3.2.2.1. Xác định trình tự đoạn gen cry1Ab
Plasmid tái tổ hợp pGEM -T Easy-cry1Ab-3.4TN-p3, pGEM-T Easy-
cry1Ab-36.8TN-p5 và pGEM-T Easy-cry1Ab-6.8TN-p1 được chọn để đọc trình tự . Kết quả thể hiện trên hình 3.10 cho thấy đoạn gen cry1Ab của 3 chủng 3.4TN, 36.8TN và 6.8TN có kích thước 238 nucleotide, có độ tương đồng 99% so với 2 trình tự có mã số DQ241675.1 và EF220269.1 trên ngân
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
3.4TN có 1 sự thay đổi so với 2 trình tự trên (232: T thành C ). Trình tự đoạn gen cry1Ab của chủng 6.8TN có 2 sự thay đổi so với 2 trình tự trên (169: T thành A, 194: A thành C ), Đây là đoạn đặc hiệu của gen cry1Ab mã hóa tổng
hợp potein endo toxin Cry 1Ab của chủng Bacillus thuringiensis Btc008
(DQ241675.1) và Bacillus thuring BtS2491Ab
10 20 30 40 50 60 ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| 3.4TN-1Ab-p3 TCGAATTGAA TTTGTTCCGG CAGAAGTAAC CTTTGAGGCA GAATATGATT TAGAAAGAGC 36.8TN-1Ab-p5 TCGAATTGAA TTTGTTCCGG CAGAAGTAAC CTTTGAGGCA GAATATGATT TAGAAAGAGC 6.8TN-1Ab-p1 TCGAATTGAA TTTGTTCCGG CAGAAGTAAC CTTTGAGGCA GAATATGATT TAGAAAGAGC DQ241675.1 TCGAATTGAA TTTGTTCCGG CAGAAGTAAC CTTTGAGGCA GAATATGATT TAGAAAGAGC EF683163.1 TCGAATTGAA TTTGTTCCGG CAGAAGTAAC CTTTGAGGCA GAATATGATT TAGAAAGAGC 70 80 90 100 110 120 ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....|
3.4TN-1Ab-p3 ACAAAAGGCG GTGAATGAGC TGTTTACTTC TTCCAATCAA ATCGGGTTAA AAACAGATGT
36.8TN-1Ab-p5 ACAAAAGGCG GTGAATGAGC TGTTTACTTC TTCCAATCAA ATCGGGTTAA AAACAGATGT
6.8TN-1Ab-p1 ACAAAAGGCG GTGAATGAGC TGTTTACTTC TTCCAATCAA ATCGGGTTAA AAACAGATGT
DQ241675.1 ACAAAAGGCG GTGAATGAGC TGTTTACTTC TTCCAATCAA ATCGGGTTAA AAACAGATGT
EF683163.1 ACAAAAGGCG GTGAATGAGC TGTTTACTTC TTCCAATCAA ATCGGGTTAA AAACAGATGT
130 140 150 160 170 180 ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| 3.4TN-1Ab-p3 GACGGATTAT CATATTGATC AAGTATCCAA TTTAGTTGAG TGTTTATCTG ATGAATTTTG 36.8TN-1Ab-p5 GACGGATTAT CATATTGATC AAGTATCCAA TTTAGTTGAG TGTTTATCTG ATGAATTTTG 6.8TN-1Ab-p1 GACGGATTAT CATATTGATC AAGTATCCAA TTTAGTTGAG TGTTTATCAG ATGAATTTTG DQ241675.1 GACGGATTAT CATATTGATC AAGTATCCAA TTTAGTTGAG TGTTTATCTG ATGAATTTTG EF683163.1 GACGGATTAT CATATTGATC AAGTATCCAA TTTAGTTGAG TGTTTATCTG ATGAATTTTG 190 200 210 220 230 ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|..
