CHƯƠNG 2 : PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP
2.3 Phương pháp
2.3.3 Phương pháp đánh giá phẩm chất hạt gạo
Phân tích hàm lượng amylose hạt lúa theo phương pháp của Cagampang và Rodriquez. (1980)
Qui trình phân tích hàm lượng amylose gồm 4 bước sau
Bước 1: Pha bị dung dịch bao gồm Ethanol 95%, HCl 30%, NaOH 1N, Iod (Iod 0,2% +
KI 2%)
Bước 2: Ly trích mẫu
Cân 50 mg nội nhũ đã nghiền mịn cho vào ống 50 ml, thêm 0,5 ml Ethanol 95%, lắc nhẹ
cho đều, thêm 9,5 ml NaOH 1N. Lắc đều và để qua đêm. Bước 3: Pha loãng và đo mẫu
Hút 100 µl dịch trích cho vào bình định mức 25 ml (đối với mẫu thử - mẫu blank, thay dịch trích bằng 100 µl NaOH 1N).
Thêm nước cất đến ½ bình và lắc đều.
Thêm 250 µl HCl 30%, lắc đều.
Thêm 250 µl dung dịch Iod, lắc đều.
Thêm nước cất đến vạch định mức, chuyển sang ống 50 ml và để yên trong 30 phút,
lắc đều trước khi cho vào cuvette, đo độ hấp thụ ở bước sóng 575 nm.
Bước 4: Dựng đường chuẩn và tính kết quả
Đường chuẩn có dạng
Y = aX + b
Trong đó: Y: Độ hấp thụ OD
Tính hàm lượng amylose theo công thức
% amylose = 100 2 x
x
Tùy theo hàm lượng amylose các giống có thể phân nhóm thành
Bảng 2.2 Phân nhóm lúa theo hàm lượng amylose (IRRI, 1988)
STT Phân nhóm Amylose (%) Cấp độ
1 Nếp 0-2 Rất thấp
2 Dẻo 8-20 Thấp
3 Mềm cơm 21-25 Trung bình
4 Cứng cơm >25 Cao
Phân tích hàm lượng protein theo phương pháp Lowry và ctv. (1951)
Qui trình phân tích hàm lượng Protein gồm có 4 bước
Bước 1: Chuẩn bị dung dịch trích
Dung dịch NaOH 0,1N
Dung dịch A (Na2CO3 2% + Na-K-tatrate 0,005% + NaOH 0,1N)
Dung dịch B (CuSO4 0,1%)
Dung dịch C (45 ml dung dịch A + 5 ml dung dịch B)
Dung dịch Folin 1N.
Bước 2: Ly trích mẫu
Cân 10 mg bột gạo đã nghiền mịn cho vào ống 1,5 ml, thêm vào 1 ml NaOH 0,1N. Lắc ít nhất 2 giờ hoặc để qua đêm.
Bước 3: Pha loãng mẫu và đo
Hút 100 µl dịch trích cho vào ống 10 ml (đối với mẫu thử - mẫu blank, thay dịch trích bằng 100 µl NaOH 0,1N) + 1 ml nước cất + 500 µl dung dịch C (chỉ pha trước khi sử dụng 30 phút), lắc đều và để yên trong 10 phút.
Thêm 50 µl Folin 1N, lắc đều và để yên trong 30 phút, cho vào cuvette và đo ở bước sóng 600 nm.
Bước 4: Dựng đường chuẩn
Pha dung dịch gốc Bovine Serum Albumin (BSA).
Đường chuẩn có dạng
Y = aX + b
Trong đó: Y: Độ hấp thụ OD
X: Nồng độ protein máy đo được (mg/ml)
Hàm lượng protein được tính theo công thức
% Protein = x 100 m 10 x X với m = 14 100 H%) - (100 x 10
Trong đó: m là trọng lượng thực của mẫu, H% là độ ẩm của hạt
Phương pháp phân tích độ trở hồ theo Jenning và ctv. (1979)
Cách phân tích như sau
Chuẩn bị hai mẫu cho mỗi giống/dòng được thử. Mỗi mẫu lấy sáu hạt gạo, cạo sạch lớp cám, chọn hạt không bị nứt, xếp các hạt vào dĩa petri.
Thêm 10 ml KOH 1,7% vào mỗi dĩa.
Đậy dĩa petri, để yên khoảng 23 giờ ở nhiệt độ phòng.
Bảng 2.3 Phân cấp độ trở hồ của hạt gạo theo Jenning và ctv. (1979)
Cấp Đặc điểm Mức độ
1 Hạt gạo còn nguyên Cao
2 Hạt gạo phồng lên Cao
3 Phồng lên, viền cịn ngun, nở ít Cao 4 Phồng lên, viền còn nguyên, nở rộng Trung bình 5 Hạt rã ra, viền hồn tồn nở rộng Trung bình
6 Hạt tan ra hoàn toàn với viền Thấp
7 Hạt tan ra hoàn toàn và trong Thấp
Cấp trung bình sẽ được tính theo cơng thức sau Ʃxi x n Cấp trở hồ = N Trong đó: xi: cấp độ trở hồ n: số hạt có cấp độ trở hồ xi N: số hạt thử nghiệm
Bảng 2.4 Đánh giá độ trở hồ theo IRRI (1988)
Loại Nhiệt độ Giá trị tan rã trong môi trường kiềm (cấp)
Thấp 55-69 6-7
Trung bình 70-74 4-5
Cao 75-79 2-3
Phương xác định độ bền thể gel theo phương pháp của Tang và ctv. (1991).
Bước 1: Chuẩn bị mẫu
Tách vỏ trấu và đo ẩm độ hạt gạo.
Nghiền mịn và cân mẫu (100 mg với ẩm độ 12%).
Bước 2: Hoàn tan mẫu
Thêm 2 ml KOH 0,2 N. Sau đó khuấy đều bằng máy Vortex.
Đậy nắp kỹ và đun trong nồi cách thủy 100oC trong 5 phút.
Lấy ra, để yên trong 5 phút, sau đó làm lạnh trong nồi nước đá 10 phút.
Bước 3: Đọc và ghi kết quả
Để ống nghiệm nằm ngang trên bề mặt bằng phẳng, để gel chảy từ từ, sau một giờ tiến hành đo chiều dài thể gel (từ đáy đến mí trên của thể gel).
Bảng 2.5 Phân cấp độ bền thể gel theo thang đánh giá của IRRI (1988)
Cấp Chiều dài thể gel (mm) Loại độ bền thể gel
1 80 – 100 Rất mềm
3 61 – 80 Mềm
5 41 – 60 Trung bình
7 35 – 40 Cứng
9 < 35 Rất cứng
Chiều dài và tỷ lệ dài/rộng của hạt gạo
Đo chiều dài và chiều rộng của 10 hạt gạo của mỗi giống/dòng bằng cách xếp nối nhau
trên giấy kẻ li, lấy giá trị trung bình. Đánh giá theo thang điểm của IRRI (1988).
Bảng 2.6 Phân loại hạt gạo theo chiều dài và tỷ lệ dài/rộng (IRRI, 1988)
Cấp Chiều dài hạt (mm) Kích thước Tỷ lệ dài/rộng Dạng hạt
1 > 7,5 Rất dài > 3,0 Thon dài
3 6,61 - 7,5 Dài 2,1 - 3,0 Trung bình
5 5,51 - 6,6 Trung bình 1,1 - 2,0 Hơi tròn