• Tectochrysin (PK1): C16H12O4, chất rắn vô định hình, màu vàng, đnc 160- 162oC (EtOAc-MeOH).
Rf = 0,50 (CH2Cl2:MeOH = 98:2), hiệu suất 0,011% (so với mẫu rễ khô). IR (KBr, ν, cm-1): 3073, 2850, 1666, 1609, 1493, 1346, 1162, 1038, 860. ESI-MS (positive ion): m/z 269,1 [M+H]+.
Số liệu phổ1
H- và 13C-NMR được đưa ra ởBảng 4.2.
• Pinostrobin (PK2): C16H14O4, tinh thể hình kim, không màu, đnc 98-100oC (CH2Cl2-EtOAc), [αD]25 = -25o (MeOH, c =1).
Rf = 0,55 (CH2Cl2:MeOH = 98:2), hiệu suất 0,004% (so với mẫu rễ khô). Số liệu phổ1
H- và 13C-NMR được đưa ra ởBảng 4.3.
• Pinobanksin (PK3): C15H12O5, chất rắn vô định hình, màu vàng, đnc 174- 176oC (CH2Cl2-MeOH), [αD]25 = +25o (MeOH, c =0,4).
Rf = 0,25 (CH2Cl2:MeOH = 98:2), hiệu suất 0,009% (so với mẫu rễ khô). IR (KBr, ν, cm-1): 3437, 3106, 2980, 1627, 1469, 1372, 1273, 1171, 1080, 997, 839.
ESI-MS (positive ion): m/z 273,1 [M+H]+. Số liệu phổ1
H- và 13C-NMR được đưa ra ởBảng 4.4.
• Galangin (PK4): C15H10O5, Chất rắn vô định hình, màu vàng, đnc 214- 216oC.
Rf = 0,30 (CH2Cl2: MeOH = 98:2), hiệu suất 0,006% (so với mẫu rễ khô). IR (KBr, ν, cm-1): 3507, 2895, 1621, 1511, 1372, 1272, 997, 824.
ESI-MS (positive ion): m/z 271,0 [M+H]+. Số liệu phổ1
H- và 13C-NMR được đưa ra ởBảng 4.5
(EtOAc), [αD]25 = -52o (MeOH, c =1,0).
Rf = 0,45 (CH2Cl2:MeOH = 98:2), hiệu suất 0,006% (so với mẫu rễ khô). IR (KBr, ν, cm-1): 3363, 2883, 1623, 1505, 1431, 1263, 1153, 1069, 985, 817. Số liệu phổ1
H- và 13C-NMR được đưa ra ởBảng 4.6.
• Cryptostrobin (PK6): C16H14O4, tinh thể hình kim, màu vàng, đnc 200- 201oC (EtOAc-MeOH), [αD]25 = -35o (MeOH, c =0,6).
Rf = 0,47 (CH2Cl2:MeOH = 98:2), hiệu suất 0,005% (so với mẫu rễ khô). IR (KBr, ν, cm-1): 3126, 2948, 1642, 1587, 1440, 1303, 1112, 988, 817. Số liệu phổ1
H- và 13C-NMR được đưa ra ởBảng 4.7.
3.1.3. Cặn chiết n-butanol (n-BuOH)
Khảo sát sơ bộ cho thấy phần lớn trong phân đoạn n-BuOH là các hợp chất dạng keo, tan trong hỗn hợp dung môi MeOH-H2O (1:1) nhưng lại khó tan trong dung môi khác. Trước khi tiến hành phân lập các chất, cặn chiết n-BuOH được chiết loại sơ bộ các tạp chất bằng cách hòa tan hoàn toàn cặn chiết bằng hỗn hợp dung môi MeOH-H2O (1:1), sau đó chiết với hỗn hợp CH2Cl2-EtOH (2:1), cất loại dung môi thu được 12g cặn chiết n-BuOH(E).
