- Hộp đựng dụng cụ khử khuẩn
4.2.1.Xỏc định số lượng Malassezia.spp trong LB, VDD, VDCĐ
Trong nghiờn cứu của chỳng tụi khi tiến hành xỏc định số lượng Malassezia.spp bằng kỹ thuật KOH 20% + Parker ink (bảng 3.6, bảng 3.7, bảng 3.8) cho thấy: Tỷ lệ bệnh nhõn nhiễm Malassezia cú xột nghiệm tỡm số lương Malassezia .spp > =20 tế bào /VT trong cả 3 bệnh đều cao hơn số lượng < 20 tế bào/ VT. Trong bệnh LB (59% >41%), VDD (75,9 % > 24,3%) và VDCĐ (80,9 % > 19,1%).
Nghiờn cứu V. Silva và cộng sự khẳng định trong nghiờn cứu về tầm quan trọng của soi trực tiếp trờn kớnh hiển vi và để tiện đỏnh gia ụng đó đưa ra bộ chỉ số về số lượng Malassezia. Nghiờn cứu thực hiện 76 người trong đú 30 người khỏe mạnh, 46 người bị lang ben nhận thấy: ở nhúm khỏe mạnh chủ yếu dưới 10 tế bào trờn vi trường, trong đú hơn 90% dưới 3 tế bào trờn vi trường [53]. Cũn nhúm bị lang ben khi soi kớnh hiển vi chủ yếu là trờn 10 tế bào trờn vi trường, trong đú trờn 93,5% gặp 20 tế bào trờn vi trường. Sau đú, ụng kiểm chứng điều đú bằng cỏch tiến hành nuụi cấy và định loại cỏc trường hợp trờn nhưng kết quả thu được chủ yếu là nhúm bị lang ben cú nấm mọc và thường gặp loài M.globosa gõy bệnh. Qua đú, V. Silva khẳng định việc soi trực tiếp cho kết quả nhanh, nhạy và khỏ chớnh xỏc. Tuy nhiờn cũn tựy thuộc vào cỏch lấy bệnh phẩm, húa chất sử dụng để soi và kinh nghiệm người thực hiện.
Theo nghiờn cứu V.Silva và cộng sự cho biết việc tỡm kiếm và đỏnh giỏ số lương cũng như mật độ tập trung của Malassezia trờn kớnh hiển vi thụng qua cỏc xột nghiệm trực tiếp rất quan trọng, cũn việc nuụi cấy định loại vi nấm khụng cần thiết phải đặt ra cho cỏc phũng thớ nghiờm lõm sàng, chỳng chỉ phục vụ cho việc nghiờn cứu sõu hơn. Chớnh vỡ vậy, nhằm đỏnh giỏ số lượng vi nấm và để khắc phục một số nhược điểm của phương phỏp soi trực
tiếp nhúm nghiờn cứu chỳng tụi đó ỏp dụng nghiờn cứu của V.Silva và cộng sự. Ngoài ra, chỳng tụi cũn quan tõm đến mật độ của Malassezia spp tập trung thành đỏm hay rải rỏc trờn tiờu bản. Bởi vỡ, trờn thực tế vi nấm núi riờng hay cỏc vi sinh vật khỏc núi chung gõy bệnh phụ thuộc vào số lượng, độc lực và sức đề khỏng vật chủ. Trong đú, độc lực đúng vai trũ khỏ quan trọng thể hiện sức mạnh tập thể cũng như khả năng sinh sụi rất nhanh và nhiều của nấm, nờn khi quan sỏt chỳng ta nhận thấy chỳng tập trung thành đỏm. Cũn khi quan sỏt thấy cỏc tế bào men đứng rải rỏc trờn tiờu bản, chỳng tụi tiến hành đếm số lượng vi nấm xuất hiờn ở 10 đến 20 vi trường, sau đú lấy trung bỡnh cộng và từ đú tớnh được số lượng vi nấm cần bỏo cỏo.
Trờn thực tế chỳng tụi chưa tỡm được nghiờn cứu nào để so sỏnh kết quả. Tuy nhiờn, cho dự mật độ tế bào nấm Malassezia cú tập trung hay rải rỏc thỡ chỳng tụi thiết nghĩ vẫn nờn bao cỏo sự hiện diện của vi nấm để khuyến cỏo cỏc bỏc sỹ cõn nhắc điều trị với số lượng từ 20 tế bào nấm Malassezia
trờn vi trường.
Chưa cú nhiều nghiờn cứu của cỏc tỏc giả trờn thế giới đề cập đến mật độ của vi nấm men trong cỏc bệnh da, đặc biệt là trong nấm múng do
Malassezia. Do đú chỳng tụi chưa cú điều kiện so sỏnh với nghiờn cứu của
mỡnh. Tuy nhiờn cú thể thấy trong nghiờn cứu của chỳng tụi tỷ lệ bệnh nhõn cú mật độ vi nấm ở mức độ trung bỡnh và cao chiếm tỷ lệ khỏ lớn. Kết quả này cú thể chưa phản ỏnh đỳng tỡnh hỡnh thực tế do cỡ mẫu trong nghiờn cứu của chỳng tụi cũn chưa lớn. Ngoài ra những bệnh nhõn đến khỏm tại bệnh viện Da liễu TW đa số là những bệnh nhõn bị bệnh tương đối nặng, thời gian kộo dài, điều trị dai dẳng nhiều nơi mà khụng tiến triển. Ở những bệnh nhõn này, hàng rào bảo vệ da suy yếu, da bị tổn thương nặng nề kết hợp với sự cú mặt của Malassezia lỳc này sẽ làm trầm trọng thờm tỡnh trạng bệnh. Đõy cũng cú thể coi là một trong những nguyờn nhõn làm mật độ Malassezia tại vựng
Theo ý kiến chủ quan của chỳng tụi, sự khỏc nhau giữa cỏc nghiờn cứu này cú thể do sự ảnh hưởng của nhiều yếu tố: như độ nhạy và độ dặc hiệu của kỹ thuật được sử dụng, tựy từng chủng nấm khỏc nhau trong từng nghiờn cứu… Trong phạm vi nghiờn cứu của đề tài này, chỳng tụi mới chỉ làm xột nghiệm soi tươi đơn thuần dưới kớnh hiển vi, mặc dự đõy là phương phỏp cú độ nhạy tương đối cao so với phương phỏp nuụi cấy nhưng vẫn khụng thể so sỏnh một cỏch tương quan với kết quả của cỏc tỏc giả trờn thế giới khi đề cập đến từng chủng nấm cụ thể. Để cú một cỏi nhỡn toàn diện và chớnh xỏc hơn, chỳng tụi mong muốn được tiến hành đề tài ở mức độ sõu hơn và rộng hơn, ỏp dụng nhiều kỹ thuật để đỏm bảo tớnh khỏch quan cũng như chớnh xỏc của số liệu thu thập được