2.2.1. Thiết bị
2.1.1.1. Thiết bị HPLC-PDA
Thiết bị HPLC kết nối với detector PDA sử dụng trong nghiên cứu (hình 2.1) được cung cấp bởi hãng Shimadzu.
Hình 2.1. Ảnh chụp hệ thiết bị HPLC-PDA
(1: Vị trí đặt pha động và các kênh, 2: Bộ phận LC-40D XR, 3: Detector PDA SPD-
M40, 4: Bộ phận tiêm mẫu tự động autosampler, 5: Buồng cột)
1
2
3
4
5
2.1.1.2. Các thiết bị khác và dụng cụ
Các thiết bị gồm:
- Cân phân tích của hãng Mettler Toledo (Thuỵ Sĩ), độ chính xác 0,1 mg.
- Cân kỹ thuật của hãng Scientech (Thuỵ Sĩ), độ chính xác 0,1 mg.
- Tủ lạnh Sanaky VH-2899W dùng bảo quản mẫu (Việt Nam).
- Hệ cô quay chân không có bể điều nhiệt - Bể điều nhiệt có thể điều chỉnh nhiệt độ.
- Bộ chiết pha rắn SPE và bơm áp suất.
- Máy đồng nhất mẫu.
Các dụng cụ sử dụng trong nghiên cứu gồm:
- Dụng cụ thủy tinh: bình định mức, pipet, cốc, ống nghiệm.
- Bình cô quay - Micropipet cỏc loại: 1000 àL; 200 àL; 20 àL.
- Ống nhỏ: 2 àL để đựng mẫu phõn tớch . - Các lọ Falcon 15 mL; 50 mL để đựng dung dịch chuẩn và mẫu.
- Bộ xylanh lọc mẫu cú đường kớnh màng lọc là 0,45 àm.
- Cột Intersil C18 500 mg/6mL (GL sciences, Tokyo, Japan) (hình 2.2) - Một số dụng cụ thông thường khác trong phòng thí nghiệm.
Hình 2.2. Hình ảnh cột InterSep C18 500 mg/6mL
2.2.2. Hóa chất
Tất cả các hóa chất sử dụng trong nghiên cứu đều thuộc loại tinh thiết phân tích và được pha chế bằng nước deion.
2.1.1.3. Chất chuẩn
- Sodium stearoyl lactylate (SSL) độ tinh khiết ≥ 97 % - Lithium L-lactate (≥ 98 %) từ Sigmaaldrich Code: 102567003; Lot:
SLCN3542
2.1.1.4. Hóa chất dung môi
- 2-nitrophenylhydrazine (2-NPH) độ tinh khiết ≥ 97 % với 30 % nước (Trung Quốc), Code: 128830100; Lot: A0403188
- 1-ethyl-3-(3-dirnethylaminopropy]) carbodiimide hydrochloride (EDC) từ Thermo scientific; Code: 22981; Lot: XK35L574
- Dung dịch HCl 36,5% (Merck) - KOH (Merck)
- Pyridine (Trung Quốc) - Các dung môi khác: n-hexan, chloroform, ethyl acetate, ethanol, methanol (Merck) với độ tinh khiết dùng trong sắc ký
- Nước deion: là nước cất hai lần được lọc qua bộ lọc siêu tinh khiết có cột trao đổi cation, anion và màng lọc 0,22 àm.
2.1.1.5. Chuẩn bị các dung dịch chuẩn và hoá chất thuốc thử
• Pha dung dịch chuẩn gốc acid lactic 1000 mg/L
Dung dịch chuẩn acid lactic được pha từ chất chuẩn lithium L-lactate tương ứng (mục 2.2.1.1) trong nước deion: Cân chính xác 106 mg chất chuẩn chuyển vào bình định mức 100,0 mL, hòa tan và định mức tới vạch bằng nước deion thu được dung dịch gốc có nồng độ 1000 mg/L. Dung dịch được bảo quản trong tủ lạnh.
• Pha dung dịch chuẩn làm việc
Dung dịch chuẩn làm việc có nồng độ 0,5 – 200 mg/L acid lactic được chuẩn bị bằng cách pha loãng từ dung dịch chuẩn gốc 1000 mg/L trong nước sử dụng pipetman với các bình định mức thích hợp.
• Pha dung dịch HCl 0,1 M
Dung dịch HCl 0,1 M được pha từ dung dịch HCl 36,5% bằng cách lấy 8,3 mL dung dịch HCl 36,5% bằng ống đong, pha loãng trong 1 L nước. Dung dịch được bảo quản ở nhiệt độ phòng.
• Pha dung dịch KOH 1% (w/v)
Cân 5,0 g KOH vào cốc thuỷ tinh có dung tích 100 mL, hoà tan với 50 mL ethanol. Chuyển dung dịch vào bình có nắp kín. Dung dịch được bảo quản ở nhiệt độ phòng.
• Pha dung dịch KOH 5% (w/v)
Cân 25,0 g KOH vào cốc thuỷ tinh có dung tích 100 mL, hoà tan với 50 mL ethanol-nước (1:1, v/v). Chuyển dung dịch vào bình có nắp kín. Dung dịch được bảo quản ở nhiệt độ phòng.
• Pha dung dịch KOH 5% (w/v)
Cân 25,0 g KOH vào cốc thuỷ tinh có dung tích 100 mL, hoà tan với 50 mL ethanol-nước (1:1, v/v). Chuyển dung dịch vào bình có nắp kín. Dung dịch được bảo quản ở nhiệt độ phòng.
• Pha dung dịch 2-NPH-HCl (0,02 M)
Cân 0,45 g 2-NPH vào cốc thuỷ tinh có dung tích 100 mL, hoà tan từ từ bằng dung dịch HCl 0,3 M trong ethanol với tỷ lệ 1:1 (v/v). Chuyển phần dung dịch vào bình định mức 100 mL và định mức đến vạch bằng dung dịch HCl trong ethanol trên, lắc, trộn đều. Dung dịch được bảo quản trong bình kín ở 4 oC trong 4 tuần.
• Pha dung dịch EDC-HCl (0,25 M)
Cân 4,78 g EDC-HCl vào cốc thuỷ tinh có dung tích 100 mL, hoà tan trong dung dịch 3% pyridine trong ethanol (v/v). Chuyển phần dung dịch vào bình định mức 100 mL và định mức đến vạch bằng dung dịch trên, lắc, trộn đều. Dung dịch được bảo quản trong bình kín ở 4 oC trong 4 tuần.