2.2. Nghiên cứu căn nguyên SARS
3.2.3. Quy trình tách chiết và tinh chế kháng nguyên tái tổ hợp của virus dengue từ chủng E. coli cho cả bốn typ virus dengue
3.3.1.6. Kết quả tách chiết và kiểm tra các plasmid tái tổ hợp từ E. coli
định, sau đó ly tâm thu tế bào. DNA plasmid đ−ợc tách chiết từ tế bào E. coli và kiểm tra bằng cắt với enzyme EcoRI. Vector pCR2.1 có hai vị trí cắt của enzyme này ở sát hai đầu mở vòng vì vậy khi xử lý vector tái tổ hợp với EcoRI
đoạn ADN đính chèn sẽ bị tách ra khỏi vector. Qui trình tiến hành phản ứng cắt
đã được nêu trong phần đối tượng và phương pháp nghiên cứu. Sau khi xử lý, sản phẩm cắt đ−ợc kiểm tra bằng điện di trên gel agarose 1%. Kết quả đ−ợc nêu trong các hình
M 1 2 3 1 M 2 3
Hình 3.16A. Cắt kiểm tra vector tái tổ hợp dengue type 1 bằng Eco RI
M: Thang DNA
1. Sản phẩm PCR D1-3
2. Vector pCR2.1 tái tổ hợp D1-3 3. Vector pCR2.1 tái tổ hợp D1-5
Hình 3.16B. Cắt kiểm tra vector tái tổ hợp dengue type 2 bằng Eco RI
M: Thang DNA
1. Vector pCR2.1 tái tổ hợp D2-3 2. Sản phẩm PCR D2-5
3. Vector pCR2.1 tái tổ hợp D2-5
1 2 M 3 4 M 1 2 3
Hình 3.16 C. Cắt kiểm tra vector tái tổ hợp dengue type 3 bằng EcoR I
M: Thang DNA
1. Sản phẩm PCR D3-3
2. Vector pCR2.1 tái tổ hợp D3-3 3. Vector pCR2.1 tái tổ hợp D3-5 4. Sản phẩm PCR D3-5
5
Hình 3.16D: Cắt kiểm tra vector tái tổ hợp dengue type 4 bằng EcoR I
M: Thang DNA
1. Sản phẩm PCR D4-5
2. Vector pCR2.1 tái tổ hợp D4-3 3. Vector pCR2.1 tái tổ hợp D4-5
Kết quả kiểm tra bằng xử lý với EcoRI ở các hình trên cho thấy, sau khi xử lý, các đoạn ADN tương ứng đều được tách ra từ vector với kích thước tương đương sản phẩm PCR. Riêng đối với trường hợp đoạn gen đầu 3’ của typ 3 (đường chạy số 2, hình 3.16 C), khi xử lý với EcoRI thấy 2 băng đ−ợc tách ra khỏi vector.
Nh− vậy có khả năng trên đoạn gen này có thêm một vị trí giới hạn của EcoRI.
Điều này cần đ−ợc kiểm chứng bằng giải trình tự ADN sau này.
3.3.1.7. Kết quả xác định trình tự
Để khẳng định chắc chắn việc tách dòng thành công trình tự PreM và E của dengue các type, chúng tôi tiến hành giải trình tự. Các dòng plasmid tái tổ hợp
được tinh sạch và xác định trình tự DNA theo phương pháp tổng hợp của Sanger và cộng sự, sử dụng bộ Kit xác định trình tự BigDye Terminator 3.1 và máy xác
định trình tự ABI 3100 Avant (Applied Biosystems, Mỹ).
Các trình tự hai đầu 5’ và 3’ của dengue các type:
ID D1-1 PCR PRELIMINARY; DNA; 1357 BP.
SQ SEQUENCE 1357 BP; 424 A; 306 C; 344 G; 283 T;
GACCATGCTC CTTATGCTGC TGCCCACAGC CTTGGCGTTT CATCTGACCA CACGAGGGGG AGAGCCGCAT ATGATAGTTA CCAAGCAGGA AAGAGGAAAG TCACTTTTGT TTAAGACCTC AGCTGGTGTC AACATGTGCA CCCTTATTGC GATGGATTTG GGAGAGTTAT GTGAGGACAC AATGACTTAC AAATGCCCTC GAATCACTGA GGCGGAACCA GATGACGTTG ATTGTTGGTG CAATGCCACA GACACATGGG TGACCTATGG AACGTGTTCC CAAACTGGCG AGCACCGACG AGACAAACGT TCCGTCGCAC TGGCCCCACA CGTGGGACTT GGTCTAGAAA CAAGAACCGA AACGTGGATG TCCTCTGAAG GCGCTTGGAA ACAAATACAA AGAGTGGAGA CTTGGGCCCT GAGACATCCA GGATTCACAG TGATAGCCCT TTTTCTAGCA CATGCCATAG GAACATCCAT CACCCAGAAA GGGATTATTT TCATCTTGTT GATGCTGGTA ACACCATCCA TGGCCATGCG ATGTGTGGGA ATAGGCAACA GGGACTTCGT GGAAGGACTG TCAGGAGCAA CGTGGGTAGA TGTGGTACTG GAACATGGAA GTTGCGTCAC CACCATGGCA AAAGATAAAC CAACATTGGA CATTGAACTC TTGAAGACGG AAGTCACAAA CCCTGCCGTC CTGCGCAAAC TGTGCATCGA AGCTAAAATA TCAAACACCA CCACCGATTC AAGATGTCCA ACACAAGGAG AAGCCACACT GGTGGAAGAA CAAGACGCGA ATTTTGTGTG TCGACGAACG TTTGTGGACA GAGGCTGGGG CAATGGCTGT GGGCTTTTCG GAAAAGGTAG CCTAATAACG TGTGCTAAGT TCAAGTGTGT GACAAAACTG GAAGGAAAGA TAGTTCAATA TGAAAACTTG AAATATTCAG TAATAGTCAC CGTCCACACT GGAGACCAGC ACCAGGTGGG AAATGAAAGC ACAGAACATG GGACAACAGC AACTATAACA CCTCAAGCTC CCACGTCGGA AATACAGCTG ACCGACTACG GAGCTCTTAC ATTGGATTGC TCACCTAGAA CAGGACTAGA CTTCAATGAA ATGGTGTTGT TGACAATGAA AGAAAAATCA TGGCTAGTCC ACAAACAATG GTTTCTAGAC TTACCACTGC CTTGGACCTC GGGAGCTACA ACGTCACAAG AGACTTGGAA CAGACAAGAT TTGCCGGTAA CATTTAAGAC AGCTCATGCA AAGAAGCAGG AAGTAGTCGT ACTAGGATCA CAAGAAGGAG CAATGCACAC TGCGTTGACC GGAGCGACAG AAATCCAAAC GTCTGGA
//
Hình 3.73A. Kết quả xác định trình tự đoạn D1-5. Vùng chữ in đậm và nghiêng là vị trí cắt của enzyme Dra III.
