CHƯƠNG 6: XÂY DỰNG DẠNG PHỨC HỢP CỦA MURRAYAFOLINE
8.3. Hoạt tính sinh học các dạng bào chế của murrayafoline A
Các thử nghiệm đánh giá so sánh hoạt tính gây độc tế bào của mixen- murrayafoline A và murrayafoline A tự do đƣợc đánh giá trên dòng tế bào ung thƣ gan Hep-G2, so sánh với đối chứng elipticine. Kết quả đƣợc đánh giá dựa trên giá trị IC50.
Bảng 8.8: Giá trị IC50 của Mu-A tự do và mixen với dòng tế bào Hep-G2
Mu-A mixen Mu-A tự do Elipticine
19,94 3,97 0,97
Nhƣ vậy, chúng ta có thể thấy murrayafoline A dạng mixen (10%) vẫn duy trì đƣợc hoạt tính gây độc tế bào. Điều này rất có ý nghĩa đối với việc nghiên cứu sâu trên in vivo và tác dụng lâm sàng cho những giai đoạn tiếp theo.
8.3.2. Đánh giá hoạt tính sinh học của murrayafoline A dạng liposome 8.3.2.1. Hoạt tính in vitro
Các thử nghiệm đánh giá so sánh hoạt tính gây độc tế bào của Mu-A liposome và Mu-A tự do được xác định trên hai dòng tế bào ung thư ở người là ung thƣ sắc tố SK-MEL-2 và ung thƣ phổi SK-LU-1 . Các kết quả đƣợc trình bày trong bảng 2 và hình 2 cho thấy murrayafoline A dạng tự do và dạng liposome đều thể hiện hoạt tính gây độc tế bào trên cả hai dòng tế bào ung thƣ sắc tố SK-MEL-2 và ung thƣ phổi SK-LU-1.
Trong quá trình tổng hợp liposome Mu-A, sự PEG hóa (PEGgylation) đƣợc sử dụng có thể đã thay đổi đáng kể dƣợc lực và dƣợc động lực học của thuốc cũng nhƣ sự ổn định của hệ liposome. Crosasso và các cộng sự đã chứng minh đƣợc quá trình đào thải chậm hơn của thuốc khi đƣợc PEG hóa so với không PEG hóa. Đây
133
có thể là lý do ảnh hưởng đến hoạt tính của Mu-A liposome so với Mu-A tự do, yếu tố này đƣợc đánh giá thông qua thử nghiệm in vivo.
Bảng 8.9: IC50 của Mu-A dạng liposome và dạng tự do đối với các dòng tế bào SK-MEL-2 và SK-LU-1
Mẫu thử
IC50 values (àM)
SK-MEL-2 SK-LU-1
Liposome – Mu-A 9.69 ± 0.25 12.79±0.12
Mu-A 8.92± 0.16 10.67 ± 0.37
Ellipticine (chứng dương) 1.93 ± 0.14 2.49 ± 0.17
Hình 8.6: Đồ thị biểu thị sự ức chế tăng trưởng tế bào của Mu-A liposome và Mu-A tự do ở 20 mM
8.3.2.2. Hoạt tính in vivo
Hoạt tính kháng u của liposome-Mu-A đã đƣợc xác định ở chuột đƣợc gây khối u bởi dòng tế bào LLC. Các kết quả trình bày trong hình. 8.7 & 8.8 chỉ ra rằng liposome-Mu-A ức chế đáng kể sự phát triển của khối u sau 30 ngày thí nghiệm so sánh với Mu-A tự do, và đối chứng âm. Khối lƣợng khối u của nhóm điều trị Mu-A tự do và liposome - Mu-A là 6181,58 ± 398,92mm3 và 4280,25 ± 470,95mm3, tương ứng, so với 7.742,67 ± 473,54mm3 trong nhóm đối chứng âm (p <0,01).
Ngoài ra, trọng lƣợng cơ thể của chuột sử dụng liposome-Mu-A cũng đƣợc cải thiện, trong đó chỉ ra rằng các liposome-Mu-A làm giảm độc tính của thuốc.
0.00 20.00 40.00 60.00 80.00 100.00
LU SK-MEL-2
cell grow inhibition %
liposomes-loaded murrayafoline A murrayafoline A
134
Hình 8.7. Ảnh hưởng đến trọng lượng chuột khi sử dụng Mu-A liposome và Mu-A tự do
Hình 8.8: Sự tăng trưởng khối u sau khi điều trị với Mu-A tự do và Mu-A liposome.
Nhƣ chúng ta đã biết hiệu quả của một thuốc trong điều trị phụ thuộc vào sự hấp thu, phân bố, chuyển hóa và thải trừ. Hầu hết các hoạt chất và các dạng liposome đều nhanh chóng bị đào thải ra khỏi máu bởi hệ thống thực bào đơn nhân (MPS). Việc thêm PEG - một polimer có tính thấm linh hoạt - trong quá trình tổng hợp liposome Mu-A làm tăng đáng kể thời gian lưu thông của liposome trong máu.
Ngoài ra, liposome Mu-A với kích thước hạt 117,0±21,15nm có thể tích lũy trong mô khối u tốt hơn so với mô thường. Thời gian lưu thông trong máu kéo dài và tích lũy mô có chọn lọc đã làm tăng đáng kể hiệu quả điều trị của murayafoline A ở dạng liposome.
0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00
Innitiation Termination
body weigh (g)
Liposome-Mu- A Mu- A
negative control
0 1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000 9000
5 10 15 20 25 30
tumor volume (mm3)
day
negative control Mu- A
Liposome-Mu- A
135
Như vậy, Mu-A dạng liposome tăng cường đáng kể hoạt động kháng u so với Mu-A tự do (p<0,01) trong khi đó hoạt tính này không thể hiện đáng kể trên in vitro trên hai dòng tế bào SK-LU-1 và SK-Mel-2.