Đặc điểm hình thái nấm Colletotrichum musae

M cl c

3.2 KẾT QUẢ GIÁM ĐỊNH

3.2.1.3 Đặc điểm hình thái nấm Colletotrichum musae

Bào tử nấm hình thành trên môi trường PD hay mô bệnh và được chia thành hai dạng gồm hình trụ hai đầu trịn hoặc hình trụ một đầu cùn và một đầu nhọn. Bào tử hình thành trực tiếp từ sợi nấm hay những chấm li ti màu cam. Dạng bào tử hình trụ, nhọn một đầu thường được tìm thấy nhiều trên mơi trường PD cũng như khi nuôi cấy trên lame. Kích thước bào tử hình trụ hai đầu trịn và một đầu nhọn lần lượt là 13,75-20 x 5-7,5 µm (Hình 3.3E) và 10-20 x 3,75-5 µm (Hình 3.3F). Nấm có khả năng hình thành bào tử trên môi trường PD ở thời điểm 3 NSKC, nhận biết qua quan sát thấy những chấm li ti màu cam được hình thành trên mơi trường.

Nấm hình thành đĩa áp khi được ni cấy trên lame sau 2 ngày, hình dạng đĩa áp rất thay đổi và có 3 dạng chính. Đĩa áp có dạng hình trứng, hình thuyền hoặc bất dạng. Trong 3 dạng này thì dạng hình trứng và xẻ thùy bất dạng được tìm thấy phổ biến hơn dạng cịn lại. Đĩa áp được thành lập trực tiếp từ bào tử hoặc từ sợi nấm, có màu nâu hoặc đen. Kích thước đĩa áp trong khoảng 8,75-17,5 x 3,75-7,5 µm (Hình 3.3G & H). Trong q trình ni cấy và quan sát đặc điểm của nấm Colletotrichum

musae trên môi trường PD khơng nhận thấy sự hình thành của gai cứng giống như

ghi nhận của Lim và ctv. (2002) và Abd-Elsalam và ctv. (2010).

Dựa theo những đặc điểm về sự phát triển của sợi nấm khí sinh màu trắng chuyển sang cam, sự hình thành những cấu trúc như đĩa đài và khơng nhận thấy sự hình thành gai cứng trên môi trường PD phù hợp với những đặc điểm mô tả của Lim và ctv. (2005), Photia và ctv. (2005), db-Elsalam và ctv. (2010) và Prema (2011) về loài nấm Colletotrichum musae. Đối với đặc điểm hình thái hay kích

thước bào tử và hình dạng, kích thước của đĩa áp trùng khớp với kết quả nghiên cứu của Lim và ctv. (2002) và bd- lsalam và ctv. (2010). Qua những đặc điểm trên so sánh với tài liệu đã cơng bố có thể kết luận nấm gây bệnh thán thư và thối cùi trên chuối thuộc loài nấm Colletotrichum musae.

27

Hình 3.3: Đặc điểm tản nấm, bào tử và đĩa áp của nấm Colletotrichum sp.

A Đặ đ ể ả ấ Colletotrichum musae dạ ấ PDA C D ả ấ C. musae dạ a p ể PDA

E G o ử đĩa p ủa ả ấ C. musae dạ ấ ở ậ kí E40 F H o ử đĩa p ả ấ C. musae dạ a ở ậ kí E40

G F E A B C D H

28

3.2.2 Bệnh thối cùi do nấm Fusarium sp.

3.2.2.1 Triệu chứng bệnh

 Ngoài tự nhiên: mơ cùi chuối có màu đen, da cùi nhăn nheo và có những sợi nấm trắng như bơng phát triển trên bề mặt mơ cùi chuối (Hình 3.4A).

 Lây bệnh nhân tạo: triệu chứng bệnh xuất hiện ở thời điểm 3 NSLB, trên bề mặt mô cùi xuất hiện một vài sợi nấm màu trắng và mô cùi chuyển sang màu nâu. Đến thời điểm 7 NSLB, tồn bộ mơ cùi chuyển sang màu đen, mềm có nhiều sợi nấm màu trắng phát triển dày đặc như bông và bện chặt vào nhau. Kết quả này có một số đặc điểm khác với triệu chứng ngồi tự nhiên đó là mơ bệnh nhăn nheo, nguyên nhân khi chủng bệnh có tạo ẩm độ cho nấm phát triển (Hình 3.4B).

