- Nguyên lý
Virus Newcastle có khả năng ngưng kết hồng cầu. Khi hồng cầu được rửa sạch bằng PBS sẽ bộc lộ ra những thụ thể bề mặt và virus Newcastle sẽ kết hợp với hồng cầu qua những thụ thể này.
Đây là đặc điểm quan trọng để xác định một cách gián tiếp sự hiện diện của virus nhằm định lượng và chuẩn độ kháng nguyên virus Newcastle dùng cho phản ứng HI.
- Chuẩn bị hồng cầu gà 10% và 0.5%
Chọn 2 – 3 con gà khoẻ, lấy máu khoảng 4 – 5 ml có chất kháng đông (Alsever).
Thêm một lượng tương đương dung dịch nước muối sinh lý vào phần máu vừa lấy, lắc đều.
Ly tâm ở 2000 vòng trong 10 phút, loại bỏ phần nước phía trên. Ly tâm lặp lại từ 2-3 lần.
Dùng Hematocrit để đo tỷ lệ hồng cầu sau khi đã được rửa sạch. Pha hồng cầu 10 % theo công thức C1V1 = C2V2.
C1: nồng độ hồng cầu gốc. V1: thể tích hồng cầu gốc. C2: nồng độ hồng cầu cần pha. V2: thể tích hồng cầu cần pha.
Từ hồng cầu 10 % pha hồng cầu 0,5 % theo công thức trên để làm phản ứng.
- Thành phần phản ứng
Kháng nguyên là vaccine chủng Lasota được pha trong dung dịch đệm PBS. Dung dịch PBS.
- Tiến hành phản ứng HA
Cho 50 µl PBS vào hai hàng A và B của đĩa phản ứng 96 giếng.
Cho 50 µl kháng nguyên vào giếng A1 và B1. Dùng micropipette trộn đều sau đó pha loãng dần từ giếng A1, B1 cho đến giếng A12, B12 với thể tích là 50 µl, loại bỏ 50 µl dung dịch sau khi pha loãng đến giếng cuối cùng.
Thêm 50 µl hồng cầu gà 0,5 % vào tất cả các giếng, để yên sau 15 phút.
Bảng 3.3 Trình tự tiến hành thực hiện phản ứng HA Số giếng 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 Số giếng 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 PBS (µl) 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 Kháng nguyên (µl) 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 Hồng cầu (µl) 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 Độ pha loãng 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 1/512 1/1024 1/2028 Đọc kết quả:
Dương tính: xảy ra hiện tượng ngưng kết hồng cầu. Âm tính: hồng cầu tụ lại thành cụm tròn nhỏ ở đáy giếng.
Hiệu giá của kháng nguyên (một đơn vị kháng nguyên) là độ pha loãng cao nhất có 100% hồng cầu gà ngưng kết.