ID D1-2 PCR PRELIMINARY; DNA; 1393 BP.
SQ SEQUENCE 1393 BP; 449 A; 270 C; 368 G; 306 T;
CGTTTGTGGA CAGAGGCTGG GGCAATGGCT GTGGGCTTTT CGGAAAAGGT AGCCTAATAA CGTGTGCTAA GTTCAAGTGT GTGACAAAAC TGGAAGGAAA GATAGTTCAA TATGAAAACT TGAAATATTC AGTAATAGTC ACCGTCCACA CTGGAGACCA GCACCAGGTG GGAAATGAAA GCACAGAACA TGGGACAACA GCAACTATAA CACCTCAAGC TCCCACGTCG GAAATACAGC TGACCGACTA CGGAGCTCTT ACATTGGATT GCTCACCTAG AACAGGACTA GACTTCAATG AAATGGTGTT GTTGACAATG AAAGAAAAAT CATGGCTAGT CCACAAACAA TGGTTTCTAG ACTTACCACT GCCTTGGACC TCGGGAGCTA CAACGTCACA AGAGACTTGG AACAGACAAG ATTTGCCGGT AACATTTAAG ACAGCTCATG CAAAGAAGCA GGAAGTAGTC GTACTAGGAT CACAAGAAGG AGCAATGCAC ACTGCGTTGA CCGGAGCGAC AGAAATCCAA ACGTCTGGAA CGACAAAAAT TTTTGCAGGA CACTTGAAAT GTAGACTAAA AATGGACAAA CTGACTCTAA AAGGGATGTC ATATGTGATG TGCACAGGCT CATTCAAGCT AGAGAAAGGG GTGGCTGAGA CCCAGCATGG AACCGTTCTA GTGCAGGTTA AATACGAAGG AACAGATGCA CCATGCAAGA TCCCTTTTTC AACCCAAGAT GAAAAAGGAG TAATCCAGAA TGGGAGAGTG ATAACAGCCA ACCCTATAGT CACTGACAAG GAAAAACCAG TCAACATTGA GGCAGAACCA CCTTTTGGTG AGAGTTACAT CGTGGTAGGA GCAGGTGAAA AAGCTTTGAA ACTAAGCTGG TTCGAGAAAG GAAGCACCAT AGGGAAAATG TTTGAGGCAA CTGCCCGAGG AGCACGAAGG ATGGCCATAC TGGGAGACAC CGCATGGGAC TTTGGTTCTA TAGGAGGAGT GTTCACATCT GTGGGAAAAT TAGTGCATCA GATTTTTGGA ACTGCATATG GAGTTTTGTT CAGCGGTGTT TCCTGGACTA TGAAAATAGG AATAGGGGTT CTGCTGACAT GGCTAGGATT AAACTCAAGG AGCACGTCCC TTTCGATGAC GTGCATTGCA GTTGGCCTGG TAACACTGTA CCTAGGAGTC ATGGTTCAGG CGGATTCGGG ATGTGTAATT AATTGGAAAG GCAGAGAACT CAAATGTGGA AGTGGCATTT TTGTCACCAA TGAAGTTCAC ACTTGGACAG AGCAATACAA ATTTCAGGCT GACTCCCCAA AGAGACTATC AGCAGCCATC GGGAAGGCAT GGGAGGAGGG TGTGTGTGGA ATTCGATCAG CCACTCGTCT CGA
//
Hình 3.17B. Kết quả xác định trình tự đoạn D1-3. Vùng chữ in đậm và nghiêng là vị trí cắt của enzym Dra III.
ID D2-5_C4 PRELIMINARY; DNA; 1387 BP.
SQ SEQUENCE 1387 BP; 466 A; 294 C; 347 G; 280 T;
GCTGAACATC TTGAACAGGA GACGCAGAAC TGCAGGCATG ATCATTATGC TGATTCCAAC AGTGATGGCG TTCCATTTAA CCACACGTAA CGGAGAACCA CACATGATCG TCAGTAGACA AGAGAAAGGG AAAAGTCTTC TGTTTAAAAC AGAGGATGGT GTGAACATGT GTACCCTCAT GGCCATGGAC CTTGGTGAAT TGTGTGAAGA TACAATCACG TACAAGTGTC CTTTTCTCAA GCAGAATGAA CCAGAAGACA TAGATTGTTG GTGCAACTCT ACGTCCACAT GGGTAACTTA TGGGACGTGT ACCACCACAG GAGAACACAG AAGAGAAAAA AGATCAGTGG CACTCGTTCC ACATGTGGGA ATGGGACTGG AGACACGAAC TGAAACATGG ATGTCATCAG AAGGGGCCTG GAAACATGCC CAGAGAATTG AAACTTGGAT CTTGAGACAT CCAGGCTTTA CCATAATGGC AGCAATCCTG GCATACACCA TAGGAACGAC ACATTTCCAA AGAGCCCTGA TTTTCATCTT ACTGACAGCT GTCGCTCCTT CAATGACAAT GCGTTGCATA GGAATATCAA ATAGAGACTT TGTAGAAGGG GTTTCAGGAG GAAGCTGGGT CGACATAGTC TTAGAACATG GAAGCTGTGT GACGACGATG GCAAAAAACA AACCAACATT GGATTTTGAA CTGATAAAAA CAGAAGCCAA ACAACCTGCC ACTCTAAGGA AGTACTGTAT AGAGGCAAAG CTGACCAACA CAACAACAGA TTCTCGCTGC CCAACACAAG GAGAACCCAG CCTAAATGAA GAGCAGGACA AAAGGTTCGT CTGCAAACAC TCCATGGTGG ACAGAGGATG GGGAAATGGA TGTGGACTAT TTGGAAAAGG AGGCATTGTG ACCTGTGCTA TGTTCACATG CAAAAAGAAC ATGAAAGGAA AAGTCGTGCA ACCAGAAAAC TTGGAATACA CCATTGTGAT AACACCTCAC TCAGGGGAAG AGCATGCAGT CGGAAATGAC ACAGGAAAAC ATGGCAAGGA AATCAAAATA ACACCACAGA GTTCCATCAC AGAAGCAGAG TTGACAGGCT ATGGCACTGT CACGATGGAG TGCTCTCCGA GAACGGGCCT CGACTTCAAT GAGATGGTGT TGCTGCAAAT GGAAAATAAA GCTTGGCTGG TGCACAGGCA ATGGTTCCTA GACCTGCCGT TGCCATGGCT GCCCGGAGCG GACACACAAG GATCAAATTG GATACAGAAA GAGACATTGG TCACTTTCAA AAATCCCCAT GCGAAGAAAC AGGATGTTGT TGTTTTGGGA TCCCAAGAAG GGGCCATGCA CACAGCACTC ACAGGGGCCA CGGAAATCCA GATGTCA
//
Hình 3.73 C. Kết quả xác định trình tự đoạn D2-5. Vùng chữ in đậm và nghiêng là vị trí cắt của enzyme Taq I.
