a. Nguyên tắc
Nguyên tắc của phương pháp này dựa vào khả năng khử dung dịch iod của vitamin C. Dựa vào lượng Iod bị khử, ta có thể tính được hàm lượng vitamin C trong mẫu.
b. Hóa chất
Hóa chất được sử dụng là những hóa chất đạt tiêu chuẩn phân tích bao gồm vitamin C, Iod, acid acetic (Trung Quốc), acid metaphosphoric (Trung Quốc), nước cất.
Chuẩn bị dung dịch chuẩn gốc. Cân 0.1 g vitamin C trong cốc 100 (khô), hòa tan bằng 20 ml dung dịch đệm HPO 2% và acid acetic 8%. Sau đó chuyển sang bình định
mức 100 ml và lên thể tích đến vạch. Chia đều 100 ml dung dịch vitamin C 1 mg/l vào 5 ống nghiệm falcon 15 ml (mỗi ống 10 ml). Bảo quản trong tủ - 20OC.
Chuẩn bị 5 điểm chuẩn độ có nồng độ khác nhau theo bảng sau:
Bảng 3.1
TT Hàm lượng (mg) VHPO3 VVitamin C (ml) Tổng thể tích
1 0 0 0 20 2 0.5 19.5 0.5 20 3 1 19 1 20 4 1.5 18.5 1.5 20 5 2 18 2 20 c. Thiết bị và dụng cụ
Dụng cụ gồm có bình tam giác 250 ml, chày, cối sứ, ống falcon 15ml và 50 ml (Mexico), pipet thủy tinh, bình tia. Thiết bị được sử dụng gồm cân phân tích 2 số (Precical, Thụy Sỹ), máy li tâm thường (Hermle Z400, Đức).
d. Chiết mẫu
Cân khoảng 5 g mẫu, cho vào cối sứ nghiền đến khi đồng nhất, sau đó chuyển qua ống falcon 50 ml, tráng cối bằng dung dịch đệm HPO3, lên thể tích 50ml. Đem mẫu ly tâm trong 15 phút với vận tốc quay 6000 vòng/ phút. Mỗi độ chín lặp lại 3 lần.
e. Tiến hành
Hút 20 ml dịch chiết cho vào bình tam giác. Thêm vào bình 10 ml nước cất, 0.5 ml dung dịch tinh bột 0.5%. Sau đó chuẩn độ bằng dung dịch I2 0.01N đến khi xuất hiện màu xanh. Mỗi lần thí nghiệm cần làm với bình đối chứng và có chất chuẩn đi kèm.