12g cặn n-BuOH(E) được tiến hành phân lập bằng sắc ký cột sephadex LH- 20 với dung môi giải hấp là MeOH thu được 6 phân đoạn, ký hiệu PKB1 → PKB6. Khảo sát các phân đoạn bằng sắc ký lớp mỏng cho thấy hầu hết các hợp chất chính của các phân đoạn đã được tìm thấy từ cặn chiết EtOAc, chỉ có phân đoạn PKB2 (4,6g) cho vết có Rf khác với các chất đã phân lập. Vì vậy, cặn này được chọn để
tiếp tục tiến hành tinh chế.
Phân đoạn PKB2 được tinh chế bằng sắc ký cột silicagel với hệ dung môi lần lượt là CH2Cl2-MeOH (9:1); CH2Cl2-MeOH-H2O (9:1:0,05); CH2Cl2-MeOH-H2O (9:1:0,1), thu được 10 phân đoạn PKB2.1→PKB2.10. Tiếp tục làm sạch phân đoạn PKB2.2 bằng sắc ký cột sephadex LH-20 với dung môi giải hấp là MeOH thu được 64mg chất PK7, dạng rắn, màu trắng.
Quá trình phân lập các hợp chất từ cặn chiết n-BuOH của rễ Thông lá dẹt
được thực hiện theo Sơđồ 3.3.
Sơđồ 3.3. Phân lập chất PK7 từ cặn chiết n-BuOHcủa rễ Thông lá dẹt
• Isolariciresinol (PK7): C20H24O6, chất rắn vô định hình, màu trắng, đnc 155- 157oC (CHCl3-MeOH), [αD]25 = +55o (MeOH, c =0,55).
Rf = 0,45 (CH2Cl2:MeOH:H2O = 9:1:0,2),hiệu suất tách 0,006% (so với mẫu rễ khô). (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
IR (KBr, ν, cm-1): 3453, 2934, 2863, 1721, 1606, 1514, 1457, 1273, 1023, 874.
HR-ESI-MS: m/z 383,1470 [M+Na]+ (tính toán cho công thức C20H24O6Na+ là 383,1471).
Cặn chiết n-BuOH (20g)
PKB1 PKB2 PKB3-6
1. Hòa tan trong MeOH-H2O (1:1) 2. Chiết với CH2Cl2-EtOH (2:1) 3. Cất loại dung môi
Cặn n-BuOH(E) (12g) CC, SiO2 1. CH2Cl2-MeOH (9:1) 2. CH2Cl2-MeOH-H2O (9:1:0,05) 3. CH2Cl2-MeOH-H2O (9:1:0,1) CC, Sephadex LH-20 MeOH PK7 (64mg) PKB2.1 PKB2.2 PKB2.3-2.10 CC, Sephadex LH-20 MeOH
Số liệu phổ1
H- và 13C-NMR được đưa ra ởBảng 4.8.
3.2. Loài Ngũ gia bì hương (Acanthopanax trifoliatus (L.) Merr.)
3.2.1. Phân lập các hợp chất từ loài Ngũ gia bì hương
3.2.1.1. Quá trình phân lập
Sơđồ 3.4. Quy trình chiết mẫuNgũ gia bì hương
Mẫu thân và lá loài Ngũ gia bì hương đã sấy khô (3,7kg), nghiền nhỏ được ngâm chiết bốn lần trong hỗn hợp MeOH-H2O (85:15) ở nhiệt độ phòng. Sau khi
Chiết với MeOH-H2O (85:15) (3 lần) Dịch nước còn lại 1. NaOH 4N, 80oC, 8h 2. HCl 1N 3. Chiết với CH2Cl2 (3 lần) Dịch CH2Cl2 Cất loại
dung môi Cặn ATC2 (50g) Dịch nước còn lại Chiết với CH2Cl2 (3 lần) Dịch CH2Cl2 Cất loại
dung môi Cặn ATC1 (55g)
Dịch nước còn lại Dịch MeOH
Cất loại dung môi Dịch nước
Chiết với n-hexane (3 lần)
Dịch n-hexane
Cất loại
dung môi Cặn n-hexane (32g)
Thân và lá
Ngũ gia bì hương
cất loại dung môi MeOH dưới áp suất giảm ở 40oC, dịch nước còn lại được chiết phân lớp lần lượt với n-hexane và CH2Cl2. Cất loại dung môi của các dịch chiết dưới áp suất giảm thu được các cặn chiết tương ứng, cặn n-hexane (32g) và cặn dichlorometan 1 (ATC1) (55g). Thủy phân dịch nước còn lại bằng dung dịch NaOH 4N trong EtOH ở 80oC trong 8h. Cất loại EtOH, acid hóa bằng HCl 1N, sau đó chiết với CH2Cl2. Cất loại dung môi dưới áp suất giảm được 50g cặn chiết dichlorometan 2 (ATC2) (Sơđồ 3.4).