ID D2-3_C8 PRELIMINARY; DNA; 1480 BP.
SQ SEQUENCE 1480 BP; 492 A; 297 C; 372 G; 319 T;
CAAAGCTGAC CAACACAACA ACAGCATCTC GCTGCCCAAC ACAAGGAGAA CCTAGCCTAA ATGAAGAACA GGACAAAAGA TTTGTCTGCA AACACTCCAT GGTAGACAGA GGATGGGGAA ATGGATGCGG ATTATTTGGA AAGGGAGGCA TCGTGACCTG TGCAATGTTC ACATGCAAAA AGAACATGGA AGGAAAAGTC GTGCAACCAG AAAACTTGGA GTACACCATT GTGATAACAC CTCACTCAGG GGAAGAGAAT GCAGTCGGAA ATGACACAGG AAAACACGGC AAGGAAATTA AAGTAACACC ACAGAGTTCC ATCACAGAAG CAGAACTAAC AGGCTATGGC ACTGTCACGA TGGAATGCTC TCCGAGAACG GGCCTCGACT TCAATGAGAT GGTGTTGCTG CAAATGGAAA ACAAGGCTTG GCTGGTGCAC AGGCAATGGT TCTTAGACCT GCCGTTACCA TGGCTGCCCG GAGCAGACAC ACAAGGATCA AATTGGATAC AGAAGGAGAC ATTGGTCACT TTCAAAAATC CCCATGCAAA GAAACAGGAT GTTGTTGTTT TAGGATCCCA AGAAGGGGCT ATGCATACAG CACTCACAGG GGCCACGGAA ATCCAGATGT CATCAGGAAA CTTACTGTTC ACAGGACATC TTAAGTGCAG GCTGAGAATG GACAAACTAC AGCTCAAAGG AATGTCATAT TCTATGTGTA CAGGAAAGTT TAAAGTTGTG AAGGAAATAG CAGAAACACA ACATGGAACA ATAGTTATCA GAGTACAATA TGAAGGGGAC GGTTCTCCGT GCAAGATCCC TTTTGAAATA ATGGATTTGG AAAAAAGACA TGTCTTAGGT CGCTTGATTA CAGTCAACCC AATTGTTACA GAAAAAGACA GCCCAGTCAA CATAGAAGCA GAACCTCCAT TCGGAGACAG CTACATCATT ATAGGAGTAG AACCGGGACA ACTGAAGCTC AGCTGGTTTA AGAAAGGAAG TTCTATTGGC CAAATGTTTG AGACAACAAT GAGAGGAGCG AAGAGAATGG CCATTTTAGG TGACACAGCT TGGGATTTTG GATCCCTGGG AGGAGTGTTC ACATCTATAG GAAAGGCCCT CCACCAAGTC TTTGGAGCAA TCTATGGGGC TGCCTTCAGT GGGGTTTCAT GGACTATGAA AATCCTCATA GGAGTCGTCA TCACATGGAT AGGAATGAAT TCACGCAGCA CCTCACTGTC TGTGTCACTA GTATTAGTGG GGGTCGTGAC ATTATATTTG GGAGTTATGG TGCAGGCCGA TAGTGGCTGC GTTGTGAGTT GGAAAAACAA AGAACTGAAA TGTGGCAGTG GGATTTTTAT CACAGACAAC GTGCACACAT GGACAGAACA ATACAAATTC CAACCAGAAT CCCCTTCAAA GCTGGCTTCA GCTATCCAGA AGGCTCATGA AGAGGGCATT TGTGGAATCC GCTCAGTAAC
//
Hình 3.73D. Kết quả xác định trình tự đoạn D2-3. Vùng chữ in đậm và nghiêng là vị trí cắt của enzym
ID D3-5 c25 PRELIMINARY; DNA; 1458 BP.
