- KOH 20% + Parker Ink - Giỏ để lam
- Lỏ kớnh
2.3 Phương phỏp nghiờn cứu
2.3.1 Thiết kế nghiờn cứu: nghiờn cứu mụ tả cắt ngang, tiến cứu.2.3.2 Kỹ thuật thu thập số liệu 2.3.2 Kỹ thuật thu thập số liệu
Thu thập số liệu theo mẫu bệnh ỏn thống nhất (phụ lục kốm theo)
2.3.3 Mẫu nghiờn cứu
Cỡ mẫu: Lấy mẫu thuận tiện bao gồm tất cả bệnh nhõn đến khỏm với cỏc biểu hiện như trờn nghi nhiễm vi nấm Malassezia.spp
2.3.3.3 Biến số nghiờn cứu
Khảo sỏt tỷ lệ nhiễm Malassezia spp - Khỏm và làm bệnh ỏn theo mẫu
+ Tổng số BN đến khỏm + Số BN nhiễm nấm da
+ Số BN cú cỏc biểu hiờn lõm sàng như trờn và xột nghiệm cú nấm
Malassezia spp gõy bệnh (theo tiờu chuẩn V.Silva và cộng sự)
+ Tuổi + Giới
+ Nghề nghiệp + Địa dư
+ Cỏc mựa trong năm
Xỏc định mức độ nhiễm vi nấm Malassezia spp bằng KOH 20% + Parker ink (2:1)
+ Chỳng tụi tiến hành lấy mẫu bệnh phẩm ở cỏc vị trớ được chỉ định cú nghi ngờ nhiễm nấm Malassezia spp. Đồng thời, lấy vẩy da tại một số vị trớ ở
vựng da khỏe mạnh bỡnh thường khụng cú biểu hiện một trong cỏc triệu chứng trờn của chớnh bệnh nhõn đú.
+ Sau đú, thực hiện phương phỏp soi trực tiếp bằng KOH 20% + Parker Ink với mục đớch so sỏnh mật độ tập trung của vi nấm ở cỏc vị trớ da lành và vựng da nghi nhiễm nấm nhằm đỏnh giỏ: Cú hay khụng vai trũ gõy bệnh của
Malassezia spp hay chỳng chỉ thuộc vi hệ mà khụng gõy bệnh trong một số
bệnh da thường gặp. Qua đú khuyến cỏo với lõm sàng về căn nguyờn gõy bệnh hay chỉ ra đú là nhiễm nấm cơ hội khiến tỡnh trạng bệnh thờm trầm trọng. Vỡ vậy, giỳp cỏc bỏc sỹ lõm sàng chẩn đoỏn và điều trị hiệu quả hơn.
2.3.3.4 Quy trỡnh thu thập số liệu
- Khảo sỏt tỷ lệ nhiễm nấm Malassezia spp ở một số bệnh ngoài da: Khỏm theo mẫu bệnh ỏn nghiờn cứu (Phụ lục)
- Xỏc định tỷ lệ độ tõp trung của vi nấm: Xột nghiệm trực tiếp bằng phương phỏp KOH + Parker ink (2:1)
Bệnh nhõn viờm da Khỏm lõm sàng Xột nghiệm
(-) (+) Tỷ lệ nấm gõy bệnh Loại nghiờn cứu
Tỷ lệ nhiễm Malassezia spp
Sơ đồ 2.2: Quy trỡnh thu thập số liệu
2.3.3.5 Kỹ thuật xột nghiệm trực tiếp tỡm Malassezia.spp
+ Bệnh phẩm: Vẩy da, chất bó
+ Húa chất: KOH 20% + Parker Ink (2:1) (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
+ Lấy mẫu bệnh phẩm: Sử dụng một trong hai phương phỏp sau.
