7.2 Các phương pháp phân tích
7.2.8 Xác định hàm lượng amylose
Hàm lượng amylose được xác định theo TCVN 5716-2:2008. Gạo được nghiền thành bột mịn để phá vỡ cấu trúc nội nhũ nhằm hỗ trợ sự phân tán và gelatin hóa hoàn toàn; khử chất béo của bột. Phần mẫu thử được hòa vào dung dịch natri hydroxit, sau đó lấy một phần của dung dịch chiết này và cho thêm dung dịch iôt. Sử dụng máy đo quang phổ để đo độ hấp thụ của phức màu tạo thành ở bước sóng 620 nm. Hàm lượng amylose của mẫu được xác định dựa vào đường chuẩn, đường chuẩn này được xây dựng trên cơ sở sử dụng hỗn hợp amylose khoai tây và amylopectin để
62
loại trừ ảnh hưởng của amylopectin đến màu của phức amylose-iod của dung dịch thử.
Thiết bị - Cân phân tích - Bộ trích ly Soxhlet - Bể điều nhiệt - Thiết bị Vortex
- Thiết bị đo quang phổ hấp thu UV-Vis Dụng cụ
- Becher 50 mL
- Ống nghiệm chịu nhiệt và giá đựng ống nghiệm - Bình định mức 100 mL
- Erlen 100 mL
- Micropipet 1000 àL và 5 mL - Nồi cách thủy
- Cuvet nhựa Hóa chất
- Methanol, dung dịch 85 % thể tích.
- Ethanol, dung dịch 95 % thể tích.
- Natri hydroxit, dung dịch 1 mol/l.
- Natri hydroxit, dung dịch 0,09 mol/l.
- Axit axetic, dung dịch 1 mol/l.
- Dung dịch iôt : Cân 2,000 g kali iodua, chính xác đến 5 mg. Thêm nước vừa đủ để tạo thành dung dịch bão hòa. Thêm 0,200 g iôt, chính xác đến 1 mg. Khi lượng iôt đã tan hết, chuyển toàn bộ dung dịch sang bình định mức 100 ml, thêm nước đến vạch và trộn. Dung dịch được chuẩn bị trong ngày sử dụng và được bảo quản tránh ánh sáng
- Huyền phù amylose khoai tây chuẩn, không chứa amylopectin, 1 g/l : cân 100 mg ± 0,5 mg amyloza khoai tây cho vào bình nón 100 ml. Thêm 1 ml ethanol
63
để làm trôi những phần amylose còn bám trên thành bình. Thêm 9,0 ml dung dịch natri hydroxit 1 mol/l và trộn đều. Gia nhiệt hỗn hợp trên nồi cách thủy trong 10 phút để phân tán amylose khoai tây. Làm nguội đến nhiệt độ phòng và chuyển vào bình định mức 100 ml. Thêm nước đến vạch và lắc mạnh. 1 ml huyền phù chuẩn này chứa 1 mg amylose khoai tây.
- Huyền phù amylopectin chuẩn, 1 g/l : Chuẩn bị tương tự như huyền phù amylose khoai tây chuẩn. 1 ml huyền phù chuẩn này chứa 1 mg amylopectin.
Trình tự tiến hành Xây dựng đường chuẩn
Trộn các thể tích của huyền phù chuẩn của amylose khoai tây và amylopectin với dung dịch natri hydroxit 0,09 mol/l theo tỉ lệ như sau :
Nồng độ amylose
(mg/L) 0 100 200 250 300 350
Amylose (mL) 0 2 4 5 6 7
Amylopectin (mL) 18 16 14 13 12 11
NaOH 0,09 mol/l (mL) 2 2 2 2 2 2
Dùng pipet lấy 5,0 ml mỗi dung dịch chuẩn cho vào dãy các bình định mức 100 ml, mỗi bình chứa khoảng 50 ml nước. Thêm 1,0 ml axit axetic và trộn đều. Sau đó thêm 2.0 ml dung dịch iôt, thêm nước đến vạch và định mức. Giữ yên trong 10 phút.
Chuẩn bị dung dịch trắng theo cách tiến hành như trên nhưng dùng 5,0 ml dung dịch natri hydroxit 0,09 mol/l thay cho dung dịch thử.
Dùng máy quang phổ để đo độ hấp thụ ở bước sóng 620 nm so với dung dịch trắng.
64 Đường chuẩn thu được như Hình 7.3
Hình 7.3 Đường chuẩn xác định hàm lượng amylose của tinh bột Chuẩn bị mẫu phân tích
Khử chất béo của bột gạo bằng cách cho đối lưu với methanol trong khoảng từ 4h đến 6h trong thiết bị chiết với tốc độ 5 giọt đến 6 giọt mỗi giây. Dàn mỏng mẫu đã khử chất béo lên khay và đề 2 ngày cho bay hơi hết methanol còn lại và để cho độ ẩm đạt đến độ ẩm cân bằng.
Cân 100 mg ± 0,5 mg mẫu thử vào bình nón 100 ml. Thêm cẩn thận 1 ml ethanol vào phần mẫu thử này để làm trôi những phần amylose còn bám trên thành bình. Thêm 9,0 ml dung dịch natri hydroxit 1 mol/l và trộn đều. Gia nhiệt hỗn hợp trên nồi cách thủy trong 10 phút để phân tán tinh bột. Làm nguội đến nhiệt độ phòng và chuyển vào bình định mức 100 ml. Thêm nước đến vạch và trộn mạnh.
Dùng pipet lấy 5,0 ml mỗi dung dịch chuẩn cho vào dãy các bình định mức 100 ml, mỗi bình chứa khoảng 50 ml nước. Thêm 1,0 ml axit axetic và trộn đều. Sau đó thêm 2.0 ml dung dịch iôt, thêm nước đến vạch và định mức. Giữ yên trong 10 phút. Dùng máy quang phổ để đo độ hấp thụ ở bước sóng 620 nm so với dung dịch trắng.
Tính toán kết quả
Hàm lượng amylose được xác định dựa trên đường chuẩn giữa nồng độ amylose và độ hấp thu.
y = 147.01x - 0.3769 R² = 0.9969
0 5 10 15 20 25 30 35
0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25
Nồng độ Amylose (mg/L)
Độ hấp thu