Dựa vào triệu chứng bệnh so sánh với tài liệu về triệu chứng thối cùi trên chuối sau thu hoạch giống với nghiên cứu của Snowdon (1991) và Ploetz (2003).

3.2.2.2 Đặc điểm tản nấm trên môi trường PDA

Tản nấm phát triển nhanh, dày đặc trên môi trường PD ở điều kiện nhiệt độ phòng. Thời điểm 3 NSKC, sợi nấm màu trắng mọc bông nhô cao khỏi bề mặt môi trường; mặt dưới đĩa Petri, tản nấm có màu hồng cam nhạt dần và rìa phát triển khơng đều. Sau đó, mặt trên tản nấm phát triển chia thành hai phần: phần thứ nhất là một khối nhô cao hơn phần xung quanh nhưng ở giữa lõm xuống hệ sợi nấm mọc thưa hơn và có màu vàng nhạt; phần thứ hai của tản nấm mọc thấp hơn phần thứ nhất, hệ sợi nấm phát triển bện lại với nhau và có màu trắng ngà. Mặt dưới tản nấm, ở giữa có màu hồng cam, xung quanh màu vàng nhạt dần và rìa phát triển khơng đều (Hình 3.4C & D).

3.2.2.3 Đặc điểm hình thái nấm Fusarium sp.

Sợi nấm khơng màu, có vách ngăn, cành bào đài phân nhánh và bào tử đính từng cái riêng lẻ trên cành bào đài (Hình 3.4E). Nấm Fusarium sp. hình thành ba loại bào tử trên mơi trường PD gồm có đại bào tử, tiểu bào tử và bào tử áo. Đại bào tử chiếm đa số, dạng hình liềm hai đầu nhọn hoặc một đầu cong, khơng màu, có từ 2-5 vách ngăn trong đó bào tử 3 vách ngăn là chủ yếu, có kích thước 12,5-25 x 2,5-5,25 µm (Hình 3.4F) và đại bào tử nảy mầm khi ni cấy trên lame (Hình 3.4G). Tiểu bào tử dạng hình trụ, khơng màu và có kích thước 5-9,5 x 1,25-3,75 µm. Ngồi ra, nấm cịn hình thành bào tử áo có vách dày khi mơi trường PD nghèo dinh dưỡng, dạng chuỗi và có hình cầu (Hình 3.4H).

29

F

Hình 3.4: Triệu chứng bệnh và đặc điểm nấm Fusarium sp.

(A) & ( o ự k lây â ạo ở ờ đ ể 7 NSL (C) & (D Sự p ể ủa ả ấ Fusarium sp. ô ờ PDA

(E) & (F) C o đ a o ử đạ o ử đ ợ q a s d ớ kí ể E40 G Đạ o ử ảy ầ k ô ấy la e ở ậ kí E40

(H o ử o ấ Fusarium sp. đ ợ ì ừ sợ ấ q a s ở ậ kí (E40) E C A B F G D H

30

Những đặc điểm về sự phát triển tản nấm, hình dạng và kích thước tiểu bào tử, đại bào tử và bào tử áo phù hợp với các tài liệu nghiên cứu của Barrnet và Hunter (1998), Nguyễn Văn Bá và ctv. (2005), Burgess và ctv. (2009) và Pitt và Hocking (2009) thì đây chính là nấm Fusarium sp.

3.2.3 Bệnh thối trái do nấm Botryodiplodia theobromae (Lasiodiplodia

theobromae)

3.2.3.1 Triệu chứng bệnh

 Ngoài tự nhiên:

Trên trái: triệu chứng bệnh xuất hiện chủ yếu ở phần chóp trái. Ban đầu phần vỏ chóp trái có màu nâu nhạt chuyển dần sang màu nâu sậm hơn và khi đó hình thành những ổ nấm màu đen nhơ lên bề mặt vỏ trái. Sau đó, hình thành sợi nấm màu xám trắng phát triển xung quanh bộ chóp trái và chuyển sang màu xanh đen (Hình 3.5A, B, C & D).

Trên cùi chuối: phần mơ có màu đen, da nhăn nheo, có sự hình thành những ổ nấm màu đen nhô lên trên phần mô và chuỗi xoắn bào tử từ màu trắng chuyển sang xanh đen (Hình 3.5E).