• Cạo vẩy da bằng dao cựn
• Phương phỏp Scott: Nờn dựng băng dớnh lấy bệnh phẩm trong trường hợp
•• Vẩy da quỏ ớt khụng cạo bằng dao được •• Trẻ nhỏ bị ở vựng mặt, tay chõn
Lưu ý: trờn mỗi bệnh nhõn chỉ nờn lựa chọn sử dụng một phương phỏp
cũng như một húa chất xột nghiệm để giỳp cho việc so sỏnh, đỏnh giỏ kết quả chớnh xỏc.
Chỳng tụi nhận định mức độ nhiễm Malassezia spp thụng qua việc đỏnh giỏ mật độ tập trung của vi nấm dựa theo nghiờn cứu của V.Silva và cỏc cộng sự. Năm 1996 tại bệnh viện Sao Paolo - Brazil, ụng tiến hành nghiờn cứu trờn cỏc đối tượng là người bệnh và người bỡnh thường khỏe mạnh thụng qua kỹ thuật soi trực tiếp bằng Parker Ink kết hợp KOH và kỹ thuật nuụi cấy định, loại nấm [32].
+ Nhận định kết quả: KHV vật kớnh 40. Theo V.Silva và cộng sự [53] ● Âm tớnh : 0 - 3 tế bào nấm/VT
● Mức độ 1+ : 4-10 tế bào nấm/VT
● Mức độ 2+ : 11-20 tế bào nấm/VT ● Mức độ 3+ : 21- 40 tế bào nấm/VT ● Mức độ 4+ : ≥ 40 tế bào nấm/VT
- Bờn cạnh đú, chỳng tụi cũn tiến hành kết hợp với phương phỏp soi đốn Wood để phối hợp tỡm vị trớ tập trung vi nấm trờn thương tổn.
2.4.4 Xử lý số liệu
Nhập và xử lý số liệu theo chương trỡnh SPSS 16.0
Sau khi xử lý cỏc số liệu chỳng tụi đưa ra cỏc tỷ lệ (%) bệnh nhõn nhiễm Malassezia spp trong tổng số bệnh da, tỷ lệ (%) bệnh nhõn nhiễm
Malassezia spp trong tổng số bệnh nhõn nhiễm nấm da, tỷ lệ (%) bệnh nhõn
nhiễm nấm Malassezia spp theo tuổi, giới, nghề nghiệp, địa dư, cỏc mựa trong năm, tỷ lệ (%) bệnh nhõn Malassezia theo từng nhúm bệnh, cỏc tỷ lệ (%) mật độ tập trung của tế bào nấm men trờn KHV.
2.4.5 Đạo đức trong nghiờm cứu
- Nghiờn cứu được sự đồng ý Ban giỏm đốc Bệnh viện - Nghiờn cứu được sự chấp thuận của hội đồng đạo đức - Bệnh nhõn đồng ý tham gia nghiờn cứu
CHƯƠNG 3
KẾT QUẢ NGHIấN CỨU
3.1 Tỡnh hỡnh nhiễm nấm Malassezia.spp ở một số bệnh daBảng 3.1: Tỷ lệ nhiễm Malassezia ở LB, VDD, VDCĐ trờn tổng số BN Bảng 3.1: Tỷ lệ nhiễm Malassezia ở LB, VDD, VDCĐ trờn tổng số BN Bảng 3.1: Tỷ lệ nhiễm Malassezia ở LB, VDD, VDCĐ trờn tổng số BN xột nghiệm tỡm nấm. Bệnh lý VDD VDCĐ Lang ben n % n % n % Do Malassezia sp (Mật độ ≥ 20 TB/ VT) 162 0,37 123 0,28 641 1,48 Khụng do Malassezia. sp 43090 99,62 43129 99,71 42611 98,52 Tổng số bệnh da XN 43252 100 43252 100 43252 100
Nhận xột: Tỷ lệ bệnh nhõn nhiễm Malassezia.spp trong LB chiếm tỷ lệ cao
nhất 1,48%. Tiếp theo là VDD chiếm 0,37%. Cũn chiếm tỷ lệ ớt nhất trong VDCĐ 0,28%.