SQ SEQUENCE 1458 BP; 448 A; 316 C; 376 G; 318 T;
CCTCAGATTT CTAGCCATTC CACCGACAGC AGGAGTCTTG GCTAGATGGG GTACCTTTAA GAAGTCGGGG GCTATTAAGG TCTTAAAAGG CTTCAAGAAG GAGATCTCAA ACATGCTGAG CATTATCAAC AAACGGAAAA AGACATCGCT CTGTCTCATG ATGATGTTAC CAGCAACACT TGCTTTCCAC TTAACTTCAC GAGATGGAGA GCCGCGCATG ATTGTGGGGA AGAATGAAAG AGGAAAATCC CTACTTTTTA AGACAGCCTC TGGAATCAAC ATGTGCACAC TCATAGCCAT GGATTTGGGA GAGATGTGTG ATGACACGGT CACTTACAAA TGCCCCCACA TTACCGAAGT GGAGCCTGAA GACATTGACT GCTGGTGCAA CCTTACATCG ACATGGGTGA CTTATGGAAC ATGCAATCAA GCTGGAGAGC ATAGACGCGA TAAGAGATCA GTGGCGTTAG CTCCCCATGT CGGCATGGGA CTGGACACAC GCACTCAAAC CTGGATGTCG GCTGAAGGAG CTTGGAGACA AGTCGAGAAG GTAGAGACAT GGGCCCTTAG GCACCCAGGG TTTACCATAC TAGCCCTATT TCTTGCCCAT TACATAGGCA CTTCCTTGAC CCAGAAAGTG GTTATTTTTA TACTATTAAT GCTGGTTACC CCATCCATGA CAATGAGATG TGTGGGAGTA GGAAACAGAG ATTTTGTGGA AGGCCTATCG GGAGCCACGT GGGTTGACGT GGTGCTCGAG CACGGTGGGT GTGTGACTAC CATGGCTAAG AACAAGCCCA CGCTGGACAT AGAGCTTCAG AAGACCGAGG CCACCCAACT GGCGACCCTA AGGAAGCTAT GCATTGAGGG AAAAATTACC AACATAACAA CCGACTCAAG ATGTCCCACC CAAGGGGAAG CGATTTTACC TGAGGAGCAG GACCAGAACT ACGTGTGTAA GCATACATAC GTGGACAGAG GCTGGGGAAA CGGTTGTGGT TTGTTTGGCA AGGGAAGCTT GGTGACATGC GCGAAATTTC AATGTTTAGA ATCAATAGAG GGAAAAGTGG TGCAACATGA GAACCTCAAA TACACCGTCA TCATCACAGT GCACACAGGA GACCAACACC AGGTGGGAAA TGAAACGCAG GGAGTTACGG CTGAGATAAC ATCCCAGGCA TCAACCGCTG AAGCCATTTT ACCTGGATAT GGAACCCTCG GGCTAGAATG CTCACCACGG ACAGGTTTGG ATTTCAATGA AATGATTTTA TTGACAATGA AGAACAAAGC ATGGATGGTA CATAGACAAT GGTTCTTTGA CTTACCCCTA CCATGGACAT CAGGAGCTAC AACAGAAACA CCAACTTGGA ACAGGAGAGA GCTTCTTGTG ACATTTAAAA ATGCACATGC AAAAAAGCAA GAAGTAGTTG TCCTTGGATC ACAAGAGGGA GCAATGCA
//
Hình 3.17.E. Kết quả xác định trình tự đoạn D3-5. Vùng chữ in đậm và nghiêng là vị trí cắt của enzyme Dra III.
ID D3-3 c154 PRELIMINARY; DNA; 1552 BP.
SQ SEQUENCE 1552 BP; 502 A; 313 C; 406 G; 330 T; 1 OTHER;
AAGCCCACGC TGACATAGAG CTTCAGAAGA CCGAGGCCAC CCAACTGGCG ACCCTAAGGA AGCTATGCAT TGAGGGAAAA ATTACCAACA TAACAACCGA CTCAAGATGT CCCACCCAAG GGGAAGCGAT TTTACCTGAG GAGCAGGACC AGAACTACGT GTGTAAGCAT ACATACGTGG ACAGAGGCTG GGGAAACGGT TGTGGTTTGT TTGGCAAGGG AAGCTTGGTG ACATGCGCGA AATTTCAATG TTTAGAATCA ATAGAGGGAA AAGTGGTGCA ACATGAGAAC CTCAAATACA CCGTCATCAT CACAGTGCAC ACAGGAGACC AACACCAGGT GGGAAATGAA ACGCAGGGAG TTACGGCTGA GATAACATCC CAGGCATCAA CCGCTGAAGC CATTTTACCT GGATATGGAA CCCTCGGGCT AGGATGCTCA CCACGGACAG GTTTGGATTT CAATGAAATG ATTTTATTGA CAATGAAGAA CAAAGCATGG ATGGTACATA GACAATGGTT CTTTGACTTA CCCCTACCAT GGACATCAGG AGCTACAACA GAAACACCAA CTTGGAACAG GAGAGAGCTT CTTGTGACAT TTAAAAATGC ACATGCAAAA AAGCAAGAAG TAGTTGTCCT TGGATCACAA GAGGGAGCAA TGCATACAGC ACTGACAGGA GCTACAGAGA TCCAAACCTC AGGAGGCACA AGTATTTTGC GGGCACTTAA AATGTAGACT CAAGATGGAC AAATTGGAAC TCAAGGGGAT GAGCTATGCA ATGTGCTTGA ATACCTTTGT GTTGAAGAAA GAAGTCTCCG AAACGCAGCA TGGGACAATA CTCATTAAGG TTGAGTACAA AGGGGAAGAT GCACCCTGCA AGATTCCTTT CTCCACGGAG GATGGACAAG GGAAAGCTCA CAATGGCAGA CTGATCACAG CCAATCCAGT GGTGACCAAG AAGGAGGAGC CTGTCAACAT TGAGGCTGAA CCTCCTTTTG GGGAAAGTAA TATAGTAATT GGAATTGGAG ACAAAGCCCT GAAAATCAAC TGGTACAGGA AGGGAAGCTC GATTGGGAAG ATGTTCGAGG CCACTGCCAG AGGTGCAAGG CGCATGGCCA TCTTGGGAGA CACAGCCTGG GACTTTGGAT CAGTGGGTGG TGTTTTGAAT TCATTAGGGA AAATGGTCCA CCAAATATTT GGGAGTGCTT ACACAGCCCT ATTTAGTGGA GTCTCCTGGA TAATGAAAAT TGGAATAGGT GTCCCCTTAA CCTGGATAGG GTTGAATTCA AAAAACACTT CTATGTCATT TTCATGCATT GCGATAGGAA TCATTACACT CTATCTGGGA GTCGTGGTGC AAGCTGACAT GGGGTGTGTC ATAAACTGGA AAGGCAAAGA ACTCAAATGT GGAAGTGGAA TTTTCGTCAC TAATGAGGTC CACACCTGGA CAGAGCAATA CAAATTTCAA GCAGACTCCC CCAAAAGACT GGCAACAGCC ATTGCAGGCG CNTGGGAGAA TGGAGTGTGC GGAATTAGGT CAACAACCAG AA
//
Hình 3.17F. Kết quả xác định trình tự đoạn D3-3. Vùng chữ in đậm và nghiêng là vị trí cắt của enzyme Dra III.
ID D4-5PCRSQ PRELIMINARY; DNA; 1304 BP.
