M cl c
3.2 KẾT QUẢ GIÁM ĐỊNH
3.2.2.3 Đặc điểm hình thái nấm Fusarium sp
Sợi nấm khơng màu, có vách ngăn, cành bào đài phân nhánh và bào tử đính từng cái riêng lẻ trên cành bào đài (Hình 3.4E). Nấm Fusarium sp. hình thành ba loại bào tử trên mơi trường PD gồm có đại bào tử, tiểu bào tử và bào tử áo. Đại bào tử chiếm đa số, dạng hình liềm hai đầu nhọn hoặc một đầu cong, không màu, có từ 2-5 vách ngăn trong đó bào tử 3 vách ngăn là chủ yếu, có kích thước 12,5-25 x 2,5-5,25 µm (Hình 3.4F) và đại bào tử nảy mầm khi ni cấy trên lame (Hình 3.4G). Tiểu bào tử dạng hình trụ, khơng màu và có kích thước 5-9,5 x 1,25-3,75 µm. Ngồi ra, nấm cịn hình thành bào tử áo có vách dày khi mơi trường PD nghèo dinh dưỡng, dạng chuỗi và có hình cầu (Hình 3.4H).
29
F
Hình 3.4: Triệu chứng bệnh và đặc điểm nấm Fusarium sp.
(A) & ( o ự k lây â ạo ở ờ đ ể 7 NSL (C) & (D Sự p ể ủa ả ấ Fusarium sp. ô ờ PDA
(E) & (F) C o đ a o ử đạ o ử đ ợ q a s d ớ kí ể E40 G Đạ o ử ảy ầ k ô ấy la e ở ậ kí E40
(H o ử o ấ Fusarium sp. đ ợ ì ừ sợ ấ q a s ở ậ kí (E40) E C A B F G D H
30
Những đặc điểm về sự phát triển tản nấm, hình dạng và kích thước tiểu bào tử, đại bào tử và bào tử áo phù hợp với các tài liệu nghiên cứu của Barrnet và Hunter (1998), Nguyễn Văn Bá và ctv. (2005), Burgess và ctv. (2009) và Pitt và Hocking (2009) thì đây chính là nấm Fusarium sp.
3.2.3 Bệnh thối trái do nấm Botryodiplodia theobromae (Lasiodiplodia
theobromae)
3.2.3.1 Triệu chứng bệnh
Ngoài tự nhiên:
Trên trái: triệu chứng bệnh xuất hiện chủ yếu ở phần chóp trái. Ban đầu phần vỏ chóp trái có màu nâu nhạt chuyển dần sang màu nâu sậm hơn và khi đó hình thành những ổ nấm màu đen nhơ lên bề mặt vỏ trái. Sau đó, hình thành sợi nấm màu xám trắng phát triển xung quanh bộ chóp trái và chuyển sang màu xanh đen (Hình 3.5A, B, C & D).
Trên cùi chuối: phần mơ có màu đen, da nhăn nheo, có sự hình thành những ổ nấm màu đen nhô lên trên phần mô và chuỗi xoắn bào tử từ màu trắng chuyển sang xanh đen (Hình 3.5E).
Triệu chứng sau khi lây bệnh nhân tạo
Trên trái: ban đầu mô chuyển sang màu nâu và xuất hiện những sợi nấm màu trắng xám ở thời điểm 3 NSLB (Hình 3.6 & B). Sau đó, những sợi nấm màu xám trắng chuyển sang màu xanh xám ở 5 NSLB và ổ nấm được hình thành bên dưới những cụm sợi nấm màu xám xanh ở thời điểm 7 NSLB (Hình 3.6C & D).
Trên cùi chuối: sau khi tiến hành lây bệnh nhân tạo trên cùi triệu chứng thể hiện rõ nhất ở thời điểm 7 NSLB. Triệu chứng thối cùi do nấm Botryodiplodia theobromae bắt đầu xuất hiện ở thời điểm 3 NSLB, ban đầu cùi chuối chuyển sang
màu nâu và hình thành những sợi nấm màu xám trắng bao phủ trên bề mặt cùi chuối. Khi những sợi nấm này chuyển sang màu xanh đen, nhiều ổ nấm màu đen được hình thành và mơ cùi trở nên đen hoàn toàn ở thời điểm 7 NSLB (Hình 3.7A & B).