3.1.1 Phõn bố tỷ lệ nhiễm nấm do Malassezia spp theo cỏc mựa trong năm
Biểu đồ 3.1. Phõn bố nhiễm nấm da do Malassezia spp theo mựa
Nhận xột: Tỷ lệ bệnh nhõn cú nhiễm Malassezia.spp trong cả 3 nhúm bệnh:
LB, VDD, VDCĐ đều cú xu hướng nặng lờn vào cuối mựa xuõn và đầu mựa hố.
3.1.2 Phõn bố bệnh nấm da do Malassezia spp theo giới
Nhận xột: Nhận xột: Trong VDD nam chiếm ưu thế (67,3%), nữ (32,7%). Sự
khỏc biệt cú ý nghĩa thống kờ với P<= 0,001. Cũn trong LB và VDCĐ tỷ lệ nam, nữ bị bệnh gần ngang nhau. Sự khỏc biệt khụng cú ý nghĩa thống kờ. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
3.1.3 Phõn bố bệnh nấm do Malassezia spp theo tuổi
Bảng 3.2. Phõn bố bệnh nấm do Malassezia spp theo tuổi
Nhúm tuổi VDD VDCĐ Lang ben n % n % n % 0 - 5 64 29,9 44 28,9 429 39,5 6 – 10 25 16,4 39 3,6 11 – 19 46 21,5 25 16,4 144 13,3 20 – 29 42 19,7 19 12,5 246 22,6 30 – 39 33 15,4 22 14,5 139 12,8 40 – 49 23 10,7 5 3,4 67 6,2 ≥ 50 6 2,8 12 7,9 23 2,1 Tổng số 214 100 152 100 1087 100
Nhận xột: Ở nhúm bệnh nhõn trong độ tuổi 0-5 bị nhiễm Malassezia.spp
trong cả 3 bệnh chiếm tỷ lệ cao nhất khoảng 28 - 40%. Tiếp theo là nhúm bệnh nhõn cú độ tuổi 11-29 chiếm khoảng 21-22%. Cũn nhúm tuổi 40-50 chiếm tỷ lệ bệnh thấp nhất khoảng 2-3%.
3.1.4 Phõn bố bệnh nấm do Malassezia. spp theo nghề nghiệp
Bảng 3.3. Phõn bố bệnh nấm do Malassezia.spp theo nghề nghiệp
Nghề nghiệp VDD VDCĐ Lang ben
n % n % n %
Trẻ em 35 16,4 44 28,9 429 39,5
Học sinh, sinh viờn 81 37,9 58 38,2 39 3,6
CBCNV 58 27 30 19,7 401 36,9
Nụng dõn 29 13,6 8 5,3 118 10,8
Tự do 11 5,1 12 7,9 100 9,2
Tổng số 214 100 152 100 1087 100
Nhận xột: Tỷ lệ bệnh nhõn nhiễm Malassezia trong bệnh VDD và VDCĐ chiếm tỷ lệ cao nhất ở nhúm HSSV ( 37,9%; 38,2%). Cún trong LB số trẻ em chiếm tỷ lệ cao nhất 39,5%. Tỷ lệ nhiễm Malassezia.spp ở cả 3 bệnh đều ớt gặp ở nhúm nghề tự do và nụng dõn.
3.1.5 Phõn bố nhiễm nấm do Malassezia spp theo địa dư
Bảng 3.4. Tỷ lệ bệnh nhõn nhiễm nấm do Malassezia.spp theo địa dư
Địa dư VDD VDCĐ Lang ben
n % n % n %
Thành thị 156 72,9 86 56,6 686 63,1
Nụng thụn 58 27,1 66 43,4 401 36,9
Tổng số 214 100 152 100 1087 100
Nhận xột: Tỷ lệ bệnh nhõn nhiễm nấm Malassezia.spp ở 3 bệnh ở thành thị đều cao hơn vựng nụng thụn.