Cặn chiết ATC1 (55g) được đưa lên cột silica gel giải hấp bằng hệ dung môi CH2Cl2-MeOH gradient MeOH từ 0 đến 100% thu được 20 phân đoạn ký hiệu ATC1.1→ATC1.20.
Từ phân đoạn 2 (ACT1.2) và phân đoạn 4 (ACT1.4) tiến hành sắc ký cột silica gel với dung môi giải hấp là CH2Cl2-EtOAc (80:20) thu được 8,2g chất AT1 và 7,8g chất AT2.
Từ phân đoạn 3 (ACT3) cũng tiến hành sắc ký cột silica gel với dung môi giải hấp là CH2Cl2-EtOAc (80:20) thu được 3 phân đoạn chính, ký hiệu ATC1.3.1
→ ATC1.3.3. Phân đoạn ACT1.3.2 được làm sạch lại bằng sắc ký cột pha đảo RP – 18 với hệ dung môi MeOH-H2O (80:20) thu được chất AT3 (42mg).
Tương tự tiến hành phân lập hai hợp chất AT1, AT2 từ cặn chiết ATC2 (50g) bằng sắc ký cột lặp lại với hệ dung môi thích hợp, đã phân lập được 1,2g AT1 và 1,4g AT2. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Như vậy, từ hai cặn chiết dichlorometan đã phân lập được hai chất có hàm lượng lớn AT1 (9,4g), AT2 (9,2g) và từ cặn chiết chưa thủy phân ACT1 đã phân lập được hợp chất AT3 (42mg).
Quá trình phân lập các hợp chất từ các cặn chiết CH2Cl2 của loài Ngũ gia bì hương được biểu diễn ởSơđồ 3.5
Sơđồ 3.5. Phân lập các hợp chất từ cặn chiết dichlorometan của loài Ngũ gia bì hương
AT2 (7,8g) Cặn chiết ATC1 (55g) ATC1.1 CC, SiO2 CH2Cl2-MeOH (100:0 → 0:100) CC, SiO2 CH2Cl2-EtOAc (80:20) AT1 (8,2g) AT2 (9,2g) ATC1.3.1 CC, RP-18 MeOH –H2O (80:20) AT3 (42mg)
ATC1.2 ATC1.3 ATC1.4 ATC1.5-1.20 CC, SiO2 CH2Cl2-EtOAc (80:20) CC, SiO2 CH2Cl2-EtOAc (80:20) ATC1.3.2 ATC1.3.3 AT1 (9,4g) AT1 (1,2g) AT2 (1,4g) CC, SiO2 CH2Cl2-EtOAc (80:20) CC, SiO2 CH2Cl2-EtOAc (80:20)
ATC2.2 ATC2.3 ATC2.4-2.15
ATC2.1
CC, SiO2
CH2Cl2-MeOH (100:0 →0:100)
Cặn chiết ATC2 (50g)
3.2.1.2. Dữ liệu phổ của các hợp chất phân lập được
• 24-nor-11α-hydroxy-3-oxo-lup-20(29)-ene-28-oic acid (AT1):C29H44O4, chất rắn vô định hình, màu trắng, đnc 182-184oC (EtOAc-MeOH), [αD]25 = +25o (MeOH, c = 0,38).
