CHƢƠNG 2 : ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2.NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG TIỆN NGHIÊN CỨU
2.2.1. Mẫu mô dây rốn
Mô dây rốn thu từ sản phụ ngay sau khi sinh với các tiêu chuẩn nguồn mô nhƣ sau:
- Tiêu chuẩn y đức về nguồn cung cấp mô: Sản phụ đồng ý cung cấp dây rốn phục vụ nghiên cứu. Sản phụ đƣợc thơng báo bởi nhóm nghiên cứu về mục đích sử dụng mơ dây rốn do sản phụ cung cấp. Mô dây rốn chỉ phục vụ cho mục đích nghiên cứu điều trị vết thƣơng, vết bỏng mà khơng nhằm
mục đích thƣơng mại hóa. Sản phụ đồng ý cung cấp miễn phí dây rốn mà khơng địi hỏi về lợi ích kinh tế.
- Tiêu chuẩn sàng lọc: Ngƣời hiến mô dây rốn đạt tiêu chuẩn ngƣời hiến mơ nói chung theo quy định Luật hiến mơ của Quốc Hội nƣớc cộng hòa xã hội chủ nghĩa Việt Nam, Nghị định của chính phủ hƣớng dẫn thực hiện việc hiến và ghép mô và danh mục của Bộ y tế về tiêu chuẩn bệnh lý của ngƣời hiến mô.
- Ngƣời hiến dây rốn thử máu âm tính với các bệnh truyền nhiễm sau:
STT Bệnh lý Kết quả
1 HIV Âm tính
2 HBV Âm tính
3 HCV Âm tính
4 Giang mai Âm tính
- Tính pháp lý của nguồn mơ nghiên cứu
Mỗi nguồn cung cấp mơ đều có các hồ sơ cung cấp mô gồm, họ tên sản phụ, địa chỉ liên lạc, ý kiến đồng ý cung cấp mô và kết quả xét nghiệm hoặc thăm khám trƣớc sinh, hồ sơ các xét nghiệm sàng lọc. Hai loại hồ sơ này đƣợc lƣu trữ tại khoa Labo nghiên cứu ứng dụng điều trị bỏng- Viện Bỏng Quốc Gia.
2.2.2. Hóa chất chủ yếu dùng trong nghiên cứu
DMEM high glucose (Dulbeco’s Modified Eagle Media); DMEM-F12(Dulbeco’s Modified Eagle Media – F12) PBS (Phosphate – Buffered Salines);
Trypsin – EDTA (0,005% Trypsin, 0,53mM EDTA .Na): dung dịch gồm 0,5g/L trypsin và 0,2g/L EDTA.4Na trong dung dịch Hanks’ khơng có CaCl2;
FBS (Fetal Bovine Serum); DMSO (dimethyl sulfoxide); L-Glutamin
Vitamin C TGF-beta,
Insulin-like growth factor (IGF)-II EGF (Epidermal Growth Factor) Insulin,
Dung dịch Trypsin 0,05% và EDTA 0,53 mM trong dung dịch PBS Các hoá chất và vật tƣ nuôi cấy do hãng Invitrogen và PAAcung cấp, đều đạt tiêu chuẩn quốc tế an tồn về độc tính, vi khuẩn, mycoplasma và vi rút.
Mơi trƣờng nuôi cấy tế bào trung mô do Ngân hàng tế bào gốc Mekostem (Việt Nam) cung cấp theo bản quyền chuyển nhƣợng của công ty CRC (Singapore).
2.2.3. Các vật tƣ tiêu hao chủ yếu
Flash nuôi cấy tế bào loại 75cm2
và 25cm2. Đĩa petri loại D30, D60, D100;
Đĩa nuôi cấy 6 giếng, 12 giếng.
Pipet loại 1 mL, 2 mL, 5 mL, 10 mL, 25 mL; Ống ly tâm loại 15 mL, 50 mL;
Ống bảo quản tế bào lạnh sâu loại 1,2 mL; Màng Tegaderm,
Các vật tƣ tiêu hao do hãng Corning, 3M, Baxter cung cấp đạt tiêu chuẩn quốc tế về vơ trùng và phục vụ mục đích ni cấy tế bào.
2.2.4. Các thiết bị và dụng cụ chủ yếu
- Kính hiển vi đảo ngƣợc - Máy ly tâm lạnh
- Tủ hood lọc khơng khí vơ trùng - Tủ ấm (incubator) (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
- Pipet Aid
- Tủ lạnh gia dụng
- Tủ lạnh âm 860C và âm 1520C - Tank Nitơ lỏng
- Thiết bị hạ nhiệt độ theo chƣơng trình hoặc hộp hạ nhiệt độ với cồn PIA. - Nỉa, kéo
2.2.5 Các giá đỡ để tạo tấm vật liệu tƣơng đƣơng trung bì.
Màng Tegaderm chất liệu polyurethane do hãng 3M Health Care, USA cung cấp đƣợc dùng để làm giá đỡ tế bào.