3.1.6. Phõn bố nhiễm nấm do Malassezia spp theo vị trớ hay gặp
Vị trớ VDD VDCĐ Lang ben n % n % n % Đầu, mặt, cổ 139 64,9 83 54,6 440 40,5 Lưng, ngực 46 21,6 39 25,7 547 50,3 Tay 0 0 3 2 73 6,7 Chõn 6 2,7 5 3,2 0 0 Tầng sinh mụn 0 0 3 2 0 0 Khỏc 23 10,8 19 12,5 27 2,5 Tổng số 214 100 152 100 1087 100 Vị trớ VDD VDCĐ Lang ben n % n % n % Đầu, mặt, cổ 139 64,9 83 54,6 440 40,5 Lưng, ngực 46 21,6 39 25,7 547 50,3 P p < 0,001 p < 0,05 p < 0,01 Nhận xột: - Hầu hết cỏc bệnh nhõn ở 2 nhúm bệnh VDD và VDCĐ đều bị vựng đầu, mặt, cổ ( 64,9% và 54,6%)
- Cũn ở nhúm LB chủ yếu bệnh nhõn bị bệnh vựng lưng ngực chiếm khoảng 50,3%. Trong cả 3 bệnh Cũn vựng da tay, chõn và vựng sinh dục tầng sinh mụn chiếm tỷ lệ rất thấp
3.2. Xỏc định mức độ nhiễm vi nấm Malassezia spp trong một số bệnh da thường gặp bằng kỹ thuật KOH 20% + Parker Ink (2:1)
Bảng 3.6: Xỏc định số lượng vi nấm Malassezia với bệnh lang ben
Số lượng Số bệnh nhõn Tỷ lệ % 0 – 3 TB/vi trường 73 6,7 4-10 TB/ vi trường 167 15,4 11-19 TB/ vi trường 206 18,9 20-39 TB/Vi trường 379 34,9 ≥ 40 TB/ vi trường 262 24,1 Tổng số 1087 100 (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Nhận xột: Tỷ lệ bệnh nhõn LB cú xột nghiệm tỡm số lương Malassezia .spp >
=20 tế bào /VT chiếm 59%, cũn < 20 tế bào/ VT chiếm khoảng 41%.
Số lượng Số bệnh nhõn Tỷ lệ %
< 20 TB/vi trường 446 41
≥ 20 TB/ vi trường 641 59
Bảng 3.7: Xỏc định số lượng vi nấm Malassezia.spp ở bệnh VDCĐ
Số lượng tế bào nấm men Số bệnh nhõn (n) Tỷ lệ %
0-3 TB/VT 4 2,6 4-10 TB/VT 7 4,6 11-19 TB/VT 18 11,8 20-39 TB/Vi trường 72 47,4 ≥ 40 TB/ vi trường 51 33,5 Tổng số 152 100 Số lượng Số bệnh nhõn Tỷ lệ % < 20 TB/vi trường 29 19,1 ≥ 20 TB/ vi trường 123 80,9 P p < 0,001
Nhận xột: Tỷ lệ bệnh nhõn VDCĐ cú xột nghiệm tỡm số lương Malassezia.spp > =20 TB/VT chiếm 80,9%, cũn < 20 TB/ VT chiếm khoảng 19,1 %.
Bảng 3.8. Xỏc định số lượng vi nấm Malassezia với bệnh VDD
Số lượng Số bệnh nhõn Tỷ lệ % 0-3 TB/Vi trường 8 3,7 4-10 TB/ Vi trường 15 7 11- 19 TB/Vi trường 29 13,5 20-39 TB/ Vi trường 94 43,9 ≥ 40 TB/Vi trường 68 31,8 Tổng số 214 100 Số lượng Số bệnh nhõn Tỷ lệ % < 20 TB/vi trường 52 24,3 ≥ 20 TB/ vi trường 162 75,7 P p < 0,001
Nhận xột : Tỷ lệ bệnh nhõn bị VDD cú xột nghiệm tỡm số lương Malassezia .spp > =20 tế bào /VT chiếm 59%, cũn < 20 tế bào/ VT chiếm khoảng 41 %.
