CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
3.1. KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG, THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ HOẠT TÍNH GÂY ĐỘC TẾ BÀO UNG THƯ IN VITRO CỦA TINH DẦU
3.1.1. Kết quả xác định hàm lượng và thành phần hóa học của tinh dầu
Tinh dầu thu được từ thân rễ (EOR), lá (EOL) và thân giả (EOPS) Nghệ đắng có màu vàng và mùi thơm dịu đặc trưng. Kết quả định lượng tinh dầu từ các bộ phận của Nghệ đắng được trình bày trong Bảng 3.1.
Bảng 3.1. Hàm lượng tinh dầu từ các bộ phận của Nghệ đắng
Bộ phận Lần cất M (g) V (ml) X (%) H (%) Trung bình (%) Thân rễ
1 100,75 0,4 51,58 0,82
0,84 ± 0,02
2 100,68 0,4 53,80 0,86
3 100,87 0,4 52,79 0,84
Lá
1 100,27 0,2 48,85 0,39
0,38 ± 0,01
2 100,16 0,2 47,45 0,38
3 100,32 0,2 46,12 0,37
Thân giả
1 220,25 0,1 49,55 0,09
0,10 ± 0,00
2 200,87 0,1 50,20 0,10
3 200,12 0,1 50,03 0,10
Ghi chú: M: Khối lượng dược liệu (g); V: Thể tích tinh dầu (ml); X: Độ ẩm của dược liệu (%); H: Hiệu suất chiết (%).
Nhận xét: Hàm lượng tinh dầu trong thân rễ, lá và thân giả lần lượt là 0,84 ± 0,02, 0,38 ± 0,01 và 0,10 ± 0,00%. Thân rễ có hàm lượng tinh dầu cao gấp khoảng 2,2 lần so với lá và 8,4 lần so với thân giả.
3.1.1.2. Kết quả xác định thành phần hóa học của tinh dầu
Phân tích thành phần hóa học của tinh dầu được thực hiện bằng phương pháp GC-MS, với sắc ký đồ chi tiết được trình bày ở Phụ lục 5 (Phụ lục 5.1-5.3). Thành phần hóa học tinh dầu từ các bộ phận của Nghệ đắng được tổng hợp trong Bảng 3.2.
Bảng 3.2. Thành phần hóa học của tinh dầu từ các bộ phận của Nghệ đắng
STT RT Tên chất CTPT RIa RIb Hàm lượng (%)
EOR EOL EOPS
1 5,279 Tricyclen C10H16 927 925 - 0,11 -
2 5,547 α-Pinen C10H16 939 937 1,45 0,78 0,07
3 5,903 Camphen C10H16 955 952 0,97 2,87 0,30
4 6,509 Sabinen C10H16 978 974 - 0,17 -
5 6,612 β-Pinen C10H16 981 979 3,71 1,21 0,27
6 6,927 β-Myrcen C10H16 992 991 - 0,44 0,06
7 7,899 p-Cymen C10H14 1028 1025 0,22 0,06 -
8 8,025 Limonen C10H16 1033 1030 0,34 1,30 0,16
9 8,106 1,8-Cineol C10H18O 1036 1032 0,32 8,88 0,77
10 9,834 Terpinolen C10H16 1091 1088 - 0,05 -
11 10,176 Linalool C10H18O 1100 1099 0,49 1,80 0,52 12 11,458 trans-Pinocarveol C10H16O 1143 1139 0,43 - - 13 11,653 Camphor C10H16O 1149 1145 3,99 7,06 3,41 14 11,773 Camphen hydrat C10H18O 1153 1148 0,31 0,51 0,27 15 12,048 Isoborneol C10H18O 1161 1157 2,84 4,75 2,39
16 12,248 Pinocarvon C10H14O 1167 1164 0,24 - -
17 12,334 endo-Borneol C10H18O 1170 1167 0,81 3,07 1,71 18 12,717 Terpinen-4-ol C10H18O 1180 1177 0,15 0,20 0,06
19 12,900 Myrtanal C10H16O 1186 1188 0,10 - -
20 13,152 α-Terpineol C10H18O 1192 1189 0,23 0,76 0,29
21 13,350 Myrtenal C10H14O 1198 1193 0,95 - -
22 17,976 δ-Elemen C15H24 1341 1338 - 0,36 0,92
23 19,504 β-Bourbonen C15H24 1388 1384 - 0,43 -
24 19,738 β-Elemen C15H24 1394 1391 2,43 3,41 6,77 25 20,596 Caryophyllen C15H24 1423 1419 0,53 0,89 1,98
26 20,877 β-Copaen C15H24 1432 1432 - 0,10 0,22
