5. Cỡ mẫu
6.3.Phương pháp xác định một số chỉ số hóa sinh
Nguyên tắc:
Glucose + ATP Glucose 6 phosphat + ADP Glucose 6 phosphat + NAD 6phosphogluconolacton +
NADH .H+
( HK: Hexokinase G6PDH: glucose 6 phosphatdehydrogenase ). Đo quang ở bước sóng 340 nm. Giá trị bình thường người lớn: 4,1 – 5,9 mmol/l
Giá trị bình thường trẻ em: 3,3 – 5,6 mmol/l
Phương pháp xác định nồng độ protein huyết thanh (Phản ứng Biuret)
Nguyên lý: Các liên kết peptid trong phân tử protein phản ứng với ion Cu++trong môi trường kiềm tạo thành phức hợp màu xanh tím, hấp thụ ánh sáng tại bước sóng 540 nm. Lượng ánh sáng hấp thu bởi phức hợp này tỷ lệ thuận với đậm độ màu tạo thành và tỷ lệ số lượng liên kết peptid mà nồng độ protein toàn phần trong huyết thanh tỷ lệ thuận với liên kết peptid. Do đó nồng độ protein toàn phần trong huyết thanh tỷ lệ thuận lượng ánh sáng hấp thụ.
Phương pháp định lượng albumin huyết thanh (Bromocresol green)
Nguyên lý: Albumin kết hợp với Bromocresol green tạo phức hợp màu xanh hấp thụ ánh sáng tại bước sóng 600nm. Đậm độ màu tạo thành tỷ lệ thuận với nồng độ albumin trong huyết thanh thử.
Phương pháp định lượng cholesterol huyết thanh (enzym so màu)
Nguyên lý: cholesterol trong mẫu bệnh phẩm được thuỷ phân dưới tác dụng của enzym cholesterol esterase tạo cholesterol tự do, cholesterol tự do bị oxy hoá nhờ enzym cholesterol oxydase và enzym peroxydase với sự có mặt của chất tạo màu aminoantipyrin tạo sản phẩm có màu hồng. Mật độ quang của sản phẩm tỷ lệ với nồng độ cholesterol trong bệnh phẩm và được đo ở bước sóng 546 nm.
G6PD HK
Cholesterol esterase + H2O Cholesterol + RCOOH
Cholesterol + O2 Cholest-4-en-3 one + H2O2
H2O2 + 4-aminophenazon + phenol
4-(p- benzoquinone-monoimino)-phenazon + H2O
Phương pháp định lượng triglycerid huyết thanh (enzym so màu)
Nguyên lý: TG được thuỷ phân dưới tác dụng của enzym lipoprotein lipase tạo glycerol. Phosphoryl hoá glycerol dưới tác dụng của enzym glycerokinase tạo glycero3- phosphat sau đó dưới tác dụng của enzym glycerol 3- phosphat oxydase và enzym peoroxidase cùng sự có mặt của chất tạo màu aminoantipyrin tạo sản phẩm màu hồng. Mật độ quang của sản phẩm tỷ lệ với nồng độ TG trong bệnh phẩm và được đo ở bước sóng 546nm.
Lipid Glycerol + acid béo
Glycerol + ATP Glycerol- 3-phosphat + ADP
Glycero-3-phosphat + O2 Dihydroxyaceton phosphat + H2O2 H2O2 + Aminoantipyrin + 4 chlorophenol Quinoneimine + HCl + 4 H2O
Phương pháp định lượng HDL-C huyết thanh (enzym so màu)
Nguyên lý: trong môi trường kiềm nhẹ, sulfat α- cyclodextrin và dextran sulfat phản ứng đặc hiệu và tạo dạng phức hợp hoà tan với LDL-C, VLDL, CM. Phần HDL- C còn lại được xác định bởi phản ứng enzym so màu, sử dụng enzym đặc hiệu PFG-Enzym (polyethylen glycerol).
Cholesterol esterase Cholesterol oxidase peoroxidase LP lipas Glycerol kinase Glycero-3-phosphat oxydase peoroxidase
CHƯƠNG 3III KẾT QUẢ
Kết quả nghiên cứu được trình bày theo ba nhóm chỉ tiêu:
- Nhóm các chỉ tiêu về hình thái
- Nhóm các chỉ tiêu về huyết học
- Nhóm các chỉ tiêu về hóa sinh