SQ SEQUENCE 1304 BP; 393 A; 264 C; 359 G; 288 T;
CTGTGCTTGA TTCCCACCGT AATGGCGTTT CACTTGTCAA CCAGAGATGG CGAACCCCTT ATGATAGTGG CAAAACACGA AAGGGGGAGA CCTCTCTTGT TTAAGACAAC AGAGGGAATC AACAAATGCA CTCTTATTGC CATGGACCTG GGTGAAATGT GTGAGGACAC CGTCACGTAT GAATGCCCTC TACTGGTCAA TACCGAACCT GAGGACACTG ATTGCTGGTG CAATCTCACG TCTACCTGGG TCATGTATGG GACATGCACT CAGAGTGGGG AACGGAGACG GGAGAAGCGC TCAGTAGCCC TAACACCACA TTCAGGAATG GGATTGGAGA CAAGGGCTGA GACATGGATG TCATCGGAAG GGGCTTGGAA ACATGCTCAG AGGGTAGAGA GTTGGATACT CAGAAACCCA GGATTCGCTC TCTTGGCAGG ATTTATGGCC TATATGATTG GGCAAACAGG AATCCAGCGA ACAGTCTTCT TTGTTCTAAT GATGCTGGTC GCCCCATCCT ACGGAATGCG ATGCGTGGGA GTGGGGAACA GAGACTTTGT GGAAGGAGTC TCAGGTGGAG CATGGGTCGA TTTGGTGCTA GAACATGGAG GATGTGTCAC AACCATGGCC CAGGGAAAAC CAACCTTGGA TTTTGAACTG ATCAAGACAA CAGCCAAGGA AGTGGCTCTG TTAAGAACCT ATTGCATTGA AGCCTCGATA TCAAACATAA CCACAGCAAC AAGATGTCCA ACGCAAGGAG AACCTTATCT CAAAGAGGAA CAAGATCAAC AGTACATTTG CCGGAGAGAT GTGGTAGACA GAGGGTGGGG CAATGGCTGT GGCTTGTTTG GGAAAGGAGG AGTTGTGACA TGTGCGAAGT TTTCATGCTC GGGGAAGATA ACAGGCAATT TGGTCCAAAT TGAGAACCTT GAATACACAG TAGCTGTAAC AGTCCACAAT GGAGACACCC ATGCAGTAGG AAATGACATA CCCAACCATG GAGTGACAGC CACGATAACC CCCAGGTCAC CATCGGTAGA AGTTAAATTA CCGGATTATG GAGAATTAAC ACTCGATTGT GAACCCAGGT CCGGAATTGA TTTTAATGAG ATGATTCTGA TGAAAATGAA AAAGAAAACG TGGCTTGTGC ACAAGCAATG GTTTTTGGAT CTACCTCTAC CATGGGCAGC AGGAGCAGAC ACATCAGAAG TTCATTGGAA TCACAAAGAG AGAATGGTGA CATTCAAGGT TCCTCATGCC AAGAGACAGG ATGTGATAGT GCTGGGATCT CAGGAAGGAG CCAT
//
Hình 3.17 G. Kết quả xác định trình tự đoạn D4-5. Vùng chữ in đậm và nghiêng là vị trí cắt của enzyme BstEII.
ID D4-3COMP PRELIMINARY; DNA; 1324 BP.
SQ SEQUENCE 1324 BP; 406 A; 247 C; 354 G; 316 T; 1 OTHER;
CCTCAATATC AAACATAACT CCGGCAACAA GATGTCCAAC GCAAGGAGAA CCTTATCTCA AAGAGGAACA AGATCAACAG TACATTTGCC GGAGAGATGT GGTAGACAGA GGGTGGGGCA ATGGCTGTGG CTTGTTTGGG AAAGGAGGAG TTGTGACATG TGCGAAGTTT TCATGCTCGG GGAAGATAAC AGGCAATTTG GTCCAAATTG AGAACCTTGA ATACACAGTA GTTGTAACAG TCCACAATGG AGACACCCAT GCAGTAGGAA ATGACATACC CAACCATGGA GTGACAGCCA CGATAACCCC CAGGTCACCA TCGGTAGAAG TTAAATTACC GGATTATGGA GAATTAACAC TCGATTGTGA ACCCAGGTCC GGAATTGATT TTAATGAGAT GATTCTGATG AAAATGAAAA AGAAAACGTG GCTTGTGCCC AAGCAATGGT TTTTGGATCT ACCTCTACCA TGGNCAGCAG GAGCAGACAC ATCAGAAGTT CATTGGAATT ACAAAGAGAG AATGGTGACA TTCAAGGTTC CTCATGCCAG GAGACAGGAT GTGATAGTGC TAGGATCTCA GGAAGGAGCC ATGCATTCTG CCCTCACCGG AGCTACAGAA GTGGATTCCG GTGATGGAAA CCACATGTTT GCAGGACATC TGAAATGCAA AGTTCGCATG GAGAAATTGA GAATTAAGGG AATGTCATAC ACGATGTGCT CAGGAAAGTT CTCAATTGAC AAAGAGATGG CAGAAACACA GCATGGGACA ACAGTGGTAA AAGTCAAGTA TGAGGGTGCT GGAGCTCCAT GTAAAGTTCC CATAGAGATA AGAGATGTGA ACAAGGAAAA AGTGGCAGGG CGCATCATCT CATCTACCCC TTTTGCTGAG TATACCAACA GTGTAACCAA CATAGAATTA GAACCCCCCT TTGGGGACAG CTACATAGTA ATAGGTGTTG GAGACAGTGC ATTAACACTC CATTGGTTCA GGAAAGGGAG TTCCATTGGC AAGATGCTTG AGTCCACATA CAGAGGCGCA AAGCGAATGG CCATTCTAGG TGAAACAGCC TGGGATTTTG GTTCTGTTGG TGGACTGTTC ACATCATTGG GAAAGGCTGT ACACCAGGTT TTTGGTAGTG TGTATACAAC TATGTTTGGA GGAGTCTCAT GGATGGTTAG AATCCTAATT GGGTTCTTAG TGTTGTGGAT TGGCACGAAT TCGAGAAACA CCTCAATGGC AATGACGTGC ATAGCTGTTG GAGGAATCAC TCTGTTTCTG GGTTTCACAG TTCACGCAGA CACGGGTTGT GTGGTGTCAT GGAG
//
Hình 3.17H. Kết quả xác định trình tự đoạn D4-3. Vùng chữ in đậm và nghiêng là vị trí cắt của enzyme BstE II.
Nh− vậy, theo lý thuyết cũng nh− trên thực tiễn có thể ghép nối trình tự hai đầu 5’ và 3’ đoạn gen preM-E của mỗi type nhờ điểm cắt của các enzyme nh− Dra III đối với type 1 và type 3, Taq I đối với type 2 và BstE II đối với type 4 để thu
đ−ợc trình tự hoàn chỉnh của gen mã hoá kháng nguyên PreM và E của virus dengue các type.