Rf = 0,5 (CH2Cl2:MeOH = 100:3),hiệu suất 0,26% (so với mẫu khô). ESI-MS (positive ion): m/z 479,2 [M+Na]+
ESI-MS (negative ion): m/z 455,5 [M-H]-. Số liệu phổ1
H- và 13C-NMR được đưa ra ởBảng 4.9.
• 24-nor-3α,11α dihydroxy-lup-20(29)-ene-28-oic acid (AT2): C29H46O4, chất rắn vô định hình, màu trắng, đnc 223-225oC (EtOAc-MeOH), [αD]25 = +16o (MeOH, c =0,52).
Rf = 0,35 (CH2Cl2:MeOH = 100:3),hiệu suất 0,25% (so với mẫu khô) ESI-MS (positive ion): m/z 481,1 [M+Na]+
ESI-MS (negative ion): m/z 457,4 [M-H]-. Số liệu phổ1
H- và 13C-NMR được đưa ra ởBảng 4.10.
• 11α,23-dihydroxy-3-oxo-lup-20(29)-ene-28-oic acid (AT3): C30H46O5, chất rắn vô định hình, màu trắng, đnc 218-220oC (EtOAc-MeOH), [αD]25 = +26o (MeOH, c =0,25).
Rf = 0,4 (CH2Cl2:MeOH = 100:3),hiệu suất 0,04 % (so với mẫu khô).
HR-ESI-MS: m/z 487,3424 [M+H]+ (tính toán lý thuyết cho công thức C30H46O5 là 487,3423).
Số liệu phổ1
H- và 13C-NMR được đưa ra ởBảng 4.11.
3.2.1.3. Tổng hợp các dẫn xuât của hai chất AT1, AT2
3.2.1.4. Tổng hợp các dẫn xuất của chất AT1
a. Tổng hợp các dẫn xuất ester của AT1
Các phản ứng tạo ester được thực hiện giữa nhóm hydroxyl ở C-11 của AT1 với một số acid anhydride như acetic anhydride, phthalic anhydride, glutaric anhydride, succinic anhydride.
24-nor-11α-acetoxy-3-oxo-lup-20(29)-ene-28-oic acid(AT4):
Hòa tan 1,465g (3,2mmol) chất AT1 trong hỗn hợp 5ml pyridine và 3ml acetic anhydride. Hỗn hợp được khuấy ở nhiệt độ phòng trong 24h. Sau đó cất loại pyridine và acetic anhydride dư dưới áp suất giảm thu được cặn rắn màu trắng. Cặn này được hòa tan trong CH2Cl2 và rửa bằng 10ml dung dịch HCl 5%, sau đó rửa 3 lần với nước, làm khan bằng Na2SO4, cất loại dung môi, sản phẩm thô được làm sạch bằng cột silicagel với hệ dung môi CH2Cl2: MeOH = 98:2 thu đuợc 1,35g chất (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
AT4 ở dạng rắn, màu trắng, hiệu suất 85%.
FT-IR (KBr): 3430, 2960, 1728, 1691, 1641, 1458, 1374, 1235, 1021, 894 ESI-MS (positive ion): m/z 521,4 [M+Na]+
ESI-MS (negative ion): m/z 497,4 [M-H]-.
24-nor-11α-O-phthalyl-3-oxo-lup-20(29)-ene-28-oic acid (AT5):
Hỗn hợp của 160mg (0,35mmol) hợp chất AT1, 200mg (1,64mmol) 4-DMAP và 260mg (1,75mmol) phthalic anhydride trong 10 ml pyridine được đun nóng ở 60oC trong 8h. Sau khi phản ứng kết thúc, để nguội đến nhiệt độ phòng, cho thêm nước và chiết 3 lần với EtOAc. Trung hòa dịch chiết bằng dung dịch HCl 1N, rửa lại với nước, làm khan và cất loại dung môi. Sản phẩm thô được tinh chế bằng cột silica gel với hệ
dung môi CH2Cl2: MeOH = 100:4 thu được 137mg chất AT5 ở dạng chất rắn màu trắng, hiệu suất 65%.