27 21,014 γ-Elemen C15H24 1437 1433 0,51 2,22 3,55
28 21,077 trans-α-Bergamoten C15H24 1439 1435 - - 1,56
29 21,323 Guaia-6,9-dien C15H24 1447 1443 0,83 - -
30 21,649 Humulen C15H24 1458 1454 3,47 2,47 6,37 31 21,873 Alloaromadendren C15H24 1465 1461 - - 0,06
STT RT Tên chất CTPT RIa RIb Hàm lượng (%) EOR EOL EOPS 32 22,319 γ-Muurolen C15H24 1480 1477 0,42 0,10 0,19
33 22,479 Germacren D C15H24 1484 1481 - 0,64 1,95
34 22,645 β-Eudesmen C15H24 1489 1486 1,19 0,21 0,36 35 22,914-
22,971 Curzeren C15H20O 1498 1498 1,29 5,20 11,72
36 23,051 α-Selinen C15H24 1502 1494 0,22 - -
37 23,292 β-Bisabolen C15H24 1511 1509 - - 0,98
38 23,504 Cubebol C15H26O 1518 1515 0,16 0,29 0,40
39 23,743 δ-Cadinen C15H24 1527 1524 0,45 0,44 0,77
40 24,488 Elemol C15H26O 1553 1549 - 0,12 0,17
41 24,745 Germacren B C15H24 1561 1557 0,57 0,20 0,28 42 24,888
3,7,11-trimethyl- 6,10-dodecadien-1- yn-3-ol
C15H24O 1566 1562 - - 0,08
43 25,506 Caryophyllen oxid C15H24O 1587 1581 1,02 0,51 0,51 44 25,620 epi-Globulol C15H26O 1591 1585 0,34 0,40 0,56 45 25,838 Viridiflorol C15H26O 1597 1591 0,66 - 0,46 46 25,979 cis-β-Elemenon C15H22O 1603 1593 - 1,88 3,81 47 26,124 trans-β-Elemenon C15H22O 1608 1606 5,47 6,65 10,64 48 26,256 Humulen epoxid II C15H24O 1613 1608 - 1,06 1,65
49 26,273 Widdrol C15H26O 1614 1610 8,03 - -
50 26,485 (E)-Farnesen epoxid C15H24O 1621 1624 - 6,44 6,71 51 26,810 13-nor-Eremophil-
1(10)-en-11-on
C14H22O 1633 1629 3,73 1,38 1,99
52 26,908 Caryophylladienol II C15H24O 1637 1637 1,60 - -
53 27,120 τ-Cadinol C15H26O 1645 1640 - 0,51 0,56
54 27,400-
27,401 β-Eudesmol C15H26O 1655 1653 0,71 - 0,27
55 27,520 Pogostol C15H26O 1659 1660 1,22 - 0,95
56 27,892 Epi-β-bisabolol C15H24O 1672 1670 - 0,70 - 57 27,989 Isolongifolol, methyl
ether
C16H28O 1676 1672 2,25 0,22 -
STT RT Tên chất CTPT RIa RIb Hàm lượng (%) EOR EOL EOPS
58 28,213 α-Santalol C15H24O 1683 1681 - 1,94 1,00
59 28,453 Nerolidyl acetat C17H28O2 1692 1687 - 0,34 - 60 28,653 Germacron C15H22O 1697 1693 1,67 1,95 2,83 61 29,008 β-Nootkatol C15H24O 1712 1712 0,58 - 0,28 62 29,317 Curdion C15H24O2 1724 1726 27,45 14,05 9,79 63 31,223 Furanodienon C15H18O2 1796 1793 - 1,97 1,75
64 31,405 Ambrial C16H26O 1803 1809 4,75 - -
65 32,412 Curcumenon C15H22O2 1844 1844 0,35 0,22 - 66 32,739 Isolongifolol acetat C17H28O2 1856 1850 0,26 - - 67 35,983
(E)-15,16-
Dinorlabda-8(17),11- dien-13-on
C18H28O 1988 1994 1,05 - -
Tổng 90,76 91,32 92,37
Monoterpen hydrocarbon 6,69 6,99 0,86
Monoterpen oxy hóa 10,86 27,03 9,42
Sesquiterpen hydrocarbon 10,62 11,47 25,96
Sesquiterpen oxy hóa 61,54 45,83 56,13
Norditerpenoid 1,05 - -
Ghi chú: RT: Thời gian lưu (phút); CTPT: Công thức phân tử; RIa: Chỉ số lưu giữ thực nghiệm; RIb: Chỉ số lưu giữ theo tài liệu tham khảo (ngân hàng dữ liệu NIST17 và sách Adams) [184]; EOR: Tinh dầu thân rễ; EOL: Tinh dầu lá; EOPS: Tinh dầu thân giả; Các thành phần chính được in đậm.