Trình tự hoàn chỉnh đoạn PreM-M và E của dengue các type:
1 gaccatgctc cttatgctgc tgcccacagc cctggcgttc catctgacca cccgaggggg 61 agagccgcac atgatagtta gcaaacagga aagaggaaag tcacttttgt tcaagacgtc 121 tgcaggtgtt aacatgtgta cccttattgc aatggatttg ggagagttat gtgaggacac 181 aatgacctac aaatgccccc ggatcactga gacggaacca gatgacgtcg actgttggtg 241 caatgccacg gagacatggg tgacctatgg aacatgttct aaaactggtg aacaccgacg 301 agacaaacgt tccgtcgcac tggcaccaca tgtagggctt ggtctagaaa caagagccga 361 aacgtggatg tcctctgaag gcgcttggaa acaaatacaa aaagtggaga cctgggctct 421 gagacaccca ggattcacgg tgatagccct tttcctagca catgccatag gaacatccat 481 cacccagaaa gggattattt tcattttgtt gatgctagta actccatcca tggccatgcg 541 gtgcgtggga ataggcaaca gagacttcgt agaaggactg tcaggagcta cgtgggtcga 601 tgtggtactg gagcatggaa gttgcgtcac taccatggca aaagacaaac caacactgga 661 cattgaactc ttgaagacgg aggtcacaaa ccctgccatc ctgcgcaaac tgtgcattga 721 agctaaaata tcaaacacca ccactgattc gagatgtcca acacaaggag aagccacgct 781 ggtggaagaa caagacacga actttgtgtg tcgacgaacg ttcgtggaca gaggctgggg 841 caatggttgt gggctattcg gaaaaggtag cttaataact tgtgctaagt tcaagtgtgt 901 gacaaaactg gaaggaaaga tagtccaata tgaaaactta aaatattcag taatagtcac 961 cgtccacact ggagaccagc accaagtggg aaatgagacc acagaacatg gaacaactgc 1021 aaccgtaaca cctcaagctc ccacatcgga aatacagctg acagactacg gagctctaac 1081 actggattgt tcacctagaa cagggttaga ctttaatgag atggtgttgt tgacaatgaa 1141 agaaagatca tggctcgtcc acaaacaatg gtttctagac ttaccactgc cttggaactc 1201 gggggcttca acatcccaag agatttggaa tagacaagac ttactggtca catttaagac 1261 agctcatgca aagaagcagg aagtagttgt actaggatca caagaaggag caatgcacac 1321 tgcgttgact ggagcgacag aaatccaaac gtctggaacg acaacaattt ttgcaggaca 1381 cctgaaatgc agactaaaaa tggataaact gactttaaaa gggatatcat atgtaatgtg 1441 cacaggctca ttcaagttag agaaggaagt ggctgagacc cagcatggaa ctattctagt 1501 gcaggttaaa tacgaaggaa cagatgcacc atgcaagatc cccttctcgt cccaagatga 1561 gaagggagtg acccagaatg ggagattgat aacagccaac cctatagtca ctgacaaaga 1621 aaaaccagtc aacattgagg cggagccacc ttttggtgag agctacattg tggtaggatc 1681 aggtgaaaaa gctttgaaac taagctggtt caagaaggga agcagtatag ggaaaatgtt 1741 tgaagcaact gctcgtggag cacgaaggat ggccatcctg ggagacatcg catgggactt 1801 cggttctgta ggaggagtgt tcacgtctgt gggaaaactg gtacaccaga tttttggaac 1861 tgcgtatgga gttttgttca gcggtgtttc ttggaccatg aaaataggaa tagggattct 1921 gctgacatgg ctaggattaa actcaaggag catgtccctc tcaatgacgt gtatcgcagt 1981 tggcatggtc acactgtacc taggagtcat ggttcaggcg gactcgggat gtgtaatcaa 2041 ctggaaaggc agagaactca aatgtggaag tggcattttg ttactaatga agttcacacc 2101 tggacagagc aatacaaatt ccaggccgac tccccaaaga gactatcagc agctattggg 2161 aaggcatggg aggggggtgt gtgtgggatt cgatcagcca ctcgtctcga
//
Hình 3.18A. Trình tự hoàn chỉnh gene m∙ hoá kháng nguyên vỏ (PreM-E) của dengue type 1, với chiều dài 2210 bp, đ∙ đ−ợc đăng ký trong Ngân hàng
1 gctgaacatc ttgaacagga gacgcagaac tgcaggcatg atcattatgc tgattccaac 61 agtgatggcg ttccatttaa ccacacgtaa cggagaacca cacatgatcg tcagtagaca 121 agagaaaggg aaaagtcttc tgtttaaaac agaggatggt gtgaacatgt gtaccctcat 181 ggccatggac cttggtgaat tgtgtgaaga tacaatcacg tacaagtgtc cttttctcaa 241 gcagaatgaa ccagaagaca tagattgttg gtgcaactct acgtccacat gggtaactta 301 tgggacgtgt accaccacag gagaacacag aagagaaaaa agatcagtgg cactcgttcc 361 acatgtggga atgggactgg agacacgaac tgaaacatgg atgtcatcag aaggggcctg 421 gaaacatgcc cagagaattg aaacttggat cttgagacat ccaggcttta ccataatggc 481 agcaatcctg gcatacacca taggaacgac acatttccaa agagccctga ttttcatctt 541 actgacagct gtcgctcctt caatgacaat gcgttgcata ggaatatcaa atagagactt 601 tgtagaaggg gtttcaggag gaagctgggt cgacatagtc ttagaacatg gaagctgtgt 661 gacgacgatg gcaaaaaaca aaccaacatt ggattttgaa ctgataaaaa cagaagccaa 721 acaacctgcc actctaagga agtactgtat agaggcaaag ctgaccaaca caacaacaga 781 ttctcgctgc ccaacacaag gagaacccag cctaaatgaa gagcaggaca aaaggttcgt 841 ctgcaaacac tccatggtgg acagaggatg gggaaatgga tgtggactat ttggaaaagg 901 aggcattgtg acctgtgcta tgttcacatg caaaaagaac atgaaaggaa aagtcgtgca 961 accagaaaac ttggaataca ccattgtgat aacacctcac tcaggggaag agcatgcagt 1021 cggaaatgac acaggaaaac atggcaagga aatcaaaata acaccacaga gttccatcac 1081 agaagcagag ttgacaggct atggcactgt cacgatggag tgctctccga gaacgggcct 1141 cgacttcaat gagatggtgt tgctgcaaat ggaaaataaa gcttggctgg tgcacaggca 1201 atggttccta gacctgccgt tgccatggct gcccggagcg gacacacaag gatcaaattg 1261 