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
36.8TN-1Ab-p5 TCTGGATGAA AAAAAAGAAT TGTCCGAGAA AGTCAAACAT GCGAAGCGAC TCAGTGA
6.8TN-1Ab-p1 TCTGGATGAA AAACAAGAAT TGTCCGAGAA AGTCAAACAT GCGAAGCGAC TCAGTGA
DQ241675.1 TCTGGATGAA AAAAAAGAAT TGTCCGAGAA AGTCAAACAT GCGAAGCGAC TTAGTGA
EF683163.1 TCTGGATGAA AAAAAAGAAT TGTCCGAGAA AGTCAAACAT GCGAAGCGAC TTAGTGA
Hình 3.10. So sánh trình tƣ̣ gen cry1Ac của chủng 3.4TN và chủng 36.8TN với các trình tự trên ngân hàng gen quốc tế bằng phần mềm BioEdit
3.2.2.1. Xác định trình tự đoạn gen cry1Ac
Plasmid tái tổ hợp pGEM -T Easy-cry1Ac-3.4TN-p1, pGEM-T Easy-
cry1Ac-36.8TN-p3 và pGEM-T Easy-cry1Ac-6.8TN-p1 được chọn để đọc trình tự . Kết quả thể hiện trên hìn h 3.11 cho thấy đoạn gen cry1Ac có kích thước 487 nucleotide của chủng 3.4TN và 36.8TN có độ tương đồng 100%,
đoạn gen cry1Ac của chủng 6.8TN có độ tương đồng 99% so với 2 trình tự có
mã số GU294785.1 và EU 282379.1 trên ngân hàng gen qu ốc tế . Trong đó , trình tự cry1Ac của chủng 6.8TN có 2 sự thay đổi so với 2 trình tự trên (42: G thành A , 76: T thành G ) Đây là đoạn đặc hiệu của gen cry1Ac mã hóa tổng
hợp potein endotoxin Cry 1Ac của chủng Bacillus thuringiensis HD07
(DQ785781.1) và Bacillus thuringiensis serovar kurstaki W015
10 20 30 40 50 60 ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| 3.4TN-1Ac-p1 TCACTTCCCA TCGACATCTA CCAGATATCG AGTTCGTGTA CGGTATGCTT CTGTAACCCC 6.8TN-1AC-P1 TCACTTCCCA TCGACATCTA CCAGATATCG AGTTCGTGTA CAGTATGCTT CTGTAACCCC 36.8TN-1AC-p3 TCACTTCCCA TCGACATCTA CCAGATATCG AGTTCGTGTA CGGTATGCTT CTGTAACCCC GU294785.1 TCACTTCCCA TCGACATCTA CCAGATATCG AGTTCGTGTA CGGTATGCTT CTGTAACCCC EU282379.1 TCACTTCCCA TCGACATCTA CCAGATATCG AGTTCGTGTA CGGTATGCTT CTGTAACCCC 70 80 90 100 110 120 ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| 3.4TN-1Ac-p1 GATTCACCTC AACGTTAATT GGGGTAATTC ATCCATTTTT TCCAATACAG TACCAGCTAC
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 6.8TN-1AC-P1 GATTCACCTC AACGTGAATT GGGGTAATTC ATCCATTTTT TCCAATACAG TACCAGCTAC 36.8TN-1AC-p3 GATTCACCTC AACGTTAATT GGGGTAATTC ATCCATTTTT TCCAATACAG TACCAGCTAC GU294785.1 GATTCACCTC AACGTTAATT GGGGTAATTC ATCCATTTTT TCCAATACAG TACCAGCTAC EU282379.1 GATTCACCTC AACGTTAATT GGGGTAATTC ATCCATTTTT TCCAATACAG TACCAGCTAC 130 140 150 160 170 180 ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| 3.4TN-1Ac-p1 AGCTACGTCA TTAGATAATC TACAATCAAG TGATTTTGGT TATTTTGAAA GTGCCAATGC 6.8TN-1AC-P1 AGCTACGTCA TTAGATAATC TACAATCAAG TGATTTTGGT TATTTTGAAA GTGCCAATGC 36.8TN-1AC-p3 AGCTACGTCA TTAGATAATC TACAATCAAG TGATTTTGGT TATTTTGAAA GTGCCAATGC GU294785.1 AGCTACGTCA TTAGATAATC TACAATCAAG TGATTTTGGT TATTTTGAAA GTGCCAATGC EU282379.1 AGCTACGTCA TTAGATAATC TACAATCAAG TGATTTTGGT TATTTTGAAA GTGCCAATGC 190 200 210 220 230 240 ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| 3.4TN-1Ac-p1 TTTTACATCT TCATTAGGTA ATATAGTAGG TGTTAGAAAT TTTAGTGGGA CTGCAGGAGT 6.8TN-1AC-P1 TTTTACATCT TCATTAGGTA ATATAGTAGG TGTTAGAAAT TTTAGTGGGA CTGCAGGAGT 36.8TN-1AC-p3 TTTTACATCT TCATTAGGTA ATATAGTAGG TGTTAGAAAT TTTAGTGGGA CTGCAGGAGT GU294785.1 TTTTACATCT TCATTAGGTA ATATAGTAGG TGTTAGAAAT TTTAGTGGGA CTGCAGGAGT EU282379.1 TTTTACATCT TCATTAGGTA ATATAGTAGG TGTTAGAAAT TTTAGTGGGA CTGCAGGAGT 250 260 270 280 290 300 ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| 3.4TN-1Ac-p1 GATAATAGAC AGATTTGAAT TTATTCCAGT TACTGCAACA CTCGAGGCTG AATATAATCT 6.8TN-1AC-P1 GATAATAGAC AGATTTGAAT TTATTCCAGT TACTGCAACA CTCGAGGCTG AATATAATCT 36.8TN-1AC-p3 GATAATAGAC AGATTTGAAT TTATTCCAGT TACTGCAACA CTCGAGGCTG AATATAATCT GU294785.1 GATAATAGAC AGATTTGAAT TTATTCCAGT TACTGCAACA CTCGAGGCTG AATATAATCT EU282379.1 GATAATAGAC AGATTTGAAT TTATTCCAGT TACTGCAACA CTCGAGGCTG AATATAATCT 310 320 330 340 350 360 ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....|
3.4TN-1Ac-p1 GGAAAGAGCG CAGAAGGCGG TGAATGCGCT GTTTACGTCT ACAAACCAAC TAGGGCTAAA
6.8TN-1AC-P1 GGAAAGAGCG CAGAAGGCGG TGAATGCGCT GTTTACGTCT ACAAACCAAC TAGGGCTAAA
36.8TN-1AC-p3 GGAAAGAGCG CAGAAGGCGG TGAATGCGCT GTTTACGTCT ACAAACCAAC TAGGGCTAAA
GU294785.1 GGAAAGAGCG CAGAAGGCGG TGAATGCGCT GTTTACGTCT ACAAACCAAC TAGGGCTAAA
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 370 380 390 400 410 420 ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| 3.4TN-1Ac-p1 AACAAATGTA ACGGATTATC ATATTGATCA AGTGTCCAAT TTAGTTACGT ATTTATCGGA 6.8TN-1AC-P1 AACAAATGTA ACGGATTATC ATATTGATCA AGTGTCCAAT TTAGTTACGT ATTTATCGGA 36.8TN-1AC-p3 AACAAATGTA ACGGATTATC ATATTGATCA AGTGTCCAAT TTAGTTACGT ATTTATCGGA GU294785.1 AACAAATGTA ACGGATTATC ATATTGATCA AGTGTCCAAT TTAGTTACGT ATTTATCGGA EU282379.1 AACAAATGTA ACGGATTATC ATATTGATCA AGTGTCCAAT TTAGTTACGT ATTTATCGGA 430 440 450 460 470 480 ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....| ....|....|
3.4TN-1Ac-p1 TGAATTTTGT CTGGATGAAA AGCGAGAATT GTCCGAGAAA GTCAAACATG CGAAGCGACT
6.8TN-1AC-P1 TGAATTTTGT CTGGATGAAA AGCGAGAATT GTCCGAGAAA GTCAAACATG CGAAGCGACT
36.8TN-1AC-p3 TGAATTTTGT CTGGATGAAA AGCGAGAATT GTCCGAGAAA GTCAAACATG CGAAGCGACT
GU294785.1 TGAATTTTGT CTGGATGAAA AGCGAGAATT GTCCGAGAAA GTCAAACATG CGAAGCGACT
EU282379.1 TGAATTTTGT CTGGATGAAA AGCGAGAATT GTCCGAGAAA GTCAAACATG CGAAGCGACT ....|. 3.4TN-1Ac-p1 CAGTGA 6.8TN-1AC-P1 CAGTGA 36.8TN-1AC-p3 CAGTGA GU294785.1 CAGTGA EU282379.1 CAGTGA
Hình 3.11. So sánh trình tƣ̣ gen cry1Ac của chủng 3.4TN, 36.8TN và chủng 6.8TN với các trình tự trên ngân hàng gen quốc tế bằng phần mềm BioEdit
CHƢƠNG 4. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ
KẾT LUẬN
1. Từ 28 chủng Bt nhận được , có 14 chủng sinh tinh thể lưỡng tháp chiếm 50%, 7 chủng sinh tinh thể hình cầu (25%), 5 chủng sinh hai tinh thể hình cầu và lưỡng tháp (17,8%), 1 chủng sinh hai tinh thể hình lập phương và
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
hình cầu (3,6%), 1 chủng chứa cả ba dạng tinh thể hình cầu, lập phương và lưỡng tháp (3,6%).
2. Phân loại được 21 (75%) chủng thuộc dưới loài Bacillus thuringiensis
var. kurstaki.
3. Bằng phương pháp PCR đã xác định được 42,85% số chủng mang cả
hai đoạn gen cry1Ab và cry1Ac có kích thước tương ứng là 238bp và 487bp,
thuộc dưới loài Bacillus thuringiensis var. kurstaki.
4. Đã nghiên cứu hoạt tính diệt sâu tơ của 6 chủng mang 2 gen cry1Ab và cry1Ac đối với sâu tơ, trong đó có 4 chủng có hoạt tí nh cao từ 80,1-100%.
5. Đã tách dòng và đọc trình tự được 2 đoạn gen cry1Ab, cry1Ac của 3 chủng: 3.4TN, 36.8TN và 6.8TN mã hóa protein tinh thể Cry 1Ab, Cry1Ac
diệt côn trùng bộ cánh vẩy trong vector pGEM – T Easy và tế bào vi khuẩn E.
coli DH5α.
6. Đã so sánh trình tự nucleotit của đoạn gen cry1Ab của các chủng
3.4TN, 36.8TN và 6.8TN với 2 trình tự có mã số DQ241675.1 và
EU220269.1 trên ngân hàng gen quốc tế với độ tương đồng 99 %.
7. Đã so sánh trình tự nucleotit của đoạn gen cry1Ac của các chủng
3.4TN, 36.8TN và 6.8TN với 2 trình tự có mã số GU294785.1 và
EU282379.1 trên ngân hàng gen quốc tế với độ tương đồng 100 % đối với 2 chủng 3.4TN và 36.8TN, tương đồng 99% đối với chủng 6.8TN
ĐỀ NGHỊ
3 chủng 3.4TN, 36.8TN và 6.8TN là những chủng có hoạt tính diệt sâu cao, đã được tách dòng và đọc trình tự và xác định là đoạn gen cry1Ab và
Cry1Ac mã hóa protein Cry1Ab và Cry1Ac. Trên cơ sở đó, thiết kế mồi khuếch đại đoạn gen cry1Ab, cry1Ac làm nguyên liệu cho việc biểu hiện
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
protein Cry1Ab và Cry1Ac nhằm phục vụ cho các nghiên cứu tiếp theo như:
sản xuất thuốc trừ sâu sinh học Bt diệt côn trùng bộ cánh vảy và chuyển gen
cry1Ab, cry1Ab vào cây trồng giúp cây có khả năng kháng lại côn trùng bộ cánh vảy.
DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH CÓ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN
Trịnh Thu Hà, Nguyễn Đình Tuấn, Vũ Thị Nhung, Trương Phúc Hưng, Ngô
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
phẩm Bacillus thuringiensis subsp. Israllensis tại Việt Nam”. Báo cáo khoa học. Hội Nghị Công nghệ sinh học toàn quốc 2009.
TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt
1. Đái Duy Ban. 2006. Công nghệ gen. Nhà xuất bản khoa học và kỹ thuật.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
2. Ngô Đình Bính, Nguyễn Quang Châu, Nguyễn Ánh Nguyệt. 2002. Thu
nhận huyết thanh miễn dịchcho phân loại Bacillus thuringiensis. Kỷ yếu 2001 -2002, Viện Công nghệ Sinh học, trang 296 – 302.
3. Ngô Đình Bính. 2005. Giáo trình thuốc trừ sâu sinh học.
4. Nguyễn Xuân Cảnh, Nguyễn Ánh Nguyệt, Nguyễn Thanh Hạnh, Nguyễn
Quỳnh Châu, Ngô Đình Bính. 2004. Nghiên cứu sự đa dạng sinh học của
vi khuẩn Bacillus thuringiensis ở Việt Nam. Báo cáo khoa học, nghiên cứu cơ bản trong Khoa học sự sống định hướng Nông lâm nghệp miền núi, Thái Nguyên 2004. NXB KHKT. 59 – 62.
5. Nguyễn Lân Dũng. 1981. Sử dụng vi sinh vật để phòng trừ sâu hại cây trồng. NXB KHKT
6. Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến, Phạm Văn Ty. 2003. Vi sinh vật
học. NXB giáo dục.
7. Hoàng Thị Lợi. 2003. Giáo trình côn trùng học nông nghiệp tập 2. NXB
Nông nghiệp Hà Nội. Trang 122 – 167.
8. Phan Cự Nhân, Nguyễn Minh Công, Đặng Hữu Lanh. Di truyền học, tập
1. NXB Đại học Sư Phạm. Trang 49 – 53.
9. Khuất Hữu thanh. 2003. Cơ sở di truyền phân tử và kỹ thuật gen.
NXBKHKT. Trang137 – 140, 206 – 210.
10. Đặng Trọng Lương, Vũ Đức Quang, Nguyễn Hữu Đống, Trần Duy Quý.
1999. Thiết kế lại cấu trúc gen Bt để chuyển vào cây hai lá mầm. Báo cáo
Hội nghị sinh học toàn quốc. 1371-1376.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
11. Abad AR, Duck NB, Feng X, Flannagan RD, Kahn TW, Sims LE (2002)
Genes encoding novel protein with pesticidal activity against coleopterans.
12.Attathom T, Chanpaisang J, and Hongrattanameteekul W. Bacillus
thuringiensis Isolation, Indentification, and Bioasay. 1994. In Bacillus thuringiensis Biotechology and Environmental Benefits. 70 – 86.
13.Barjac D H and Bonnefoi A, 1962. Essai de classification biochimique et
serologique de 24 souches de Bacillus du type B. Bacillus thuringiensis. Entomophaga, 7, 5 – 31.
14. Barjac D H. 1981. Identification of H- serotypes of Bacillus thuringiensis. 36 – 42 Burges H.D. (edited). In microbial control of pests and plant Diseasis 1970 – 1980.
15. Barjac D H & Frachon E. 1990. Classification of Bacillus thuringiensis strains. Entomophaga 35,233 – 240.
16.Bernard R. Glick, Jack J. Pasternale. Molecular Biotechnology principle ADN applications of recombinant DNA. Department of Biology, University of Waterloo, Ontario, Canada.
17. Cheng X Y, Sardana R, Kaplan H et al. (1998) Agrobacteriumtransformed
rice plants expressing synthetic cryIA(b) and cryIA(c) genes are highly toxic to striped stem borer and yellow stem borer.
18. Dams. A, L.F., T.E Visick, ADN H.R.Whiteley. 1989. A20 –
Kilodaltonprotein is required for efficient production of the Bacillus thuringiensis var. israelensis 27 – Kilodalton crystal protein in E. coli. J. Bacteriol. 171: 521 – 530.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
19. Didier, L.D.. Ameller, ADN M.Marguerite. 1993. Lecadet Diverst ty of Bacillus thuringiensis toxin ADN Genes.
20. Dwu, XL. Cao, Y.Y Bai, ADN AI. Aronson. 1991. Sequensing of an operon containing a novel δ-endotoxin gene from Bacillus thuringiensis. FEMS microbial. Lett. 81 – 31.
21. Ereclus D, Deléclese A and. Lecadet M. Diversity of Bacillus
thuringiensis toxin and genes. In Bacillus thuringiensis an environmental pesticide Theory and Practice. Dited by P. F. Entwistle, J. S. Cory, M. J. Bailey and S. Higgs 1993, 37 – 60.
22. Frankenhuyzen V K. The challenge of Bacillus thuringiensis. In Bacillus
thuringiensis an environmental pesticide: Theory and Practice. Edited by P. F. Entwistle, J. S. Cory, M. J. Bailey and S. Higgs 1993, 1 – 23.
23. http://www.thainguyen.gov.vn 24. http: //www.promege.com/vectors/
25. http://www.en.wikipedia.org/wiki/Lepidoptera # cite_note-cgillott-5
26http://www.promega.com. Pgem-Teasy Vector Systems. Technical Manual
No. 042 . Instruction for use of products A1360, A1380, A3600 and
A3610.
27. Iizuka T, M. Ishino and Nakajima K. 1982. Comparative morphological of parasporal crystal and characterization of plasmid DNA from various subspecies of entomopathogenic bacteria, Bacillus thuringiensis . J. Facul. Agric. Hokkaido Univ. 13: 423 – 431.
28. J. Li, D. J. Derbyshire, B. Promdonkoyt and D. J. Ellart. 2001. Structural implicatios for ransformation of Bacillus thuringiensis - endotoxin from
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
water –soluble to membrane –inserted forms. Biochemical Society: 571- 577.
29. Koo, B. T., S. H. Park, S. K. Choi, B. S. Shin, J. I. Kim, J. H. Yu. (1995), “Cloning of a novel crystal protein gen Cry1 K from Bacillus thuringiensis subsp. Morrisoni”. FEMS Microbiology Letter 134, p.159-164.
30. Kalman, S., K. L Kiehne, K. J. Libs, and T. Yamatomo. (1993), “Cloning
of a Novel cryIC-Type Gene from a Strain of Bacillus thuringiensis subsp– galleriae”. Applied and Environmental Microbiology, p.1131-1137.
31. Lecadet, M. M. at al. (1996), Collection of Bacillus thuringiensis and Bacillus sphaericus. I.E.B.C, catalogue No.1
32. Lee, M. K., Walters, F. S., Hart, H., Palekar, N., Chen. 2003. Vip3A a novel insecticidal protein with broad spectrum lepidoteran activity.
33. Lopez-Meza, J. E. And J. E. Ibarra. (1996), “Characterization of a Novel
Strain of Bacillus thuringiensis”. Applied and Environmental Microbiology, p.1306-1310
34. Navon A. Control of lepidopteran pests with Bacillus thuringiensis. In Bacillus thuringiensis an Environmental pesticide Theory and Practice. Dited by P. F. Entwistle, J. S. Cory, M. J. Bailey and S. Higgs 1993, 125 – 143.
35. Ngo Dinh Binh, Nguyen Quynh Chau, Nguyen Van Thuong, Vi Thi Doan Chinh, Nguyen Hoai Tram, Nguyen Van Tuat, Yeon Ho Je, Jin Hee Chang
and Seok KwonKang. 1999. Isolation, screening and characterization of
Bacillus thuringiensis from Viet Nam. Biotechnology of Bacillus thuringiensis. Eds. YuZiniu, Sun Ming and Liu Ziduo, Science Press, Beijing, New York. V.3,46
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
36. Ngo Dinh Binh, Shinichiro Asano, Hisanori Bando and Toshihiko Iizuka. 2002. Identification of cry1 genes of Bacillus thuringiensis isolated from
Viet Nam. Biotechnology of Bacillus thuringiensis and Its Environmental
Impact, Proceeding of the 4th Pacijic Rim Conference.142 – 146 .
37. Powell K, Carol A. Charlton and Takashi Yamamoto. 1995. Recent
advances in structure and Function research on Bacillus thuringiensis crystal protein.
38. Sambrook J., Russell D.W. (2001), “Molecullar cloning”, A laboratory manual, 3rd ed, Cold spring Harbor laboratory press, Cold spring harbor, NY.
39. Schrepf H.E ADN White H.R. 1981. Cloning ADN expression of the
Bacillus thuringiensis crystal protein in E.coliproc Nat. Acad.Sci.USA, 78 : 2893 – 2897
40. Schrepf H.E ADN Whitel H.R. 1981. Cloning ADN expression of the
Bacillus thuringiensis crystal protein in E.coliproc Nat. Acad.Sci.USA, 78: 2893 – 2897.
41. Shin – ichiro. Asano, Chikage Yamashita, Toshihiko Inzuka, Katsuyoshi
Takeuchi, Satoshi Yamanaka, David Cerf ADN Takashi Yamamoto; 2003.
A strain of Bacillus thuringiensis subsp. Galleriae containing a novel cry8 gene highly toxin to Anomala cuprea (Coleoptera : Scarabaeidae). Biological control 28.(2003).
42. Thiery ADN E. Frachon. 1997. Indentification. Isolation culture ADN
preservation entomopathogenic bacteria. Biologycal techniques Manual of Technology in Ínsect Phathology, A. academic press 55 – 57.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
43. Wei J Z, Hale K, Carta L et al. (2003) Bacillus thuringiensis crystal