FT-IR (KBr): 3491, 2954, 1714, 1600, 1456, 1282, 1124, 1069, 889 cm-1. ESI-MS (positive ion): m/z 626,9 [M+Na]+.
ESI-MS (negative ion): m/z 603,4 [M-H]-.
1
4,80 (1H, s, H-29A); 4,64 (1H, s, H-29B); 3,05 (1H, s, H-19).
Tương tự AT5, các chất AT6 và AT7 được tổng hợp với các thông số của phản
ứng như sau:
Bảng 3.1. Các thông số của phản ứng chuyển hóa tạo AT6, AT7
Chất AT1 (mg/mmol) Acid anhydride (mg/mmol) Pyridine (ml) 4-DMAP (mg/mmol) LSP (mg) H (%)
AT6 160/0,35 glutaric anhydride 200/1,75
10 200/1,64 134 67
AT7 160/0,35 succinic anhydride 175/1,75
10 200/1,64 127 65
24-nor-11α-O-glutaryl-3-oxo-lup-20(29)-ene-28-oic acid (AT6):
ESI-MS (positive ion): m/z 593,0 [M+Na]+. ESI-MS (negative ion): m/z 569,3 [M-H]-.
1 H-NMR (300 MHz, CDCl3): δ 5,26 (1H, dt, J= 11,0 và 5,5 Hz, H-11); 4,75 (1H, s, H-29A); 4,61 (1H, s, H-29B); 2,97-3,04 (m, 1H, H-19); 1,67 (3H, s); 1,07 (3H, s); 1,04 (3H, s); 1,01 (3H, s). 13 C-NMR (75 MHz, CDCl3): δ 213,9; 182,1; 178,5; 171,8; 149,6; 110,5; 72,9; 56,2; 56,1; 53,2; 50,5; 48,7; 46,4; 44,9; 42,3; 42,2; 42,1; 42,0; 37,7; 37,3; 36,9; 36,8; 34,1; 33,5; 32,6; 31,9; 30,3; 29,4; 21,9; 19,9; 19,1; 16,8; 14,3; 12,2.
24-nor-11α-O-succinyl-3-oxo-lup-20(29)-ene-28-oic acid (AT7):
ESI-MS (negative ion):m/z 555,6 [M-H]-.
1 H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ 5,28 (1H, dt, J = 11,0 và 5,5 Hz, H-11); 4,74 (1H, s, H-29A); 4,60 (1H, s, H-29B); 3,00-2,96 (1H, m, H-19); 1,67 (3H, s); 1,07 (3H, s); 1,04 (3H, s); 1,04 (3H, s); 1,01 (3H, s); 0,99 (3H, d, J=6,5 Hz). 13 C-NMR (125 MHz, CDCl3): δ 214,2; 182,4; 178,0; 171,1; 149,5; 110,4; 73,3; 56,2; 53,3; 50,6; 48,8; 46,4; 44,9; 42,3; 42,2; 41,9; 37,7; 37,3; 36,9; 33,6; 32,5; 31,9; 30,4; 29,7; 29,4; 28,9; 21,8; 19,2; 16,8; 14,3; 13,9; 12,2.
b. Tổng hợp dẫn xuất dioxo của AT1
Nhóm hydoxyl ở vị trí C-11 của AT1 dễ dàng bị oxi hóa bởi tác nhân Jones - dung dịch chứa 200mg CrO3 trong 20ml H2SO4 20%. Quá trình oxi hóa được thực hiện bằng cách hòa tan 91mg hợp chất AT1 bằng 10ml acetone và cho từ từ vào tác nhân oxi hóa. Hỗn hợp phản ứng được khuấy ở nhiệt độ phòng trong 4h. Sau phản
ứng, cất loại dung môi dưới áp suất giảm, dịch còn lại được chiết bằng EtOAc (50ml). Rửa pha hữu cơ 3 lần với nước cất (3x20ml), làm khan bằng Na2SO4 và cất loại dung môi, tinh chế sản phẩm bằng cột silica gel với hệ dung môi n-hexane: EtOAc = 5: 1 thu được 60mg chất AT8 ở dạng chất rắn màu trắng, hiệu suất 67%.