Đối với tinh dầu thân rễ (EOR): Dựa trên kết quả phân tích được trình bày ở Bảng 3.2 cho thấy có tổng số 46 thành phần được xác định trong tinh dầu thân rễ C.
zedoaroides, trong đó sesquiterpen oxy hóa (18 thành phần, chiếm 61,54%) là nhóm hợp chất chính. Mẫu tinh dầu này cũng được phát hiện có lượng lớn monoterpen oxy hóa (12 thành phần, 10,86%) và sesquiterpen hydrocarbon (10 thành phần, 10,62%).
Ngoài ra, trong EOR còn có các monoterpen hydrocarbon (5 thành phần, 6,69%) và 1 hợp chất norditerpenoid là (E)-15,16-dinorlabda-8(17),11-dien-13-on (1,05%). Các thành phần chính (chiếm > 5%) bao gồm các hợp chất curdion (27,45%), widdrol (8,03%) và trans- β-elemenon (5,47%). Bên cạnh đó, các hợp chất như ambrial (4,75%), camphor (3,99%),
13-nor-eremophil-1(10)-en-11-on (3,73%), β-pinen (3,71%), humulen (3,47%), isoborneol (2,84%), β-elemen (2,43%) và isolongifolol methyl ether (2,25%) cũng được phát hiện với hàm lượng đáng kể (> 2%) trong EOR.
Đối với tinh dầu lá (EOL): Kết quả phân tích GC-MS của tinh dầu lá Nghệ đắng đã phát hiện được 48 thành phần như trình bày ở Bảng 3.2. Các thành phần chính trong mẫu EOL bao gồm curdion (14,05%), 1,8-cineol (8,88%), camphor (7,06%), trans-β- elemenon (6,65%), (E)-β-farnesen epoxid (6,44%), curzeren (5,20%), isoborneol
(4,75%), β-elemen (3,41%), endo-borneol (3,07%), camphen (2,87%), humulen (2,47%) và γ-elemen (2,22%). Trong đó, monoterpen hydrocarbon chiếm 6,99% (9 thành phần), monoterpen oxy hóa chiếm 27,03% (8 thành phần), sesquiterpen hydrocarbon chiếm 11,47% (12 thành phần) và sesquiterpen oxy hóa chiếm 45,83%
(19 thành phần) trong tổng lượng tinh dầu.
Đối với tinh dầu thân giả (EOPS): Phân tích GC-MS cho thấy tinh dầu thân giả Nghệ đắng có 47 thành phần dễ bay hơi. Thành phần chiếm hàm lượng lớn là curzeren (11,72%), trans-β-elemenon (10,64%), curdion (9,79%), β-elemen (6,77%), (E)-β-
farnesen epoxid (6,71%), humulen (6,37%), cis-β-elemenon (3,81%), γ-elemen (3,55%), camphor (3,41%), germanacron (2,83%) và isoborneol (2,39%). Sesquiterpen oxy hóa và sesquiterpen hydrocarbon được xác định là hai nhóm thành phần chính, lần lượt chiếm 56,13% và 25,96% tổng hàm lượng tinh dầu. Ngoài ra, nhóm monoterpen chứa oxy cũng có hàm lượng lớn với 9,42% tổng hàm lượng tinh dầu.
Như vậy có thể thấy, tinh dầu ở các bộ phận khác nhau của cây Nghệ đắng có một số điểm tương đồng về số lượng các thành phần (46 - 48), về hàm lượng nhóm chất chính (sesquiterpen oxy hóa, 45,83 - 61,54%) và về thành phần hóa học (với 28 thành phần chung). Bên cạnh đó, hàm lượng của các thành phần này có sự thay đổi trong tinh dầu ở các bộ phận khác nhau. Trong số các thành phần này, curdion (9,79 - 27,45%), trans-β-elemenon (5,47 - 10,64%), camphor (3,41% - 7,06%), β-elemen (2,43 - 6,77%), humulen (2,47 - 6,37%) và isoboneol (2,39 - 4,75%) là các thành phần chung có hàm lượng lớn trong cả 3 loại tinh dầu (> 2%). Tuy nhiên, một số thành phần có hàm lượng lớn như widdrol (8,03%) và ambrial (4,75%) chỉ có trong EOR hay là thành phần chính hoặc chỉ có trong EOL và EOPS như (E)-farnesen epoxid (6,44 - 6,71%) và curzeren (5,20 - 11,72%). Ngoài ra, 1,8-cineol là thành phần chính trong
EOL (8,88%), tuy nhiên
hợp chất này lại là thành phần phụ trong EOR (0,32%) và EOPS (0,77%). Bên cạnh đó, một số thành phần nhỏ (< 2%) cũng có sự khác biệt trong các loại tinh dầu này.