M cl c
3.2 KẾT QUẢ GIÁM ĐỊNH
3.2.4.2 Đặc điểm nấm
Ổ nấm có dạng hình cầu, màu nâu đen và vách dầy (Hình 3.10B). Ổ nấm có kích thước 60-95 x 57,5-87,5 µm và đường kính của miệng ổ nấm 12,5-17,5 µm (Hình 3.10C & D). Bào tử nấm có dạng hình trứng hay hình bầu dục, khơng màu và có kích thước 11,25-16,25 x 10-13,75 µm. Bào tử nấm có một lớp màng mỏng bọc bên ngồi trong suốt và có phụ bộ đi dài tại một đầu của bào tử (Hình 3.10E).
Các đặc điểm nêu trên phù hợp với những nghiên cứu về bệnh đốm sẹo đen trên chuối của Snowdon (1991), bayasekera và ctv. (1993) và Biosecurity Australia (2002-2007). Ngoài ra, khi so sánh về đặc điểm hình thái của nấm gây hại như hình dạng, kích thước của ổ nấm và hình dạng bảo tử, có lớp màng nhầy xung quanh và có một phụ bộ đi bào tử nấm gây hại phù hợp với mô tả của Biosecurity Australia (2002-2007) về nấm Phyllosticta musarum gây bệnh sẹo đen trên chuối.
38
Hình 3.10: Triệu chứng bệnh sẹo đen và đặc điểm của nấm Phyllosticta musarum
(A) đ sẹo đe (C) Ổ ấ đ ợ q a s d ớ kí sơ ổ
(D) & (E Ổ ấ P. musarum p ể ụ ay đơ lẻ ô C o ử ấ P. musarum q a s d ớ kí ể 40X C B A D E B B
39
3.2.5 Bệnh thối cùi do nấm Apergillus niger
3.2.5.1 Triệu chứng bệnh
Nấm Aspergillus niger được phân lập từ cùi chuối thu thập ở ngồi tự nhiên, sau đó được lây nhiễm nhân tạo lại lên bộ phận cùi và cả bộ phận trái chuối khỏe. Kết quả ghi nhận nấm gây hại cả trên trái và cùi chuối, nhưng triệu chứng bệnh trên trái chưa tìm thấy tài liệu nào trên thế giới công bố.
Trên trái: Ban đầu là những đốm trịn màu nâu chuyển sang đen và có một vài sợi nấm màu trắng mọc thành cụm trên mô bệnh ở thời điểm 2 NSLB. Sau đó, từ những sợi nấm màu trắng phát triển mang túi dạng hình cầu, ban đầu có màu trắng chuyển sang nâu và sau đó trở nên đen hồn tồn trên mơ bệnh (Hình 3.11A, B, C, D & F).
Trên bộ phận cùi chuối: triệu chứng bệnh xuất hiện ở thời điểm 3 NSLB, bề mặt mô cùi chuyển sang màu nâu, có những sợi nấm mang túi bào tử màu trắng chuyền dần sang màu nâu sậm rồi đen trên tồn bộ bề mặt mơ cùi chuối và phần vỏ xung quanh mơ cùi chuyển sang đen (Hình 3.11E & F).
Dựa vào triệu chứng thối cùi so với nghiên cứu về bệnh sau thu hoạch trên chuối của Lassois và ctv. (2010), kết luận rằng nấm Aspergillus niger gây ra hiện tượng thối cùi chuối.
3.2.5.2 Đặc điểm tản nấm trên môi trường PDA
Tản nấm phát triển tương đối nhanh, mọc thưa thớt trên môi trường PD ở nhiệt độ phòng và đạt đường kính 7,5 cm ở thời điểm 7 NSKC. Ban đầu là một tản nấm màu trắng và bắt đầu hình thành cơ quan sinh sản là những bọng mang bào tử sau 2 NSKC. Ở thời điểm 2 NSKC sẽ xuất hiện những bọng (túi) màu trắng chuyển dần sang màu nâu đến đen. Đến thời điểm 7 NSKC, tản nấm là một khối màu đen, hình thành những vịng đồng tâm màu đen và nhạt dần ra rìa đĩa mơi trường . Mặt dưới đĩa Petri có màu trắng ngà, sợi nấm phát triển thành dạng tia hình quạt và rìa tản nấm phát triển đều (Hình 3.12A & B).