24-nor-3,11-dioxo-lup-20(29)-ene-28-oic acid (AT8)
ESI-MS (positive ion): m/z 477,2 [M+Na]+ ESI-MS (negative ion): m/z 453,5 [M-H]-.
1 H-NMR (300 MHz, CDCl3, δ, ppm, J/Hz): 0,94 (3H, s); 0,98 (3H, d, J = 6,5 Hz); 1,21 (3H, s); 1,39 (3H, s); 1,69 (3H, s); 2,95-3,02 (1H, m); 4,66 (1H, s); 4,79 (1H, s). 13 C-NMR (75 MHz, CDCl3, δ, ppm): 11,4; 13,4; 14,5; 18,1; 19,5; 21,7; 29,1; 30,3; 31,8; 32,1; 35,8; 36,7; 37,4; 39,5; 39,6; 42,6; 44,0; 44,3; 44,9; 46,2; 48,8; 53,5; 56,2; 62,1; 110,8; 148,8; 181,7; 211,0; 213,2. c. Tổng hợp các dẫn xuất amide của AT1 (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Từ dẫn xuất AT4 và AT8 tiếp tục thực hiện phản ứng với các amine nhằm tạo ra các dẫn xuất amide.
• Chuyển hóa qua dẫn xuất AT4:
Methyl N-[24 – nor - 11α– acetoxy – 3 – oxo – lup - 20(29) – ene – 28 - oyl]-11- aminoundecanoate (AT9):
Hòa tan 49mg (0,1mmol) hợp chất AT4 vào hỗn hợp gồm 0,1ml oxalyl chloride trong 3ml CH2Cl2. Khuấy hỗn hợp phản ứng ở nhiệt độ phòng trong 48h. Cất loại CH2Cl2 và oxalyl chloride dư dưới áp suất giảm, chất rắn còn lại được hòa
tan bằng dung dịch chứa 50μl triethylamine trong 5ml CH2Cl2. Dung dịch thu được
đem nhỏ từ từ vào dung dịch chứa 64mg NH2(CH2)10COOCH3 (0,3mmol) trong 5ml CH2Cl2 và hỗn hợp phản ứng được khuấy 24 giờ ở nhiệt độ phòng. Sau khi phản
ứng kết thúc, thêm vào hỗn hợp sản phẩm 30ml CH2Cl2 rồi rửa với nước (3x20ml), làm khan bằng Na2SO4, cất loại dung môi. Tiếp tục tinh chế sản phẩm trên cột silicagel với hệ dung môi n-hexane : EtOAc = 4:1 thu được 59mg chất AT9 ở dạng chất rắn màu trắng, hiệu suất 85%.
ESI-MS (positive ion): m/z 718,6[M+Na]+ ESI-MS (negative ion): m/z 695,5 [M-H]-.
HR-ESI-MS: m/z 696,52031 [M+H]+ (tính toán lý thuyết cho công thức C43H70NO6 là 696,52031).