Dựa vào đặc điểm triệu chứng nấm gây hại phù hợp với triệu chứng bệnh ngoài tự nhiên nhưng chỉ có điểm khác đó là ổ nấm hình thành sau sự phát triển của sợi nấm. Kết quả này tương tự với báo cáo của Smoot (1971), Weber (1973), Snowdon (1991), Barkai-golan (2001) và Ploetz (2003) về triệu chứng thối trái và thối cùi trên chuối sau thu hoạch đã được công bố trên thế giới.
31
Hình 3.5: Sự phát triển triệu chứng thối trái và thối cùi do nấm Botryodiplodia
theobromae do nhiễm tự nhiên
(A) do ấ B. theobromae
Hì dạ ơ ó â ề ổ ấ đe đ ợ ì C Sự p ể ủa ổ ấ B. theobromae ô q a s d ớ kí so ổ D Mô yể sa đe ì ữ sợ ấ ắ sa a E do Botryodiplodia theobromae B A E C D
32
Hình 3.6: Triệu chứng thối trái nấm Botryodiplodia theobromae sau khi lây bệnh nhân tạo
A do ấ Botryodiplodia theobromae ở ờ đ ể 3 NSL (C) & (D) B. theobromae ở ờ đ ể 7 NSLB D C B A
33
3.2.3.2 Đặc điểm tản nấm trên môi trường PDA
Tản nấm phát triển rất nhanh trên mơi trường PD khi ở nhiệt độ phịng. Ở thời điểm 2 ngày sau khi cấy (NSKC), hệ sợi nấm đã phát triển đầy bề mặt môi trường đĩa Petri và bắt đầu chuyển dần từ màu trắng sang trắng xám. Đến thời điểm 3NSKC, mặt trên tản nấm có nhiều hệ sợi nấm khí sinh phát triển trên mặt môi trường PD , phần giữa có màu trắng xám và xung quanh gần rìa màu xám xanh; mặt dưới có màu xanh đen rõ rệt ở giữa và nhạt dần ra rìa tản nấm (Hình 3.8A & B).
Hình 3.7: Triệu chứng thối cùi do nấm Botryodiplodia theobromae
A do ấ Botryodiplodia theobromae ở ờ đ ể 7 NSLB (C) Sự p ể ủa ổ ấ Botryodiplodia theobromae ô d ớ kí so ổ
A
34
Ở thời điểm 5 NSKC, tản nấm có sự chuyển đổi màu sắc rõ rệt hơn trong q trình phát triển, có màu xanh đậm (Hình 3.8C & D) và chuyển sang xanh đen ở thời điểm 7 NSKC; mặt dưới của tản nấm chuyển màu nhanh hơn và có màu đen. Những quả thể của nấm được hình thành nhiều ở thời 7 NSKC (Hình 3.8E & F), trong điều kiện chiếu sáng liên tục dưới ánh đèn huỳnh quang hoặc trong tủ úm có đèn chiếu sáng cận cực tím. Nấm sẽ hình thành rất ít hoặc khơng hình thành các quả thể trong điều kiện tối hoàn toàn, kết quả cho thấy sự hình thành những quả thể phụ thuộc vào ánh sáng và kết quả này cũng tương tự với những nghiên đã được báo cáo trước đó của lam và ctv. (2001). Quan sát tản nấm phát triển trên môi trường PD nhận thấy bào tử được hình thành nhiều trong quả thể khi xuất hiện những giọt nước trong suốt hoặc khi xuất hiện những chuối xoắn bào tử (spore tendrils) trên những quả thể được hình thành trên mơi trường PD hay mô trái. Những chuối xoắn bào tử này ban đầu có màu trắng chuyển dần sang màu xanh đen, cuối cùng đen hoàn tồn (Hình 3.9A & B ).
