CHƯƠNG 1 : LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU
1.7 Kỹ thuật điện di protein SDS-PAGE (Sodium Dodecyl Sulfate) và ứng dụng
1.7.1 Kỹ thuật điện di protein SDS-PAGE
electrophoresis)
Phương pháp điện di protein SDS-PAGE là phương pháp dùng để xác định trọng lượng
phân tử các loại protein thông qua phổ điện di (Garfin, 1995) bao gồm các bước chính: ly trích protein, tinh sạch protein và điện di. Phương pháp đã được Laemmli (1970) phát triển bằng cách thêm 0,1% SDS (chất tẩy mang điện tích âm) vào hệ PAGE của Ornstein-Davis (1964) khi phân tách 28 thành phần của T4-phage. SDS (Sodium Dodecyl Sulphate) là chất tẩy mang điện tích âm bám rất mạnh vào protein làm protein
đang bị gấp biến dạng thành hình que và được bao bọc bởi SDS cộng với tác nhân khử
cầu nối disulfite của 2-mercaptoethanol hoặc dithiotheitol làm cho protein từ cấu trúc bậc 2, 3, 4 chuyển thành chuỗi polypeptide bậc một và đều mang điện tích âm chỉ khác
biệt nhau về kích thước, thơng qua phương pháp điện di SDS-PAGE sẽ phân tách được các loại protein theo trọng lượng phân tử dưới tác dụng của điện trường. Phương pháp điện di protein SDS-PAGE có rất nhiều ứng dụng trong nghiên cứu, đánh giá và chọn tạo
giống cây trồng
Dấu di truyền trong công tác chọn tạo giống: Giống như DNA, protein dự trữ trong hạt cũng được xem là dấu phân tử vì chúng có độ đa hình cao thơng qua
phân tích trọng lượng phân tử và đánh giá tính đa hình và phổ biến (Phạm Văn
Phượng, 2005), sự đa hình xuất hiện ngay cả bên trong và giữa các quần thể chẳng hạn như tập đoàn giống lúa cổ truyền ven biển ở Đồng Bằng Sông Cửu
Long có độ đa dạng di truyền tương đối cao (Nguyễn Thanh Tường, 2003). Bên
cạnh đó, phương pháp điện di cũng là một công cụ mạnh để xác định tổ tiên hoang dại và sự tiến hóa của các lồi cây trồng (Võ Công Thành, 2003).
Xác định độ thuần của giống: Phương pháp điện di cho kết quả chính xác hơn so
tính ổn định) do DUS thường dựa trên những đánh giá về mặt hình thái dễ bị ảnh
hưởng bởi môi trường (Goodrich và ctv., 1985). Ưu điểm của phương pháp này là xác định nhanh, tương đối rẻ tiền so với kỹ thuật DNA, không cần phải trồng cây
chờ đến khi thu hoạch và không bị ảnh hưởng bởi môi trường, tuy nhiên vẫn có một bất lợi là phương pháp này bị ảnh hưởng bởi tính chun biệt của mơ và giai
đoạn phát triển (Phạm Văn Phượng, 2005).