40
3.2.5.3 Đặc điểm hình thái nấm Aspergillus niger
Cành bào đài trong suốt, mọc thẳng đứng, khơng có vách ngăn, có đường kính 10 µm và trên mỗi cành bào đài mang một bọng (túi) bào tử (Hình 3.12C). Bọng dạng hình chùy, khơng màu, có đường kính 42,5-95 µm và có nhiều cuống sinh bào tử khơng màu đính xung quanh bọng (Hình 3.12D). Bào tử đính thành dạng chuỗi trên những cuống sinh bào tử, khi cịn non bào tử khơng màu và có màu nâu khi trưởng thành. Bào tử có dạng hình cầu với nhiều gai xung quanh và đường kính 5- 10 µm (Hình 3.12E).
Hình 3.11: Triệu chứng thối do nấm Aspergillus niger gây hại trên trái và bộ phận cùi
chuối
A do ấ Aspergillus niger. ây ạ C D Hì d ế E do ấ Aspergillus niger F Sự p ể ủa ú o ử â đe ô B A D C F E
41
Hình 3.12: Đặc điểm hình thái nấm Aspergillus niger
A Sự p ể ủa ả ấ Aspergillus niger. ô ờ PDA (C) C o đ a ú o ử đ ợ q a s d ớ kí so ổ
D Hì dạ ọ o ử đ ợ q a s d ớ kí ể E40 E Hì dạ ử ấ Aspergillus niger q a s d ớ kí ể E40
D
B A
E C
42
Dựa vào cách phát triển và đặc điểm hình thái của nấm trên môi trường nuôi cấy giống với những nghiên cứu của Barrnet và Hunter (1998); Nguyễn Văn Bá và ctv., (2005) về chi Aspergillus. Ngoài ra, dựa vào màu sắc của tản nấm có màu đen hay đặc điểm bào tử như bào tử có màu nâu, có nhiều khía (gai) xung quanh, kết quả này tương tự với mô tả của Burgess và ctv. (2009), Pitt và Hocking (2009) về loài
Aspergillus niger.
3.2.6 Bệnh thối cùi do nấm Curvularia lunata
3.2.6.1 Triệu chứng bệnh
Kết quả lây bệnh nhân tạo bắt đầu xuất hiện ở thời điểm 3 NSLB, mơ cùi có những sợi nấm màu xám trắng chuyển sang màu xanh xám trên bề mặt cùi chuối. Đến thời điểm 7 NSLB, có rất nhiều hệ sợi nấm màu xanh xám chuyển dần sang xanh đen phát triển bao phủ tồn bộ cùi và vùng mơ xung quanh cùi có màu nâu đen (Hình 3.13A & B).
Trong quá trình lây nhiễm nhân tạo không ghi nhận sự gây hại của nấm trên trái chuối khỏe. Dựa vào triệu chứng thối cùi so với mô tả về bệnh sau thu hoạch trên chuối của Lassois và ctv. (2010), kết luận rằng nấm Curvularia lunata gây ra triệu chứng thối cùi chuối.
3.2.6.2 Đặc điểm tản nấm trên môi trường PDA
Tản nấm phát triển nhanh trên mơi trường PD ở nhiệt độ phịng đạt đường kính 8,5 cm ở thời điểm 7 NSKC. Ban đầu tản nấm có màu trắng xám sau đó chuyển dần sang màu xanh xám ở thời điểm 3 NSKC. Ở thời điểm 7 NSKC, mặt trên tản nấm nhơ cao ở giữa có màu nâu nhạt, xung quanh hình thành những vịng đồng tâm có màu xám xanh nhạt dần ra rìa, sợi nấm phát triển bện chặt vào nhau và rìa tản nấm có màu trắng ngà; mặt dưới tản nấm hình thành các vịng đồng tâm, với vịng trong cùng màu xanh đen, nhạt dần ra các vịng phía ngồi và rìa tản nấm phát triển khơng đều (Hình 3.13C & D).
3.2.6.3 Đặc điểm hình thái nấm Curvularia lunata
Sợi nấm Curvularia lunata màu nâu, có vách ngăn và cành bào đài được
hình thành từ sợi nấm. Cành bào dài to hơn sợi nấm, khơng phân nhánh, có nhiều vách ngăn, màu nâu, kích thước 67,5-250 µm x 3,75-5,0µm (Hình 3.13E & F). Bào tử được hình thành ở các vị trí mấu lồi xung quanh hay ở đỉnh của cành bào đài, dạng hình thuyền, hơi thon dài, có 3 vách ngăn, tế bào ở giữa hơi cong và phình to,
43
có màu nâu đậm và nhạt dần ở hai đầu bào tử, một đầu bào tử bầu tròn, đầu còn lại hơi nhọn hơn. Kích thước bào tử 15-26,3 x 7,5-11,3 µm (Hình 3.13G).