3.2.3.3 Đặc điểm hình thái nấm Botryodiplodia theobromae
Ổ nấm hình thành trên mơi trường ni cấy hay mơ bệnh, có dạng hình cầu, màu nâu sậm đến đen và kích thước của ổ từ 157,5-250 µm (Hình 3.9C & D). Bào tử nấm đính từng cái riêng lẻ trên cành bào đài hình trụ khơng màu bên trong ổ nấm. Giai đoạn đầu bào tử đơn bào, khơng màu, dạng hình trứng, có kích thước 20- 28,75 x 11,3-18,75 µm. Bào tử non có hai đầu bầu hoặc một đầu hơi nhọn, vách tế bào mỏng và bên trong có chứa những tế bào chất (Hình 3.9E). Sau đó bào tử bắt đầu hình thành vách tế bào dày hơn rồi chuyển dần sang màu nâu nhạt rồi đến màu nâu sậm, một vách ngăn ở giữa tế bào được hình thành và tạo thành bào tử có 2 tế bào (Hình 3.9F). Cuối cùng bào tử sẽ có màu nâu đậm hơn, hình thành những đường kẻ dọc theo chiều dài bào tử nhưng có màu nhạt hơn vách ngăn ngang và có kích thước 26,25-35 x 13,75-18,75 µm (Hình 3.9G). Bào tử có khả năng nảy mầm khi ẩm độ cao hoặc xâm nhiễm vào mô ký chủ. Ống mầm được hình thành chủ yếu ở cuối tử hay ở giữa của bào tử (Hình 3.9H).
Dựa vào đặc điểm hình thái nấm và so sánh với tài liệu của Barnett và Hunter (1998) cho thấy nấm thuộc chi Botryodiplodia. Trong đó, sự thay đổi màu sắc của tản nấm trên môi trường PD từ trắng sang xanh đen, sự hình thành và hình dạng ổ nấm hoặc sự biến đổi về màu sắc, hình dạng và kích thước bào tử bào tử phù hợp với kết quả nghiên cứu về loài nấm Botryodiplodia theobromae của Alasoadura (1970), Weber (1973), Holliday (1980), lam và ctv. (2001); Woodward và ctv. (2005); lves và ctv. (2008) và Latha và ctv. (2009). Qua đó, có thể kết luận rằng
35
loài nấm gây thối trái và thối cùi được mô tả ở trên là nấm Botryodiplodia theobromae. F D C B A E
Hình 3.8: Đặc điểm tản nấm Botryodiplodia theobromae trên môi trường PD
A Đặ đ ể ả ấ Botryodiplodia theobromae ở ờ đ ể 3 NSKC C D Đặ đ ể ả ấ Botryodiplodia theobromae ở ờ đ ể 5 NSKC (E) & (F) Sự ì ổ ấ Botryodiplodia theobromae ở ờ đ ể 7 NSKC PDA
36
Hình 3.9: Đặc điểm hình thái nấm Botryodiplodia theobromae
(A) & (B) C ỗ oắ o ử spo e e d ls p ể ừ ổ ấ ô ô ờ PDA (C) Ổ ấ đ ợ p ẩ , 2 ổ ấ ó ộ ở ậ kí E10) (D) C đí o ử o ổ ấ đ ợ p ẩ ở ậ kí E40 (E) o ử ò o , k ô , k ô ă ở ậ kí E40 (F) o ử ở ắ đầ ì ă ó â ạ E40 (G) o ử ở , â sậ , ó ă a ì ữ đ ờ kẻ dọ eo ề d ở ậ kí E40 H o ử ảy ầ q a s ở ậ kí E40 C F G H A B D E
37
3.2.4 Đốm sẹo đen do nấm Phyllosticta musarum
3.2.4.1 Triệu chứng bệnh
Trên bề mặt vỏ trái xuất hiện nhiều đốm màu đen, sờ vào cảm thấy nhám và có đường kính khoảng 1mm. Ban đầu là những quầng màu xanh tái, sau đó chuyển sang màu nâu nhạt hay đen khi hình thành ổ nấm. Ổ nấm phát triển nhô cao hoặc một phần nằm trong mơ bệnh, có màu nâu hay đen mọc đơn lẻ hay thành cụm từ 5- 11 ổ khi quan sát dưới kính sơi nổi. Bệnh xuất hiện chủ yếu ở mặt ngoài của trái, phần gần phát hoa và cuống trái (Hình 3.10A).