 Triệu chứng sau khi lây bệnh nhân tạo

Trên trái: ban đầu mô chuyển sang màu nâu và xuất hiện những sợi nấm màu trắng xám ở thời điểm 3 NSLB (Hình 3.6 & B). Sau đó, những sợi nấm màu xám trắng chuyển sang màu xanh xám ở 5 NSLB và ổ nấm được hình thành bên dưới những cụm sợi nấm màu xám xanh ở thời điểm 7 NSLB (Hình 3.6C & D).

Trên cùi chuối: sau khi tiến hành lây bệnh nhân tạo trên cùi triệu chứng thể hiện rõ nhất ở thời điểm 7 NSLB. Triệu chứng thối cùi do nấm Botryodiplodia theobromae bắt đầu xuất hiện ở thời điểm 3 NSLB, ban đầu cùi chuối chuyển sang

màu nâu và hình thành những sợi nấm màu xám trắng bao phủ trên bề mặt cùi chuối. Khi những sợi nấm này chuyển sang màu xanh đen, nhiều ổ nấm màu đen được hình thành và mơ cùi trở nên đen hồn tồn ở thời điểm 7 NSLB (Hình 3.7A & B).

Dựa vào đặc điểm triệu chứng nấm gây hại phù hợp với triệu chứng bệnh ngồi tự nhiên nhưng chỉ có điểm khác đó là ổ nấm hình thành sau sự phát triển của sợi nấm. Kết quả này tương tự với báo cáo của Smoot (1971), Weber (1973), Snowdon (1991), Barkai-golan (2001) và Ploetz (2003) về triệu chứng thối trái và thối cùi trên chuối sau thu hoạch đã được cơng bố trên thế giới.

31

Hình 3.5: Sự phát triển triệu chứng thối trái và thối cùi do nấm Botryodiplodia

theobromae do nhiễm tự nhiên

(A) do ấ B. theobromae

Hì dạ ơ ó â ề ổ ấ đe đ ợ ì C Sự p ể ủa ổ ấ B. theobromae ô q a s d ớ kí so ổ D Mô yể sa đe ì ữ sợ ấ ắ sa a E do Botryodiplodia theobromae B A E C D

32

Hình 3.6: Triệu chứng thối trái nấm Botryodiplodia theobromae sau khi lây bệnh nhân tạo

A do ấ Botryodiplodia theobromae ở ờ đ ể 3 NSL (C) & (D) B. theobromae ở ờ đ ể 7 NSLB D C B A

33

3.2.3.2 Đặc điểm tản nấm trên môi trường PDA

Tản nấm phát triển rất nhanh trên môi trường PD khi ở nhiệt độ phòng. Ở thời điểm 2 ngày sau khi cấy (NSKC), hệ sợi nấm đã phát triển đầy bề mặt môi trường đĩa Petri và bắt đầu chuyển dần từ màu trắng sang trắng xám. Đến thời điểm 3NSKC, mặt trên tản nấm có nhiều hệ sợi nấm khí sinh phát triển trên mặt mơi trường PD , phần giữa có màu trắng xám và xung quanh gần rìa màu xám xanh; mặt dưới có màu xanh đen rõ rệt ở giữa và nhạt dần ra rìa tản nấm (Hình 3.8A & B).

Hình 3.7: Triệu chứng thối cùi do nấm Botryodiplodia theobromae

A do ấ Botryodiplodia theobromae ở ờ đ ể 7 NSLB (C) Sự p ể ủa ổ ấ Botryodiplodia theobromae ô d ớ kí so ổ

A

34

Ở thời điểm 5 NSKC, tản nấm có sự chuyển đổi màu sắc rõ rệt hơn trong quá trình phát triển, có màu xanh đậm (Hình 3.8C & D) và chuyển sang xanh đen ở thời điểm 7 NSKC; mặt dưới của tản nấm chuyển màu nhanh hơn và có màu đen. Những quả thể của nấm được hình thành nhiều ở thời 7 NSKC (Hình 3.8E & F), trong điều kiện chiếu sáng liên tục dưới ánh đèn huỳnh quang hoặc trong tủ úm có đèn chiếu sáng cận cực tím. Nấm sẽ hình thành rất ít hoặc khơng hình thành các quả thể trong điều kiện tối hồn tồn, kết quả cho thấy sự hình thành những quả thể phụ thuộc vào ánh sáng và kết quả này cũng tương tự với những nghiên đã được báo cáo trước đó của lam và ctv. (2001). Quan sát tản nấm phát triển trên môi trường PD nhận thấy bào tử được hình thành nhiều trong quả thể khi xuất hiện những giọt nước trong suốt hoặc khi xuất hiện những chuối xoắn bào tử (spore tendrils) trên những quả thể được hình thành trên mơi trường PD hay mơ trái. Những chuối xoắn bào tử này ban đầu có màu trắng chuyển dần sang màu xanh đen, cuối cùng đen hồn tồn (Hình 3.9A & B ).

