Sau khi tách chiết, các cặp mồi đặc hiệu cho vị trí đột biến β- thalassemia được sử dụng để khuyếch đại sản phẩm DNA. Kích thước của các sản phẩm PCR trong khoảng 200÷800 bp.
Kiểm tra chất lượng DNA bằng mồi nội chuẩn.
Sử dụng cặp mồi nội chuẩn để kiểm tra DNA có chứa đoạn gen HBB hay không. Hình 3.11 là hình ảnh kết quả kiểm tra DNA.
Mk 250 b07 b08 b10 b14 b22
1000 500
Hình 3.9. Kết quả kiểm tra chất lượng DNA bằng mồi nội chuẩn
Bước 1: Xác định sàng lọc đột biến trên bệnh nhân
Nhóm 5 bệnh nhân được xác định vị trí đột biến bằng kỹ thuật multiplex-PCR đã được chuẩn hóa quy trình. Kết quả xác định được 4 bệnh nhân đột biến
Hình 3.10. Hình ảnh sản phẩm PCR
Trong đó: (1), (3), (3), (4) là thang marker đột biến có kích thước tương ứng với các vị trí đột biếncó kích thước lần lượt từ tren xuống là 596 bp,506 bp, 344 bp, 303 bp, 172 bp.
Nhận xét: Trong 5 mẫu bệnh nhân xác định được 4 bệnh nhân bị đột biến bằng các cặp mồi sử dụng. Bệnh nhân mã số b22 cần xác định đột biến bằng cặp mồi khác.
Bước 2: Xác định đột biến đồng hợp hay dị hợp.
Sau khi biết bệnh nhân bị đột biến tại vị trí nào mà sử dụng cặp mồi đặc hiệu tại vị trí ấy để kiểm tra bệnh nhân đồng hợp tử hay dị hợp tử.
Hình 3.13 là kết quả chạy PCR bằng cặp mồi bình thường.
Hình 3.11. Kết quả xác định đột biến đồng hợp hay dị hợp.
Nhận xét:Kết quả lên rõ nét xác định các mẫu bệnh nhân đều bị đột biến dị hợp tử.