1.3.3.1. Phương pháp dùng axit sunfanilic và α-naphtylamin [15]
Nitrit ở trong mẫu được xác định bằng cách cho tác dụng với hỗn hợp axit sunfanilic và α-naphtylamin, phản ứng tạo ra hợp chất diazo màu đỏ. Sau đĩ đo độ
hấp thụ quang A ở bước sĩng λ = 540 nm. Tổng nitrat, nitrit trong mẫu được xác
định bằng cách cho thêm dung dịch EDTA và đệm amonị Sau đĩ cho chảy qua cột khử Cd - Cụ Ở đây nitrat bị khử về nitrit, sau đĩ nitrit được xác định bằng phương pháp quang phổ như trên. Độ thu hồi của phương pháp từ 95 - 105 %.
Giới hạn áp dụng phương pháp: 0,01 - 1 mgNO3- - N/l.
1.3.3.2. Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) [30]
Phương pháp này dựa trên việc tách nitrat, nitrit trên cột tách và được xác
định bằng detectơ UV. Hỗn hợp pha động là octyl amonium orthophotphat 0,01 M + metanol theo tỷ lệ 30 % (thể tích/thể tích) ở pH = 7, tốc độ bơm pha động là 0,8 ml/phút, thời gian phân tích cho một mẫu là 10 phút.
Đường chuẩn xác định nitrat, nitrit xây dựng trong khoảng 0,1 ÷ 100 µg/ml cĩ hệ số tương quan r = 0,999.
Độ thu hồi của phương pháp là 96,6 - 105,7 %.
1.3.3.3. Phương pháp dịng chảy [25]
Phương pháp dịng chảy (FIA) là một kĩ thuật phân tích động, trong đĩ mẫu phân tích ở dạng lỏng được bơm trực tiếp vào dịng chất mang chuyển động liên tục. Sau đĩ mẫu đi đến vịng phản ứng, tại đây chất phân tích sẽ phản ứng với thuốc thử cĩ trong chất mang để tạo ra sản phẩm cĩ thể phát hiện được theo một tính chất hố lý nào đĩ của nĩ nhờ một detector thích hợp.
Để xác định nitrat, nitrit bằng phương pháp FIA tiến hành hai thí nghiệm sau:
Thí nghiệm 1: Xác định hàm lượng NO2-
Trong mơi trường axit yếu ion NO2- phản ứng với thuốc thử sunfanylamin và N - (1 - Naphtyl) etylendiamin dihydroclorid một cách định lượng và tạo thành hỗn hợp diazo hấp thụ mạnh ở bước sĩng 540 nm. Nếu bơm mẫu phân tích vào FIA cĩ dịng chất mang chứa thuốc thử trên thì cĩ thể xác định được nồng độ NO2- trong mẫu nhờ detector hấp thụ quang UV-VIS ở bước sĩng 540 nm.
Thí nghiệm 2: Xác định tổng NO3- và NO2-
Bằng cách lắp thêm vào hệ FIA một cột khửđể khử ion NO3- về NO2- sau đĩ xác định tổng hàm lượng NO2- như thí nghiệm một. Hiệu số kết quả của cả hai lần
1.3.3.4. Phương pháp đo khí [56]
Đầu tiên nitrit được phân huỷ bằng Urê (CO(NH2)2) hoặc axit sunfamit (HSO3NH2) để tạo ra khí N2 trong mơi trường axit yếu, trong điều kiện này thì nitrat khơng tham gia phản ứng. Khí nitơ tạo ra được đo bằng một trắc đạm rất nhỏ.
Phản ứng xảy ra:
2KNO2 + CO(NH2)2 + 2HCl = 2N2 + CO2 + 3H2O + 2KCl KNO2 + HSO3NH2 = N2 + KHSO4 + H2O
Sau đĩ đun nĩng dung dịch và tạo mơi trường axit mạnh thì nitrat sẽ phản
ứng tạo thành khí N2O:
2KNO3 + CO(NH2)2 + 2HCl = 2N2O + CO2 + 3H2O + 2KCl KNO3 + HSO3NH2 + HCl = N2O + H2SO4 + H2O + KCl Khí N2 và N2O được giữ lại trong trắc đạm kế bằng dung dịch KOH trên 50 %. Các cơng trình nghiên cứu xác định đồng thời nitrit và nitrat được chỉ ra ở
bảng 1.5.
Bảng 1.5. Tổng hợp các cơng trình nghiên cứu xác định đồng thời nitrit và nitrat
TT Phương pháp xác định Đối tượng LOD TLTK NO2- NO3- 1 IC Mẫu thịt 300 µg/kg 500 µg/kg [55] 2 IC Mẫu nước biển 15 µg/l 7 µg/l [46] 3 HPLC/CD-CE Nước 0,05 mg/l 0,1 mg/l [39] 4 IEC/CD Nước (nước uống, nước thải…) 0,004 mg/l 0,002 mg/l [33] 5 HPLC/CD-CE hoặc UVD Nước thải 0,05 mg/l 0,1 mg/l [50] 6 IEC Nước (uống và nước thải) 0,4 mg/l 0,5 mg/l [27] 7 CIE/UVD Nước (uống, thải,…) 0,1 mg/l 0,08 mg/l [28] 8 UV-VIS với FIA Sữa và sản phẩm sữa 1 mg/kg 0,5 mg/kg [38]