3.2.3.3 Đặc điểm hình thái nấm Botryodiplodia theobromae

Ổ nấm hình thành trên mơi trường ni cấy hay mơ bệnh, có dạng hình cầu, màu nâu sậm đến đen và kích thước của ổ từ 157,5-250 µm (Hình 3.9C & D). Bào tử nấm đính từng cái riêng lẻ trên cành bào đài hình trụ không màu bên trong ổ nấm. Giai đoạn đầu bào tử đơn bào, khơng màu, dạng hình trứng, có kích thước 20- 28,75 x 11,3-18,75 µm. Bào tử non có hai đầu bầu hoặc một đầu hơi nhọn, vách tế bào mỏng và bên trong có chứa những tế bào chất (Hình 3.9E). Sau đó bào tử bắt đầu hình thành vách tế bào dày hơn rồi chuyển dần sang màu nâu nhạt rồi đến màu nâu sậm, một vách ngăn ở giữa tế bào được hình thành và tạo thành bào tử có 2 tế bào (Hình 3.9F). Cuối cùng bào tử sẽ có màu nâu đậm hơn, hình thành những đường kẻ dọc theo chiều dài bào tử nhưng có màu nhạt hơn vách ngăn ngang và có kích thước 26,25-35 x 13,75-18,75 µm (Hình 3.9G). Bào tử có khả năng nảy mầm khi ẩm độ cao hoặc xâm nhiễm vào mơ ký chủ. Ống mầm được hình thành chủ yếu ở cuối tử hay ở giữa của bào tử (Hình 3.9H).

Dựa vào đặc điểm hình thái nấm và so sánh với tài liệu của Barnett và Hunter (1998) cho thấy nấm thuộc chi Botryodiplodia. Trong đó, sự thay đổi màu sắc của tản nấm trên môi trường PD từ trắng sang xanh đen, sự hình thành và hình dạng ổ nấm hoặc sự biến đổi về màu sắc, hình dạng và kích thước bào tử bào tử phù hợp với kết quả nghiên cứu về loài nấm Botryodiplodia theobromae của Alasoadura (1970), Weber (1973), Holliday (1980), lam và ctv. (2001); Woodward và ctv. (2005); lves và ctv. (2008) và Latha và ctv. (2009). Qua đó, có thể kết luận rằng

35

loài nấm gây thối trái và thối cùi được mô tả ở trên là nấm Botryodiplodia theobromae. F D C B A E

Hình 3.8: Đặc điểm tản nấm Botryodiplodia theobromae trên môi trường PD

A Đặ đ ể ả ấ Botryodiplodia theobromae ở ờ đ ể 3 NSKC C D Đặ đ ể ả ấ Botryodiplodia theobromae ở ờ đ ể 5 NSKC (E) & (F) Sự ì ổ ấ Botryodiplodia theobromae ở ờ đ ể 7 NSKC PDA

36

Hình 3.9: Đặc điểm hình thái nấm Botryodiplodia theobromae

(A) & (B) C ỗ oắ o ử spo e e d ls p ể ừ ổ ấ ô ô ờ PDA (C) Ổ ấ đ ợ p ẩ , 2 ổ ấ ó ộ ở ậ kí E10) (D) C đí o ử o ổ ấ đ ợ p ẩ ở ậ kí E40 (E) o ử ò o , k ô , k ô ă ở ậ kí E40 (F) o ử ở ắ đầ ì ă ó â ạ E40 (G) o ử ở , â sậ , ó ă a ì ữ đ ờ kẻ dọ eo ề d ở ậ kí E40 H o ử ảy ầ q a s ở ậ kí E40 C F G H A B D E

37

3.2.4 Đốm sẹo đen do nấm Phyllosticta musarum

3.2.4.1 Triệu chứng bệnh

Trên bề mặt vỏ trái xuất hiện nhiều đốm màu đen, sờ vào cảm thấy nhám và có đường kính khoảng 1mm. Ban đầu là những quầng màu xanh tái, sau đó chuyển sang màu nâu nhạt hay đen khi hình thành ổ nấm. Ổ nấm phát triển nhơ cao hoặc một phần nằm trong mơ bệnh, có màu nâu hay đen mọc đơn lẻ hay thành cụm từ 5- 11 ổ khi quan sát dưới kính sơi nổi. Bệnh xuất hiện chủ yếu ở mặt ngoài của trái, phần gần phát hoa và cuống trái (Hình 3.10A).

