Quá trình này gồm 3 giai đoạn:
Giai đoạn 1: Vô cơ hóa mẫu
Nguyên tắc: Tất cả các chất đạm có trong nguyên liệu dù nằm ở dạng nào (hữu cơ, vô cơ, protein) chuyển thành hợp chất vô cơ (NH4)2SO4 bằng cách đun sôi với H2SO4 đậm đặc và chất xúc tác.
Cách tiến hành:
Cân 100mg lá ngô đã sấy khô tuyệt đối cho vào bình Kjeldahl, cho tiếp 10ml H2SO4 đậm đặc. Thêm vào 200mg chất xúc tác (K2SO4 : CuSO4 3:1), lắc nhẹ, đậy kín để khoảng 3 phút. Đặt bình Kjeldahl lên bếp đun, đun cho đến khi dung dịch hoàn toàn trong suốt. Để nguội bình rồi chuyển toàn bộ dung dịch sang bình định mức100 ml, dùng nước cất vô đạm tráng lại bình Kjeldahl và định mức đến vạch.
Giai đoạn 2: Cất đạm
Chuyển 50ml dung dịch trong bình định mức ở trên vào bình cất đạm có sẵn 50ml nước cất và 3 giọt thuốc thử Tashiro, lúc này trong bình có màu tím hồng. Tiếp tục cho vào bình cất 20ml NaOH 40% cho đến khi toàn bộ dung dịch chuyển sang màu xanh lá mạ (thêm 5ml NaOH 40% nếu dung dịch trong bình chưa chuyển hết sang màu xanh lá mạ).
Tiến hành lắp hệ thống cất đạm, cho vào bình hứng 20ml H2SO4 0,1N và 3 giọt thuốc thử Tashiro (dung dịch có màu tím hồng). Đặt bình hứng sao cho ngập đầu ống sinh hàn. Bật công tắc cất đạm. Kiểm tra xem hơi ra từ đầu ống sinh hàn có làm xanh giấy quỳ không, nếu không thêm NaOH 40%.
Sau khi cất đạm 20-25 phút để kiểm tra xem NH4OH còn được tạo ra không, dùng giấy quỳ thử ở đầu ống sinh hàn. Nếu giấy quỳ không đổi sang màu xanh là được. Ngưng cất đạm, đợi hệ thống nguội mới đem đi rửa.
Giai đoạn 3: Chuẩn độ.
Chuẩn độ H2SO4dư trong bình hứng bằng NaOH 0.1N cho đến khi mất màu tím hồng và chuyển sang màu vàng cam (xanh lá mạ). Ghi nhận thể tích NaOH 0.1 N sử dụng.
Chất đạm
H2SO4 đậm đặc
Tính kết quả
Hàm lượng % nitơ tổng số được tính theo công thức