CHƯƠNG 6: XÂY DỰNG DẠNG PHỨC HỢP CỦA MURRAYAFOLINE
6.2.1. Điều chế tiểu phân liposome chứa murrayafoline A
Tiểu phân liposome chứa murrayafoline A đƣợc điều chế nhƣ sau: Hỗn hợp phospholipid và murrayafoline A (5/1 w/w) đƣợc hòa tan trong hệ dung môi CM (Cloroform : Methanol = 9/1 v/v) với nồng độ 10mg/ml. Một hỗn hợp lipid sử dụng để bọc là hệ DSPC/cholesterol/PEG2000 đƣợc hòa tan trong hệ CM rồi loại bỏ dung môi trong chân không. Lipid đƣợc hydrat hóa trong hệ đệm PBS (ph 7.0) với tỉ lệ 2,25 mg/ml ở 55 độ C và đƣợc khuấy trộn nhẹ nhàng. Các hạt liposome đƣợc tạo thành bằng cách siêu âm trong 1 phút, tiến hành 3 lần để thay đổi kích thước hạt.
Hình 6.6: Cơ chế hình thành liposome bởi quá trình hydrat hóa màng film
77
Hình 6.7: Mô phỏng cấu trúc liposome – murrayafoline a
Trong cấu trúc liposome tạo thành, các phân tử murrayafoline A có tính chất không phân cực (tan tốt trong pha dầu) nên sẽ nằm giữa lớp lipid kép.
Kích thước các hạt tạo thành, chỉ số PDI và thế Zeta của liposome được phân tích bằng nhiễu xạ tia laser trên máy Zetasizer Nano-Z (Malvern Instrments, Vương quốc Anh).
Hình thái và kích thước của các hạt liposome được xác định trên kính hiển vị điện tử quét 4800, Nhật Bản (SEM).
Kết quả:
Đặc tính của liposome được xác định thông qua các kích thước hạt, polydispersity index (PDI), và thế Zeta của liposome bọc Mu-A.
Hình 6.8: Thế Zeta của liposome
78
Hình 6.9: Sự phân bố kích thước các hạt liposome
Kích thước của liposome - Mu-A là từ 91,6 đến 144,3nm, như vậy kích thước trung bình của hạt bằng 117,0nm. Kích thước của liposome là một nhân tố quan trọng trong việc cung cấp hiệu quả của một tác nhân chống ung thƣ vào khối u. Nó đánh giá khả năng lưu thông và thời gian cư trú của liposome trong máu, sự tích lũy của các liposome trong khối u và trong phân phối thuốc vivo từ liposome..
Kích thước của liposome bọc Mu-A đã đạt được như mong đợi (4 – 400nm). Chỉ số polydispersity (PDI) là 0,299 ± 0,054, trong đó chỉ ra rằng các liposome có phân bố kích thước đồng nhất. Thế Zeta là một thước đo về độ lớn của lực đẩy tĩnh điện giữa các hạt và là một trong những yếu tố quan trọng ảnh hưởng đến sự ổn định của hệ liposome (Zhang et al Y, 2010.). Liposome bọc Mu-A đạt đƣợc sự ổn định với thế Zeta trong khoảng -33,2 ± 2,37mV.
Kết quả chụp SEM cho thấy kích thước các hạt liposome đạt cấu trúc nano.
Hình 6.10: Ảnh chụp SEM hạt liposome chứa Mu-A
79
`CHƯƠNG 7: CHUYỂN HÓA TẠO DẪN XUẤT MURRAYAFOLINE A 7.1. Chuyển hóa tạo dẫn xuất chứa nhóm triazole
Đối với vòng triazole, một loạt các tính chất dƣợc lý đã đƣợc chứng minh có liên quan đến vòng 1,2,3- và 1,2,4-triazole [28] trong đó bao gồm kháng khuẩn [108], [121], kháng nấm [93], [96], chống oxy hóa [44], chống ung thƣ [122], chống co giật [14], giảm đau [38], kháng virus [30], [31], và chống viêm [23], [109]. Gần đây, khả năng kháng khuẩn và chống nấm của dẫn xuất imidazole và 1,2,4-triazole thế ở vị trí nguyên tử nitơ trong vòng carbazole đã đƣợc báo cáo [129].
Dẫn xuất 1,2,3-triazole của murrayafoline A đƣợc hình thành trên cơ sở sử dụng phản ứng “Click” giữa hợp chất “Mu-A azit” với một ankin, sử dụng xúc tác đồng.
Cho đến nay, phản ứng Click sử dụng xúc tác đồng là một trong những phản ứng Click tốt nhất, phản ứng có tốc độ tăng lên rất nhiều từ 107 đến 108 so với phản ứng cộng 1,3-dipolar không sử dụng xúc tác. Nó diễn ra trong dải nhiệt độ rộng, không phụ thuộc nhiều môi trường nước, dải pH từ 4-12, và không ảnh hưởng đến nhiều loại nhóm thế. Sản phẩm tinh khiết có thể đƣợc phân lập đơn giản bằng cách lọc hoặc chiết mà không cần dùng sắc ký hay kết tinh lại. [111]
Sơ đồ 7.1: Quy trình chung tổng hợp 1,2,3 - triazole
Xúc tác hoạt động Cu(I) có thể tạo ra từ muối Cu(I) ví dụ nhƣ CuI và CuOTfãC6H6 hoặc Cu(II) sử dụng natri ascorbat nhƣ chất khử. Hơn nữa một lƣợng dƣ nhỏ natri ascorbat giúp tránh hình thành sản phẩm oxi hoá.
80
Tính toán nhiệt động học chỉ ra rằng sự kết hợp Cu(I) với ankin thu nhiệt trong dung môi MeCN, nhưng toả nhiệt trong nước, nó phù hợp việc quan sát thấy sự tăng tốc độ phản ứng trong nước. Tuy nhiên sự kết hợp của Cu với acetylene không tăng tốc độ phản ứng đóng vòng lƣỡng cực 1,3-. Thậm chí quá trình này còn kém thuận lợi hơn quá trình cộng đóng vòng lƣỡng cực 1,3- không xúc tác. Thay vào đó là dạng đồng axetylua, tiếp đó azide thay thế phối tử khác và liên kết với đồng. Sau đó, một vòng kim loại 6 cấu tử phức đồng Cu(II) đƣợc hình thành. Rào cản năng lƣợng cho quá trình này đã đƣợc tính toán thấp hơn đáng kể so với phản ứng không xúc tác. Sự đóng co vòng triazolyl-đồng tiếp theo là sự tách thay thế proton để tạo thành triazole và kết thúc chu kỳ xúc tác.
Sơ đồ 7.2: Cơ chế tạo 1,2,3 – triazole với xúc tác Cu(I) Phương pháp tổng hợp được trình bày trong sơ đồ sau:
81
Sơ đồ 7.3: Các bước tạo dãy chuyển hóa chứa nhóm 1,2,3-triazole của murrayafoline A
Các sản phẩm tạo thành đƣợc xác định cấu trúc bằng các dữ kiện phổ cộng hưởng từ hạt nhân và phổ khối lượng.
82