Hình 3.13: Triệu chứng thối cùi trên chuối và đặc điểm tản nấm, hình thái nấm
Curvularia lunata
(A) & do ấ C. lunata (C) D Đặ đ ể ả ấ ô ờ PDA
(E) & (F Hì dạ o đ đí ủa o ử đ ợ q a s d ớ kí sơ ổ kí ể ở ậ kí E40 (G M sắ ì dạ o ử q a s d ớ kí ể E40 A E F G B C D
44
Dựa vào sự phát triển, màu sắc của tản nấm trên PD , đặc điểm hình dạng và màu sắc của bào tử, kết quả này tương tự với những ghi nhận của Barrnet và Hunter (1998), Mew và Gonzale (2002), Pitt và Hocking (2009) thì đây chính là nấm Cuvurlaria lunata.
3.2.7 Bệnh thối cùi do nấm Rhizopus stolonifer
3.2.7.1 Triệu chứng bệnh
Nấm Rhizopus được phân lập từ triệu chứng thối trái ngồi tự nhiên, sau đó thực hiện quy trình Koch trên trái khỏe và bộ phận cùi. Kết quả ghi nhận, loài nấm là một tác nhân gây hại trên cả bộ phận trái và cùi chuối.
Biểu hiện bệnh xuất hiện ở thời điểm 3 NSLB, mô vỏ trái và cùi chuối bắt đầu chuyển từ màu nâu nhạt sang nâu sậm. Ở thời điểm 5 NSLB, trên bề mặt vỏ trái và bộ phận cùi chuối có những hệ sợi nấm màu trắng, phát triển nhanh, mọc bông và mang những bọng (túi bào tử) màu trắng sau đó chuyển sang đen. Đến thời điểm 7 NSLB, nấm phát triển gây thối toàn bộ bề mặt của mơ cùi chuối (Hình 3.14A, B & C ).
Dựa vào triệu chứng ngoài tự nhiên và kết quả lây bệnh nhân tạo tương tự với nghiên cứu của Snowdon (1991) về triệu chứng thối do nấm Rhizopus sp. gây ra trên chuối sau thu hoạch.
3.2.7.2 Đặc điểm tản nấm trên môi trường PDA
Trên môi trường PD ở nhiệt độ phòng, tản nấm phát triển rất nhanh, đầy đĩa môi trường PD ở thời điểm 2 NSKC. Tản nấm phát triển nhô cao khỏi bề mặt môi trường và lên cả thành đĩa Petri. Sợi nấm không màu, phát triển đang đan xen lẫn nhau và bắt đầu hình thành những túi sau 1 NSKC. Túi bào tử ban đầu có màu trắng sau đó chuyển dần sang đen ở thời điểm 2 NSKC; mặt dưới đĩa petri có màu trắng ngà (Hình 3.15 & B).
3.2.7.3 Đặc điểm hình thái nấm Rhizopus stolonifer
Túi bào tử được hình thành từng cái riêng lẻ trên cành bào đài, có dạng hình cầu, từ màu trắng chuyển dần sang nâu đến đen ở thời điểm 3 NSKC, có đường kính 45-90 µm và khi túi bào tử vỡ ra có hình dạng giống cây dù. Cành bào đài là cọng mang túi bào tử mọc từ những khuẩn căn phát triển sâu vào môi trường ni cấy, mọc thẳng đứng, khơng phân nhánh, có màu nâu, khơng có cách ngăn và có kích thước 800-900 x 12-13,75 µm (Hình 3.15C & D). Bào tử nấm Rhizopus stolonifer
45
khơng đồng nhất về kích cỡ, hình bầu dục hơi nhọn hai đầu, có màu xanh xám và kích thước bào tử từ 6,25-10 x 5-7,5 µm (Hình 3.13E).