Tổng hợp tương tự AT9, các chất AT10, AT11, AT12 cũng được tạo thành từ phản ứng chuyển hóa AT4 với các tác nhân, tỉ lệ và hiệu suất phản ứng như ở
Bảng 3.2:
Bảng 3.2. Các thông số của phản ứng chuyển hóa tạo AT10 – AT12
Chất AT4 (mg/mmol) (COCl)2/ CH2Cl2 (ml/ml) Amine/CH2Cl2 (mmol/ml) (C2H5)3N/ CH2Cl2 (μg/mmol) LSP (mg) H (%) AT10 49/0,1 0,1/3 NH2(CH2)4CH3NH2 2/5 50/5 41 68 AT11 49/0,1 0,1/3 NH2(CH2)9NH2 2/5 50/5 46 72 AT12 49/0,1 0,1/3 NH2(CH2)3OH 0,3/10 50/5 37 67
N - [24-nor-11α-acetoxy-3-oxo - lup-20(29)-ene-28-oyl] - 1,5 - diaminohexane (AT10):
ESI-MS (positive ion): m/z 597,6 [M+H]+ ESI-MS (negative ion): m/z 595,3 [M-H]-.
1
H-NMR (500 MHz, CDCl3, δ, ppm, J/Hz): 0,91 (3H, d, J = 7,0 Hz); 0,99 (3H, d, J = 7,0 Hz); 1,07 (3H, s); 1,66 (3H, s); 1,97 (3H, s); 3,09-3,13 (1H, m);
3,15-3,25 (2H, m); 4,58 (1H, s); 4,74 (1H, s); 5,21-5,24 (1H, m); 5,72-5,76 (1H, m).
13
C-NMR (125 MHz, CDCl3, δ, ppm): 12,2; 14,2; 17,1; 19,5; 21,9; 22,0; 27,4; 29,3; 30,7; 31,5; 32,8; 33,7; 35,9; 37,4; 37,8; 38,3; 39,5; 42,0; 42,3; 42,4; 45,0; 46,2; 48,2; 49,7; 50,9; 53,3; 55,5; 72,9; 110,0; 150,1; 169,7; 175,7; 213,7.
N - [24-nor - 11α-acetoxy-3-oxo - lup-20(29)-ene-28-oyl] - 1,9-diaminononane (AT11)
IR (KBr, ν, cm-1): 3404, 2944, 2859, 1731, 1647, 1528, 1371, 1249, 1025, 885.
ESI-MS (positive ion): m/z 639,3 [M+H]+. ESI-MS (negative ion): m/z 637,7 [M-H]- .
HR-ESI-MS: m/z 639,51006 [M+H]+ (tính toán lý thuyết cho công thức C40H67N2O4 là639,51008). 1 H-NMR (300 MHz, CDCl3, δ, ppm, J/Hz): 0,99 (3H, d, J = 6,5 Hz); 1,00 (3H, s); 1,04 (3H, s); 1,07 (3H, s); 1,30 (3H, s); 1,67 (3H, s); 1,97 (3H, s); 4,58 (1H, s); 4,74 (1H, s); 5,23 (1H, dt, J = 11,0 và 5,5 Hz); 5,59 (1H, t, J = 4,5 Hz). 13 C-NMR (75 MHz, CDCl3, δ, ppm): 12,2; 14,1; 14,2; 17,0; 19,4; 21,9; 22,0; 26,8; 26,9; 29,2; 29,3; 29,5; 29,8; 30,7; 32,7; 33,3; 33,6; 33,7; 35,9; 37,4; 37,7; 38,3; 39,2; 42,0; 42,2; 42,3; 44,9; 46,2; 49,6; 50,7; 53,3; 55,4; 72,8; 109,9; 150,1; 169,7; 175,5; 213,8.
N - [24-nor-11α-acetoxy-3-oxo - lup-20(29)-ene-28-oyl] - 3-amino-1-propanol (AT12):
HR-ESI-MS: m/z 556,40021 [M+H]+ (tính toán lý thuyết cho công thức C34H54NO5là 556,40020). 1 H-NMR (500 MHz, CDCl3, δ, ppm, J/Hz): 0,99 (3H, d, J = 6,5 Hz); 1,00 (3H, s); 1,07 (6H, 2хs); 1,67 (3H, s); 1,98 (3H, s); 2,70-2,76 (1H, m); 3,02-3,07 (1H, m); 3,46 (2H, m); 3,69-3,70 (2H, m); 4,59 (1H, s); 4,74 (1H, s); 5,19 (1H, dt, J = 11,0 và 5,0 Hz); 6,20 (1H, t, J = 5,5 Hz).