gatacagaaa gagacattgg tcactttcaa aaatccccat gcgaagaaac aggatgttgt 1321 tgttttggga tcccaagaag gggccatgca cacagcactc acaggggcca cagaaatcca 1381 gatgtcatca ggaaacttac tgttcacagg acatctcaag tgcaggctga ggatggacaa 1441 actacagctc aaaggaatgt catactctat gtgcacagga aagtttaaag ttgtgaagga 1501 aatagcagaa acacaacatg gaacaatagt tatcagagta caatatgaag gggacggttc 1561 tccatgtaag atcccttttg agataatgga tttggaaaaa agacatgttt taggtcgcct 1621 gattacagtc aacccaatcg taacagaaaa agatagccca gtcaacatag aagcagaacc 1681 tccattcgga gacagctaca tcatcatagg agtagagccg ggacaattga agctcaactg 1741 gtttaagaaa ggaagttcta tcggccaaat aattgagaca acactgaggg gagcgaagag 1801 aatggccatt ttaggtgaca cagcttggga ttttggatcc ctgggaggag tgtttacatc 1861 tataggaaag gctctccacc aagttttcgg agcaatctat ggggctgcct tcagtggggt 1921 ctcatggatt atgaaaatcc tcataggagt cattatcaca tggataggga tgaattcacg 1981 cagcacctca ctgtctgtgt cactagtatt ggtgggagtc gtgacgctgt atttgggagt 2041 tatggtgcag gccgatagtg gttgcgttgt gagctggaaa aacaaagaac tgaagtgtgg 2101 cagtgggatt ttcatcacag acaacgtgca cacatggaca gaacaataca agttccaacc 2161 agaatcccct tcaaaactag cttcagctat ccagaaagct catgaagagg gcatttgtgg 2221 aatccgctca gtaac
Hình 3.18B. Trình tự hoàn chỉnh gene m∙ hoá kháng nguyên vỏ (PreM-E) của dengue type 2, với chiều dài 2235 bp, đ∙ đ−ợc đăng ký trong
Ngân hàng Gen quốc tế với số đăng ký AJ574886.
1 cctcagattt ctagccattc caccgacagc aggagtcttg gctagatggg gtacctttaa 61 gaagtcgggg gctattaagg tcttaaaagg cttcaagaag gagatctcaa acatgctgag 121 cattatcaac aaacggaaaa agacatcgct ctgtctcatg atgatgttac cagcaacact 181 tgctttccac ttaacttcac gagatggaga gccgcgcatg attgtgggga agaatgaaag 241 aggaaaatcc ctacttttta agacagcctc tggaatcaac atgtgcacac tcatagccat 301 ggatttggga gagatgtgtg atgacacggt cacttacaaa tgcccccaca ttaccgaagt 361 ggagcctgaa gacattgact gctggtgcaa ccttacatcg acatgggtga cttatggaac 421 atgcaatcaa gctggagagc atagacgcga taagagatca gtggcgttag ctccccatgt 481 cggcatggga ctggacacac gcactcaaac ctggatgtcg gctgaaggag cttggagaca 541 agtcgagaag gtagagacat gggcccttag gcacccaggg tttaccatac tagccctatt 601 tcttgcccat tacataggca cttccttgac ccagaaagtg gttattttta tactattaat 661 gctggttacc ccatccatga caatgagatg tgtgggagta ggaaacagag attttgtgga 721 aggcctatcg ggagccacgt gggttgacgt ggtgctcgag cacggtgggt gtgtgactac 781 catggctaag aacaagccca cgctggacat agagcttcag aagaccgagg ccacccaact 841 ggcgacccta aggaagctat gcattgaggg aaaaattacc aacataacaa ccgactcaag 901 atgtcccacc caaggggaag cgattttacc tgaggagcag gaccagaact acgtgtgtaa 961 gcatacatac gtggacagag gctggggaaa cggttgtggt ttgtttggca agggaagctt 1021 ggtgacatgc gcgaaatttc aatgtttaga atcaatagag ggaaaagtgg tgcaacatga 1081 gaacctcaaa tacaccgtca tcatcacagt gcacacagga gaccaacacc aggtgggaaa 1141 tgaaacgcag ggagttacgg ctgagataac atcccaggca tcaaccgctg aagccatttt 1201 acctggatat ggaaccctcg ggctagaatg ctcaccacgg acaggtttgg atttcaatga 1261 aatgatttta ttgacaatga agaacaaagc atggatggta catagacaat ggttctttga 1321 cttaccccta ccatggacat caggagctac aacagaaaca ccaacttgga acaggagaga 1381 gcttcttgtg acatttaaaa atgcacatgc aaaaaagcaa gaagtagttg tccttggatc 1441 acaagaggga gcaatgcata cagcactgac aggagctaca gagatccaaa cctcaggagg 1501 cacaagtatt tttgcggggc acttaaaatg tagactcaag atggacaaat tggaactcaa 1561 ggggatgagc tatgcaatgt gcttgaatac ctttgtgttg aagaaagaag tctccgaaac 1621 gcagcatggg acattactca ttaaggttga gtacaaaggg gaagatgcac cctgcaagat 1681 tcctttctcc acggaggatg gacaagggaa agctcacaat ggcagactga tcacagccaa 1741 tccagtggtg accaagaagg aggagcctgt caacattgag gctgaacctc cttttgggga 1801 aagtaatata gtaattggaa ttggagacaa agccctgaaa atcaactggt acaggaaggg 1861 aagctcgatt gggaagatgt tcgaggccac tgccagaggt gcaaggcgca tggccatctt 1921 gggagacaca gcctgggact ttggatcagt gggtggtgtt ttgaattcat tagggaaaat 1981 ggtccaccaa atatttggga gtgcttacac agccctattt agtggagtct cctggataat 2041 gaaaattgga ataggtgtcc tcttaacctg gatagggttg aattcaaaaa acacttctat 2101 gtcattttca tgcattgcga taggaatcat tacactctat ctgggagtcg tggtgcaagc 2161 tgacatgggg tgtgtcataa actggaaagg caaagaactc aaatgtggaa gtggaatttt 2221 cgtcactaat gaggtccaca cctggacaga gcaatacaaa tttcaagcag actcccccaa 2281 aagactggca acagccattg caggcgcttg ggagaatgga gtgtgcggaa ttaggtcaac 2341 aaccagaa
Hình 3.18 C. Trình tự hoàn chỉnh gene m∙ hoá kháng nguyên vỏ (PreM-E) của dengue type 3, với chiều dài 2348 bp, đ∙ đ−ợc đăng ký trong
Ngân hàng Gen quốc tế với số đăng ký AJ563355.