Bảng 3.9: Bảng kết quả mật độ vi nấm Malassezia trong 3 bệnh
N % n % N % Thành đỏm 122 57 69 45,4 323 29,7 Rải rỏc 92 43 83 54,6 340 31,3 Sợi và bào tử 0 0 0 0 424 39 Tổng số 214 100 152 100 1087 100 Nhận xột:
- Trong VDD mật đụ Malassezia tập trung thành đỏm chiếm đa số (57%), đứng rải rỏc khoảng 43%..
- Trong VDCĐ chủ yếu quan sat thấy mật độ vi nấm đứng rải rỏc 54,6%, cũn tập trung thành đỏm 45,4%. Tuy nhiờn, dự tập trung đỏm hay rỏc rỏc nhưng với số lương vi nấm đếm được từ >= 20 TB/VT mới bỏo cỏo kết quả.
- Khụng tỡm thấy hỡnh thỏi sợi nấm và tế bào nấm men trong VDD và VDCĐ. Nhưng hỡnh thỏi này trong LB rất phổ biến chiếm 39%. Cũn tập trung thành đỏm và rải rỏc lần lượt chiếm 29,7% ; 31,3%.
Bảng 3.10: Mật độ Malassezia.spp da lành – da bệnh Mật độ Malassezi a Bệnh lý Da bệnh Da lành p VDD 32,83 ± 17,11 2,4 ± 1,95 p < 0,01 VDCĐ 37,33 ± 33,31 2 ± 1,25 Lang ben 34,93 ± 21,73 2,4 ± 2,5
Nhận xột: Mật độ trung bỡnh của vi nấm cú mặt tại vựng da bệnh nhiều hơn hẳn vựng da lành trong cả 3 nhúm bệnh. Sự khỏc biệt cú ý nghĩa thống kờ với p <0,01.
Chương 4 BÀN LUẬN
4.1 Tỡnh hỡnh nhiễm Malassezia.spp trong bệnh LB, VDD, VDCĐ tại bệnh viện Da liễu TW bệnh viện Da liễu TW
4.1.1. Tỷ lệ nhiễm Malassezia trong bệnh LB, VDD, VDCĐ trờn tổng số bệnh da bệnh da
Theo nghiờn cứu của chỳng tụi (bảng 3.1 ), tỷ lệ bệnh nhõn được làm xột nghiệm soi tươi trực tiếp dưới kớnh hiển vi cú số lượng Malassezia ≥ 20 TB/ vi trường cao nhất ở nhúm bệnh nhõn LB với tỷ lệ 1,48%, tiếp đú là VDD 0,37% và thấp nhất là VDCĐ 0,28%.
Nghiờn cứu của chỳng tụi nhận thấy tỷ lệ nhiễm Malassezia.spp trong bệnh LB là cao nhất (1.48%). Tỷ lệ này của chỳng tụi tương đương với tỏc giả Nguyễn Thị Tuyết Mai là 1,76% [44]. Mặc dự khụng nghiờn cứu trực tiếp nhưng qua kết quả này cú thể suy đoỏn trờn thực tế tỷ lệ bệnh trong toàn dõn khỏ cao. Theo nghiờn cứu của Trần Lan Anh tỷ lệ bệnh ở mỗi xó thuộc huyện Thanh trỡ là 3,1% [41]. Nghiờn cứu khỏc của Phạm Văn Hiển là 3,5% cao hơn nghiờn cứu của chỳng tụi (1,48%) [54]. Cú lẽ do cỏc nghiờn cứu trờn thực hiện tại cộng đồng hoặc tại cơ sở sản xuất mang tớnh chất đặc thự nghề nghiệp. Bờn canh đú, Việt Nam là nước khớ hậu nhiệt đới núng ẩm, mưa nhiều rất thuận lợi cho cỏc loại vi nấm phỏt triển và gõy bệnh trong đú cú vi nấm Malassezia spp mà theo đa số tỏc giả nhận thấy điều kiờn khớ hậu thuận lợi là yếu tố ảnh hưởng lớn nhất tới bệnh quỏ trỡnh hỡnh thành, phỏt sinh và phỏt triển bệnh [42],[21].