13 C-NMR (125 MHz, CDCl3, δ, ppm): 12,2; 14,1; 14,2; 17,0; 19,4; 21,8; 22,0; 29,3; 30,6; 32,1; 32,8; 33,6; 33,7; 36,0; 36,7; 37,3; 37,7; 38,4; 42,0; 42,3; 42,5; 44,9; 46,1; 49,2; 50,9; 53,2; 55,8; 60,1; 73,1; 110,1; 149,9; 170,0; 177,1; 213,7. N-[24-nor-11α-acetoxy-3-oxo-lup-20(29)-ene-28-oyl]-3-amino-1-propanol acetate (AT13):
Dẫn xuất acetat AT13 là sản phẩm của quá trình acetyl hóa chất AT12 bằng acetic anhydride. Hòa tan 56mg (0,1mmol) chất AT12 trong hỗn hợp gồm 0,1ml acetic anhydide và 1ml pyridine. Hỗn hợp phản ứng được khuấy ở nhiệt độ phòng trong 12h. Cất loại dung môi dưới áp suất giảm, cặn rắn thu được được hòa tan bằng CH2Cl2 và trung hòa với dung dịch HCl 1N. Pha hữu cơđược rửa với nước (3 lần), làm khan và cất loại dung môi. Tinh chế sản phẩm thô trên sắc ký cột silica gel với hệ dung môi n-hexane : EtOAc = 4:1 thu được 52 mg chất AT13 ở dạng chất rắn màu trắng, hiệu suất 87%.
HR-ESI-MS: m/z 598,41075 [M+H]+ (tính toán lý thuyết cho công thức C36H56NO6 là 598,41076). 1 H-NMR (500 MHz, CDCl3, δ, ppm, J/Hz): 0,98 (3H, d, J = 6,5 Hz); 1,00 (3H, s); 1,04 (3H, s); 1,07 (3H, s); 1.67 (3H, s); 1,97 (3H, s); 2,08 (3H, s), 3,23-3,28 (1H, m), 3,32-3,37 (1H, m); 4,11-4,19 (2H, m); ,58 (1H, s); 4,74 (1H, s); 5,23 (1H, dt, J = 11,0 và 5,0 Hz); 6,01 (1H, t, J = 5,5 Hz). 13 C-NMR (125 MHz, CDCl3, δ, ppm): 12,2; 14,1; 14,2; 16,9; 19,4; 20,9, 21,8; 21,9; 28,9; 29,2; 30,6; 32,7; 33,5; 33,6; 35,8; 35,9; 37,3; 37,7; 38,2; 41,9; 42,2; 42,3; 44,9; 46,1; 49,6; 50,8; 53,2; 55,4; 62,0; 72,8; 109,9; 150,0; 169,6; 171,3; 175,8; 213,6.
• Chuyển hóa qua dẫn xuất AT8: (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Hỗn hợp của 91mg (0,2mmol) chất AT8 và 0,2 ml oxalyl chloride trong 10
ml CH2Cl2 được khuấy ở nhiệt độ phòng trong 48h. Cất loại CH2Cl2 và oxalyl chloride dư dưới áp suất giảm thu được cặn rắn khô. Hòa tan cặn này bằng dung dịch chứa 50μl triethylamine trong 5ml CH2Cl2. Dung dịch thu được được nhỏ từ từ
vào hỗn hợp gồm 390mg (3mmol) NH2(CH2)7NH2 trong 5ml CH2Cl2. Hỗn hợp phản ứng được khuấy ở nhiệt độ phòng trong 24h. Thêm vào hỗn hợp sản phẩm 30 ml CH2Cl2, rồi rửa với nước (3x20ml), làm khan bằng Na2SO4, cất loại dung môi thu được sản phẩm thô AT14.
Dẫn xuất AT14 sau khi tổng hợp được tiếp tục chuyển hóa với các tác nhân