A
Hình 3.14: Triệu chứng thối trái cùi do nấm Rhizopus stolonifer trên chuối xiêm
A do ấ R. stolonifer ở ờ đ ể 7 NSL do ấm Rhizopus stolonifer ở ờ đ ể 7 NSL C Sự p ể sợ ấ a ú o ử đe ô q a s d ớ kí so ổ A B C
46
Dựa vào những đặc điểm phân loại của Burgess và ctv. (2009) thì nấm này thuộc chi Rhizopus. Ngồi ra trong q trình khảo sát về đặc điểm màu sắc, cách
phát triển tản nấm đến hình dạng màu sắc cành bào đài và bào tử giống với nghiên cứu của Nguyễn Văn bá và ctv. (2005), Pitt và Hocking (2009) về lồi Rhizopus stolonifer, do đó có thể khẳng định rằng lồi nấm này là R. stolonifer.
Hình 3.15: Đặc điểm tản nấm và hình thái của nấm Rhizopus stolonifer
A Sự p ể ủa ả ấ Rhizopus stolonifer ô ờ PDA (C) Đí o đ a ú o ử đ ợ q a s d ớ kí soi ổ D ú o ử ó dạ d sa k p ó í o ử đ ợ q a s d ớ kí ể E40 F o ử ấ R. stolonifer q a s d ớ kí ể E40 A B C D E
47
3.2.8 Bệnh thối cùi do nấm Cladosporium sp.
3.2.8.1 Triệu chứng bệnh
Nấm được phân lập trên cùi chuối ngồi tự nhiên, sau đó lây nhiễm nhân tạo theo quy trình Koch’ trên cả bộ phận cùi và trái nhưng không ghi nhận được triệu chứng bệnh do nấm gây hại trên trái.
Triệu chứng thối cùi do nấm Cladosporium sp. xuất hiện ở thời điểm 3
NSLB, trên bề mặt mô cùi chuyển sang màu nâu nhạt và có sự phát triển của sợi nấm giống như bụi có màu xanh rêu. Đến thời điểm 7 NSLB, nấm phát triển bao phủ toàn bộ bề mặt cùi chuối, phần mơ vỏ quanh cùi có màu đen và triệu chứng bệnh trên cù chuối xiêm phát triển nhanh hơn chuối già (Hình 3.16A & B).
Kết quả lây bệnh nhân tạo trên cùi chuối giống với mô tả của Snowdon (1991) và Ploezt và ctv. (2003) về đặc điểm triệu chứng thối cùi màu đen và ghi nhận nấm Cladosporium sp. gây thối sau thu hoạch trên cùi chuối của Lassois và
ctv. (2010).
3.2.8.2 Đặc điểm tản nấm trên môi trường PDA
Tản nấm mọc trên môi trường PD ở nhiệt độ phịng rất chậm, đạt đường kính 1,4 cm ở thời điểm 7 ngày nuôi cấy (NSKC). Giai đoạn đầu tản nấm có màu xám trắng phát triển nhơ cao trên bề mặt mơi trường sau đó chuyển dần sang màu xanh rêu; mặt dưới đĩa Petri, tản nấm có màu nâu sậm hơi vàng và có hiện tượng làm nứt môi trường PD ở thời điểm 3 NSKC. Sau đó, tản nấm là một khối màu xanh nâu đậm ở giữa và nhạt dần ra ngoài, bề mặt ghồ ghề và có nhiều khía; mặt dưới đĩa Petri, tản nấm là các khoanh nấm có màu từ xanh đen, màu sắc đậm ở giữa và nhạt dần. Bào tử được hình thành khi ở giữa tản nấm có những cụm sợi nấm như bụi có màu xanh nâu ở thời điểm 14 NSKC (Hình 3.16C & D).
3.2.8.3 Đặc điểm hình thái nấm Cladosporium sp.
Sợi nấm Cladosporium sp. màu nâu, có vách ngăn. Cành bào đài chia làm
hai phần: cành chính mọc thẳng đứng, dài, màu nâu nhạt với kích thước từ 32,5-125 x 2,5-5 µm; cành bào đài phụ hình thành trên cành bào đài chính, phân nhánh và có kích thước 12,5-27,5 x 2,5-4,0 µm (Hình 3.16E). Bào tử được hình thành trên cành bào đài phân nhánh, đính thành cụm hoặc liên kết với nhau tạo thành chuỗi, bào tử đơn bào, hình bầu dục hoặc trứng, màu nâu nhạt với kích thước 5-12,5 x 2,5-5 µm (Hình 3.16F).