Theo nghiờn cứu Suneuschin 1998 bệnh lang ben chiếm 40% dõn số. Ở Iran chiếm 6% trong số bệnh da chung và 30 % bệnh nấm da [40]. Charuwichitratana là 4% trong tổng số bệnh nhõn da liễu đến khỏm bệnh [55]. Trong bệnh VDD tỷ lệ Malassezia.spp được tỡm thấy là 0,37%. Tỷ lệ này của chỳng tụi thấp hơn cỏc nghiờn cứu khỏc. Tại Việt Nam, năm 2006 nghiờn cứu Lờ Anh Tuấn (30,1%), năm 2009 Hoàng Thị Phượng (41,3%) [42], [33]. Thực tế trong hai nghiờn cứu ở trờn sử dụng kỹ thuật soi tươi KOH 10% đơn thuần để tỡm Malassezia.spp tại thương tổn. Do nhược điểm của kỹ thuật nờn khi nhận định vi nấm cú thể bỏ sút đồng thời khi tỡm thấy Malassezia dự chỉ là 3 tế bào trờn vi trường (1+) cũng kết luận là cú nấm gõy bệnh. Cũn trong nghiờn cứu chỳng tụi vừa ỏp dụng kỹ thuật KOH 20% + Parker Ink khắc phục nhược điểm trờn và chỉ kết luận cú sự hiện diện của vi nấm khi quan sỏt >= 20 tế bào trờn vi trường. Điều này phự hợp với nghiờn cứu V.Silva và Zaidi [53], [15].
Nghiờn cứu khỏc trờn thế giới đều cao hơn nghiờn cứu chỳng tụi. Tỏc giả Asja Prohic và cộng sự năm 2009 nghiờn cứu trờn 45 bệnh nhõn cú tổn thương da đầu và tổn thương da thõn mỡnh cho thấy tỷ lệ bệnh nhõn VDD nuụi cấy cú Malassezia là 87,5% [56]. Theo Tajima M. và cộng sự (năm 2008), trong số 35 bệnh nhõn VDD (31 mẫu lấy tại tổn thương, 27 mẫu tại vựng khụng cú tổn thương), tỷ lệ phỏt hiện M. globosa và M. restricta lần lượt là 93.5% và 61.3% [16]. Nghiờn cứu của tỏc giả M. Saghazadeh năm 2010 trờn 47 bệnh nhõn VDD, tỷ lệ soi tươi trực tiếp dương tớnh với Malassezia là 95,7%, trong khi với phương phỏp nuụi cấy tỷ lệ này là 85,1% [48].Theo Saghazadeh M. và cộng sự, tỷ lệ này là 69,1% khi sử dụng phương phỏp nuụi cấy [48]. Tỷ lệ bệnh nhõn VDD cú Malassezia trong nghiờn cứu của chỳng tụi thấp hơn so với nghiờn cứu của cỏc tỏc giả trờn thế giới ngay cả khi cỏc tỏc giả đó sử dụng phương phỏp nuụi cấy (là phương phỏp cú độ nhạy thấp hơn so
với soi tươi trực tiếp trong nghiờn cứu của chỳng tụi). Chỳng tụi cho rằng tỷ lệ này khỏc nhau cú thể do sự khỏc biệt về địa lý, khớ hậu, kinh tế và cả yếu tố