L ỜI CẢM ƠN
2.3.3. định loại ấu trùng sán gây nhiễm cho mèo non
Phương pháp:
Dựa vào hình thái ấu trùng sán
Theo khóa phân loại ựược mô tả trong sổ tay phòng thắ nghiệm của dự
án FIBOZOPA
để phân loại ựược metacercaria, dựa vào ựặc ựiểm hình thái thu riêng những ấu trùng có hình dạng tương tự vào trong các ựĩa petri nhỏ.
Chuyển metacercaria sang lam kắnh, nhỏ một giọt nước muối sinh lý
0,86% ựậy lamen và quan sát hình thái chi tiết dưới kắnh hiển vi có ựộ phóng
ựại theo cấp ựộ tăng dần 4x10, 10x10, 40x10. Kắnh hiển vi có ựộ phóng ựại
phù hợp nhất ựể có thể ựịnh loại là 40x10.
đặc ựiểm chắnh sử dụng trong việc phân loại metacercariae như sau:
Giác miệng, giác bụng và tuyến xâm nhập.
Hầu, thực quản và ruột.
Tế bào lửa, túi bài tiết và lỗ bài tiết.
Mần sinh dục: tinh hoàn, buồng trứng, chất noãn hoàng, gonotyl, ống sinh dục và cơ quan tiếp nhận. Giác miệng Giác bụng Ruột Hầu Thành nang Túi bài tiết
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp
ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 30
Gai miệng, vỏ gai và stylets Phá nang ấu trùng metacercariae
Thường rất khó xác ựịnh ựến mức giống của ấu trùng metacercaria trong khi chúng vẫn ở dạng nang. Ép metacercaria giải phóng khỏi nang trứng ra ngoài, việc này có thể làm tăng khả năng quan sát các ựặc ựiểm hình thái,
ựặc biệt những ựặc ựiểm ựược mô tả dưới ựây, những ựặc ựiểm quan trọng trong phân loạị
Cách ựơn giản có thể thực hiện ựể phá nang ấu trùng metacercariae là ép cơ học. đôi khi ép rất nhẹ nang metacercaria dưới lam men với nước hoặc nước muối sinh lý có thể làm vỡ ựược nang của metacercariae hoặc có thể
làm vỡ nang với ựầu kim nhỏ thao tác dưới kắnh hiển vị
Gây nhiễm ựộng vật
Với một số trường hợp không thể ựịnh loại dựa vào hình thái ấu trùng thì cần gây nhiễm cho ựộng vật. Trong nghiên cứu này, ấu trùng metacercaria
của sán lá gan nhỏ C. sinensis thu trên cá mương Hemiculter leucisculus ựã
ựược gây nhiễm trên mèọ Việc gây nhiễm ựộng vật ựể xác nhận ấu trùng sán
lá gan nhỏ C. sinensis là cần thiết bởi giai ựoạn này không thể phân biệt ựược
ấu trùng sán lá gan C. sinensis và Ọ viverrini. Sán lá gan nhỏ trưởng thành có
thể phân biệt nhờ vào hình thái của tinh hoàn: C. sinensis có hình rễ cây trong khi tinh hoàn của Ọ viverrini phân thùỵ
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp
ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 31
Hình 2.1: Ấu trùng metacercariae của sán lá gan nhỏ C.sinensis
gây nhiễm cho mèo non
Mèo ựược chọn làm thắ nghiệm là mèo non ựãăn ựược cơm, mèo ựược
khoảng 1 tháng tuổị
Metacercariae ựược gây nhiễm cho mèo với liều 20 ấu trùng/mèọ
Kĩ thuật gây nhiễm mèo non (Dựa theo kĩ thuật gây nhiễm trên chuột
của Helle Kay và ctv, 2008)
Sử dụng kim gây nhiễm ựầu tròn lấy ấu trùng sán Clonorchis sinensis sau khi phân lập ựược từ cá.
Tay phải cầm kim có chứa ấu trùng sán, tay trái giữ mèo; ngón trỏ và ngón cái cầm chắc vào da phần gáy của mèo, ngón út kẹp chặt lấy ựuôi mèọ
Kéo nhẹ phắa ựầu mèo giữ chặt cốựịnh phắa ựuôi ựể sao cho mèo
ở tư thế thẳng nhất.
đưa nhẹ ựầu kim gây nhiễm vào miệng mèo, luồn qua hầu, thực quản ựến dạ dày và bơm hết dung dịch chứa metacercariae ra khỏi xi lanh.
Theo chu kì phát triển của sán lá gan nhỏ thì thời gian từ khi ăn phải ấu
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp
ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 32
ngàỵ Chắnh vì vậy sau 4 -5 tuần gây nhiễm, mèo sẽ ựược mổ ựể thu sán trưởng thành:
+ Mèo ựược gây mê bằng dung dịch ete trong cốc thủy tinh có chứa bông.
+ Mổ lấy toàn bộ gan của mèo và ựể trong ựĩa petri có chứa nước muối sinh lý 0,86%.
+ Rạch mở những ống mật ựể trùng tự do trở lại trong ựĩa, dùng Pippette lấy trùng ra, sử dụng kắnh hiển vi ựể phân loạị
+ đếm số lượng sán tìm ựược ở cá thể mèọ
Phương pháp xác ựịnh tỷ lệ nhiễm, cường ựộ nhiễm
Tổng số cá nhiễm metacercaria Tỷ lệ nhiễm (%) = x 100
Tổng số cá kiểm tra
Tổng sốấu trùng metacercaria tìm thấy Cường ựộ nhiễm trung bình
(ấu trùng/con) =
Số cá bị nhiễm