3.2.4.2 Đặc điểm nấm

Ổ nấm có dạng hình cầu, màu nâu đen và vách dầy (Hình 3.10B). Ổ nấm có kích thước 60-95 x 57,5-87,5 µm và đường kính của miệng ổ nấm 12,5-17,5 µm (Hình 3.10C & D). Bào tử nấm có dạng hình trứng hay hình bầu dục, khơng màu và có kích thước 11,25-16,25 x 10-13,75 µm. Bào tử nấm có một lớp màng mỏng bọc bên ngồi trong suốt và có phụ bộ đi dài tại một đầu của bào tử (Hình 3.10E).

Các đặc điểm nêu trên phù hợp với những nghiên cứu về bệnh đốm sẹo đen trên chuối của Snowdon (1991), bayasekera và ctv. (1993) và Biosecurity Australia (2002-2007). Ngồi ra, khi so sánh về đặc điểm hình thái của nấm gây hại như hình dạng, kích thước của ổ nấm và hình dạng bảo tử, có lớp màng nhầy xung quanh và có một phụ bộ đi bào tử nấm gây hại phù hợp với mô tả của Biosecurity Australia (2002-2007) về nấm Phyllosticta musarum gây bệnh sẹo đen trên chuối.

38

Hình 3.10: Triệu chứng bệnh sẹo đen và đặc điểm của nấm Phyllosticta musarum

(A) đ sẹo đe (C) Ổ ấ đ ợ q a s d ớ kí sơ ổ

(D) & (E Ổ ấ P. musarum p ể ụ ay đơ lẻ ô C o ử ấ P. musarum q a s d ớ kí ể 40X C B A D E B B

39

3.2.5 Bệnh thối cùi do nấm Apergillus niger

3.2.5.1 Triệu chứng bệnh

Nấm Aspergillus niger được phân lập từ cùi chuối thu thập ở ngồi tự nhiên, sau đó được lây nhiễm nhân tạo lại lên bộ phận cùi và cả bộ phận trái chuối khỏe. Kết quả ghi nhận nấm gây hại cả trên trái và cùi chuối, nhưng triệu chứng bệnh trên trái chưa tìm thấy tài liệu nào trên thế giới công bố.

Trên trái: Ban đầu là những đốm tròn màu nâu chuyển sang đen và có một vài sợi nấm màu trắng mọc thành cụm trên mơ bệnh ở thời điểm 2 NSLB. Sau đó, từ những sợi nấm màu trắng phát triển mang túi dạng hình cầu, ban đầu có màu trắng chuyển sang nâu và sau đó trở nên đen hồn tồn trên mơ bệnh (Hình 3.11A, B, C, D & F).

Trên bộ phận cùi chuối: triệu chứng bệnh xuất hiện ở thời điểm 3 NSLB, bề mặt mô cùi chuyển sang màu nâu, có những sợi nấm mang túi bào tử màu trắng chuyền dần sang màu nâu sậm rồi đen trên tồn bộ bề mặt mơ cùi chuối và phần vỏ xung quanh mô cùi chuyển sang đen (Hình 3.11E & F).

Dựa vào triệu chứng thối cùi so với nghiên cứu về bệnh sau thu hoạch trên chuối của Lassois và ctv. (2010), kết luận rằng nấm Aspergillus niger gây ra hiện tượng thối cùi chuối.

3.2.5.2 Đặc điểm tản nấm trên môi trường PDA

Tản nấm phát triển tương đối nhanh, mọc thưa thớt trên mơi trường PD ở nhiệt độ phịng và đạt đường kính 7,5 cm ở thời điểm 7 NSKC. Ban đầu là một tản nấm màu trắng và bắt đầu hình thành cơ quan sinh sản là những bọng mang bào tử sau 2 NSKC. Ở thời điểm 2 NSKC sẽ xuất hiện những bọng (túi) màu trắng chuyển dần sang màu nâu đến đen. Đến thời điểm 7 NSKC, tản nấm là một khối màu đen, hình thành những vịng đồng tâm màu đen và nhạt dần ra rìa đĩa mơi trường . Mặt dưới đĩa Petri có màu trắng ngà, sợi nấm phát triển thành dạng tia hình quạt và rìa