48
Dựa vào tài liệu của Barrnet và Hunter (1998) và Watanabe (2002) về đặc điểm màu sắc tản nấm, hình dạng, màu sắc và kích thước bào tử cho thấy nấm thuộc chi Cladosporium.
Hình 3.16: Triệu chứng thối cùi, sự phát triển của tản nấm và đặc điểm hình thái của
nấm Cladosporium sp.
(A) & (B) i do ấ Cladosporium sp. (C) & (D Sự p ể ủa ả ấ ô ờ PDA
(E) & (F Đặ đ ể ủa o đ o ử ấ Cladosporium sp. q a s d ớ kí ể E40 E F C D B B A
49
CHƯƠNG 4
KẾT LUẬN - ĐỀ NGHỊ
4.1. KẾT LUẬN
Kết quả giám định các mẫu chuối bị bệnh thu thập tại chợ Xuân Khánh, Tân n, n Nghiệp, Hưng Lợi, siêu thị Coopmart và Metro tại Q. Ninh Kiều – Tp. Cần Thơ đã ghi nhận có 8 lồi nấm gây hại trên chuối sau thu hoạch bao gồm
Colletotrichum musae, Fusarium sp., Botryodiplodia theobromae, Phyllosticta musarum, Aspergillus niger, Curvularia lunata, Cladosporium sp. và Rhizopus stolonifer.
Trong số 8 tác nhân thì C. musae, B. theobromae và Fusarium sp. là ba tác
nhân gây hại phổ biến. Nấm Colletotrichum musae là tác nhân gây hại quan trọng
nhất, vì lồi nấm này xuất hiện ở tất cả các địa điểm thu mẫu vừa gây bệnh thán thư trên và thối cùi, mức độ gây hư hỏng nhanh hơn những tác nhân còn lại khi ở thời điểm 7 NSLB trái và bộ phận cùi bị thối hoàn toàn. Đối với nấm Botryodiplodia theobromae vừa gây hại trên cả trái và cùi chuối, gây thối hoàn toàn ở thời điểm 7
NSLB nhưng ở điều kiện tự nhiên lồi nấm này xuất hiện khơng phổ biến như nấm
C.musae, Fusarium sp. và chỉ gây hại chủ yếu trên trái chuối già. Còn triệu chứng
thối cùi do nấm Fusarium sp. cũng phổ biến như nấm C. musae nhưng chỉ gây hại
trên bộ phận cùi.
Tất cả các tác nhân gây thối sau thu hoạch trên chuối đều biểu hiện triệu chứng bệnh khác nhau. Do đó, có thể nhận biết triệu chứng của từng tác nhân gây thối dựa vào đặc điểm mô bệnh, sự phát triển của tác nhân trên mô bệnh như màu sắc, hình dạng bào tử và ổ nấm.
4.2. ĐỀ NGHỊ
Thử nghiệm hiệu quả của một số loại thuốc sinh học, hóa học đối với tác nhân gây hại quan trọng.
50
* Tiếng Việt
BURGESS, L.W., T.E. KNIGHT, L. TESORIERO VÀ PH N THÚY HIỀN. (2009). Cẩm nang chẩn đoán bệnh cây ở Việt Nam. Xuất bản bởi Trung tâm Nghiên cứu Nông nghiệp Quốc tế ustralia ( CI R). Trang: 165-168.
NGUYỄN BẢO VỆ VÀ LÊ TH NH PHONG. (2003). Giáo trình cây đa niên. Phần I: cây ăn trái. Khoa Nông nghiệp & Sinh học ứng dung. Trường Đại học Cần Thơ. Trang: 89-90.
NGUYỄN VĂN BÁ, C O NGỌC ĐIỆP VÀ NGUYỄN VĂN THÀNH. (2005). Giáo trình Nấm học, Viện Nghiên cứu và phát triển công nghệ sinh học, Trường Đại học Cần Thơ. 112 trang.
OU S.H.. (1983). Bệnh hại lúa. Nhà xuất bản Nông Nghiệp Hà Nội. 229 trang.
VŨ TRIỆU MÂN. (2007). Giáo trình bệnh cây chun khoa. Trường Đại học Nơng Nghiệp I, Hà Nội. Trang: 74-76.
* Tiếng Anh
ABAYASEKERA, C., A.M. KARUNARATNE and N.K.B. ADIKARAM. (1993). Freckle disease