1 ctgtgcttga ttcccaccgt aatggcgttt cacttgtcaa ccagagatgg cgaacccctt 61 atgatagtgg caaaacacga aagggggaga cctctcttgt ttaagacaac agagggaatc 121 aacaaatgca ctcttattgc catggacctg ggtgaaatgt gtgaggacac cgtcacgtat 181 gaatgccctc tactggtcaa taccgaacct gaggacactg attgctggtg caatctcacg 241 tctacctggg tcatgtatgg gacatgcact cagagtgggg aacggagacg ggagaagcgc 301 tcagtagccc taacaccaca ttcaggaatg ggattggaga caagggctga gacatggatg 361 tcatcggaag gggcttggaa acatgctcag agggtagaga gttggatact cagaaaccca 421 ggattcgctc tcttggcagg atttatggcc tatatgattg ggcaaacagg aatccagcga 481 acagtcttct ttgttctaat gatgctggtc gccccatcct acggaatgcg atgcgtggga 541 gtggggaaca gagactttgt ggaaggagtc tcaggtggag catgggtcga tttggtgcta 601 gaacatggag gatgtgtcac aaccatggcc cagggaaaac caaccttgga ttttgaactg 661 atcaagacaa cagccaagga agtggctctg ttaagaacct attgcattga agcctcgata 721 tcaaacataa ccacagcaac aagatgtcca acgcaaggag aaccttatct caaagaggaa 781 caagatcaac agtacatttg ccggagagat gtggtagaca gagggtgggg caatggctgt 841 ggcttgtttg ggaaaggagg agttgtgaca tgtgcgaagt tttcatgctc ggggaagata 901 acaggcaatt tggtccaaat tgagaacctt gaatacacag tagctgtaac agtccacaat 961 ggagacaccc atgcagtagg aaatgacata cccaaccatg gagtgacagc cacgataacc 1021 cccaggtcac catcggtaga agttaaatta ccggattatg gagaattaac actcgattgt 1081 gaacccaggt ccggaattga ttttaatgag atgattctga tgaaaatgaa aaagaaaacg 1141 tggcttgtgc ccaagcaatg gtttttggat ctacctctac catggncagc aggagcagac 1201 acatcagaag ttcattggaa ttacaaagag agaatggtga cattcaaggt tcctcatgcc 1261 aggagacagg atgtgatagt gctaggatct caggaaggag ccatgcattc tgccctcacc 1321 ggagctacag aagtggattc cggtgatgga aaccacatgt ttgcaggaca tctgaaatgc 1381 aaagttcgca tggagaaatt gagaattaag ggaatgtcat acacgatgtg ctcaggaaag 1441 ttctcaattg acaaagagat ggcagaaaca cagcatggga caacagtggt aaaagtcaag 1501 tatgagggtg ctggagctcc atgtaaagtt cccatagaga taagagatgt gaacaaggaa 1561 aaagtggcag ggcgcatcat ctcatctacc ccttttgctg agtataccaa cagtgtaacc 1621 aacatagaat tagaaccccc ctttggggac agctacatag taataggtgt tggagacagt 1681 gcattaacac tccattggtt caggaaaggg agttccattg gcaagatgct tgagtccaca 1741 tacagaggcg caaagcgaat ggccattcta ggtgaaacag cctgggattt tggttctgtt 1801 ggtggactgt tcacatcatt gggaaaggct gtacaccagg tttttggtag tgtgtataca 1861 actatgtttg gaggagtctc atggatggtt agaatcctaa ttgggttctt agtgttgtgg 1921 attggcacga attcgagaaa cacctcaatg gcaatgacgt gcatagctgt tggaggaatc 1981 actctgtttc tgggtttcac agttcacgca gacacgggtt gtgtggtgtc atggag //
Hình 3.18D. Trình tự hoàn chỉnh gene m∙ hoá kháng nguyên vỏ (PreM-E) của dengue type 4, với chiều dài 2036 bp, đ∙ đ−ợc đăng ký trong
Ngân hàng Gen quốc tế với số đăng ký AJ563356.
Kết quả của việc tách dòng là tiền đề cho bước tiếp theo nghiên cứu thiết kế vector biểu hiện kháng nguyên vỏ dengue để thu nhận protein tái tổ hợp phục vụ cho việc phát triển Kit chẩn đoán và vaccine tái tổ hợp thử nghiệm.
3.3.1.8. Kiểm tra biểu hiện độ tinh sạch, đặc hiệu của kháng domain 3 thuộc protein vỏ của virus dengue các type [1]
3.3.1.8.1. Thiết kế vector biểu hiện pET-TRX -DxE3
Domain 3 thuộc protein vỏ của virus dengue (ký hiệu là DE3) là vùng có chứa nhiều quyết định kháng nguyên quan trọng. Theo Jaiswal S và cs (2004), thì
DE3 vừa là vùng kháng nguyên có tính sinh miễn dịch cao vừa là vùng đóng vai tròn quan trọng đối với khả năng xâm nhiễm của virus. Vùng DE3 chính là vùng nhận biết thụ thể trên bề mặt tế bào giúp cho virus bám trên bề mặt tế bào và xâm nhập tế bào. Chính ví lý do đó, chúng tôi lựa chọn đoạn gene này để biểu hiện trong E. coli. Nếu có đ−ợc kháng nguyên DE3 tái tổ hợp thì không những có thể ứng dụng chế tạo Kit chẩn đoán mà còn có thể sử dụng kháng nguyên tái tổ hợp này để nghiên cứu sâu về cơ chế xâm nhập của virus dengue vào tế bào cảm nhiễm sau này. Kế hoạch biểu hiện vùng DE3 đ−ợc trình bày ở sơ đồ sau: