- Chỉ tiêu theo dõi:
KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THAỎ LUẬN
3.3. Kết quả ựánh giá sự ổn ựịnh ựộ bội của thể tái sinh
để ựánh giá ựộ bội của các cây tái sinh từ 3 loại mô lá mầm, thân mầm và lá trưởng thành, chúng tôi xác ựịnh các chỉ số hình thái có liên quan đến mức bội thể gồm: Chỉ số lá Il (leaf index, tỷ lệ chiều dài/chiều rộng của lá đã định hình).
quan sát hình thái lá là phương pháp ựơn giản và nhanh chóng xác ựịnh cây tứ bội và cây nhị bội tại hiện trường. đánh giá hình thái lá bằng chỉ số lá (Il = chiều dài/chiều rộng) cho thấy phần lớn những cây có chỉ số lá lớn hơn 2,6 là những cây nhị bội, cây có Il<2,0 thường là cây tứ bộị
Bảng 3.6: đánh giá đặc điểm hình thái và mức bội thể của cây tái sinh trước khi ra vườn ươm Công thức Số cây theo dõi Chiều dài lá (cm) Bề rộng lá (cm) Chỉ số lá Hình thái Cây 1 1,95 0,75 2,60 Cây 2 2,30 0,85 2,70 Lá mầm Cây 3 2,20 0,80 2,75
Thân mập, lá to, dài, màu xanh đậm, lơng tơ ngắn
Cây 1 1,86 0,71 2,62 Cây 2 1,70 0.66 2,57
Thân mầm
Cây 3 1,55 0,62 2,50
Thân nhỏ hơn, cây thấp, thùy lá co lại,xuất hiện ựốm vàng sáng trên lá Cây 1 1,70 0,65 2,61 Cây 2 1,79 0,76 2,35 Lá trưởng thành Cây 3 1,96 0,77 2,54 Cây thấp lùn, thùy lá co lại, xuất hiện ựốm vàng sáng trên lá
Kết quả ở Bảng 3.6 cho thấy: Trên ựối tượng lá mầm, cây tái sinh có kắch thước chiều dài lá, bề rộng lá có độ chênh lệch nhỏ và chỉ số lá dao ựộng trong khoảng 2,6 đến 2,75. Có thể kết luận cây tái sinh từ lá mầm có độ bội ổn định và đó là những cây nhị bội 2n, mặt khác chúng mang các ựặc ựiểm của cây nhị bội như: Thân mập, lá to, dài, màu xanh đậm, lơng tơ ngắn.
Trên ựối tượng thân mầm và lá trưởng thành, kắch thước chiều dài lá và bề rộng lá giữa các cây khơng đồng đểu, có sự chênh lệch lớn hơn so với các cây tái sinh từ lá mầm. Mặt khác chúng mang các ựặc ựiểm hình thái khác với cây tái sinh từ lá mầm như:Cây thấp lùn, thùy lá co lại, xuất hiện ựốm vàng sáng trên lá. Từ chỉ số lá và hình thái cây có thể kết luận cây tái sinh từ thâm mầm và lá trưởng thành ở dạng thể khảm, độ bội khơng ổn ựịnh.
Tóm tắt quy trình tái sinh cà chua từ lá mầm phục vụ chuyển gen
Hạt cà chua
Khử trùng
(H2O2 20% trong 6 phút, rửa lại với nước cất vô trùng)
Reo trong môi trường thạch MSB5
(Ni trong 16h tối, khi có thân mầm thì đưa ra điều kiện phịng ni 16h sáng/8h tối )
Cắt lá mầm
(Cắt bỏ 2 ựầu lá, cắt từng ựoạn dài 0,5cm)
Môi trường tạo callus
(Môi trường cơ bản + đTST (Zeatin: IAA= 8: 5 ni trong 5 ngày sau đó chuyển sang mơi trường có Zeatin: IAA= 8: 8)
Mơi trường tái sinh chồi
(Môi trường cơ bản + đTST Zeatin: IAA= 8: 5)
Môi trường tạo rễ
(Mơi trường cơ bản + 0,2 ộM IAA)