3.2.4.2 Đặc điểm nấm
Ổ nấm có dạng hình cầu, màu nâu đen và vách dầy (Hình 3.10B). Ổ nấm có kích thước 60-95 x 57,5-87,5 µm và đường kính của miệng ổ nấm 12,5-17,5 µm (Hình 3.10C & D). Bào tử nấm có dạng hình trứng hay hình bầu dục, khơng màu và có kích thước 11,25-16,25 x 10-13,75 µm. Bào tử nấm có một lớp màng mỏng bọc bên ngồi trong suốt và có phụ bộ đi dài tại một đầu của bào tử (Hình 3.10E).
Các đặc điểm nêu trên phù hợp với những nghiên cứu về bệnh đốm sẹo đen trên chuối của Snowdon (1991), bayasekera và ctv. (1993) và Biosecurity Australia (2002-2007). Ngoài ra, khi so sánh về đặc điểm hình thái của nấm gây hại như hình dạng, kích thước của ổ nấm và hình dạng bảo tử, có lớp màng nhầy xung quanh và có một phụ bộ đuôi bào tử nấm gây hại phù hợp với mô tả của Biosecurity Australia (2002-2007) về nấm Phyllosticta musarum gây bệnh sẹo đen trên chuối.
38
Hình 3.10: Triệu chứng bệnh sẹo đen và đặc điểm của nấm Phyllosticta musarum
(A) đ sẹo đe (C) Ổ ấ đ ợ q a s d ớ kí sơ ổ
(D) & (E Ổ ấ P. musarum p ể ụ ay đơ lẻ ô C o ử ấ P. musarum q a s d ớ kí ể 40X C B A D E B B
39
3.2.5 Bệnh thối cùi do nấm Apergillus niger
3.2.5.1 Triệu chứng bệnh
Nấm Aspergillus niger được phân lập từ cùi chuối thu thập ở ngoài tự nhiên, sau đó được lây nhiễm nhân tạo lại lên bộ phận cùi và cả bộ phận trái chuối khỏe. Kết quả ghi nhận nấm gây hại cả trên trái và cùi chuối, nhưng triệu chứng bệnh trên trái chưa tìm thấy tài liệu nào trên thế giới cơng bố.
Trên trái: Ban đầu là những đốm tròn màu nâu chuyển sang đen và có một vài sợi nấm màu trắng mọc thành cụm trên mô bệnh ở thời điểm 2 NSLB. Sau đó, từ những sợi nấm màu trắng phát triển mang túi dạng hình cầu, ban đầu có màu trắng chuyển sang nâu và sau đó trở nên đen hồn tồn trên mơ bệnh (Hình 3.11A, B, C, D & F).
Trên bộ phận cùi chuối: triệu chứng bệnh xuất hiện ở thời điểm 3 NSLB, bề mặt mô cùi chuyển sang màu nâu, có những sợi nấm mang túi bào tử màu trắng chuyền dần sang màu nâu sậm rồi đen trên tồn bộ bề mặt mơ cùi chuối và phần vỏ xung quanh mô cùi chuyển sang đen (Hình 3.11E & F).
Dựa vào triệu chứng thối cùi so với nghiên cứu về bệnh sau thu hoạch trên chuối của Lassois và ctv. (2010), kết luận rằng nấm Aspergillus niger gây ra hiện tượng thối cùi chuối.
3.2.5.2 Đặc điểm tản nấm trên môi trường PDA
Tản nấm phát triển tương đối nhanh, mọc thưa thớt trên môi trường PD ở nhiệt độ phịng và đạt đường kính 7,5 cm ở thời điểm 7 NSKC. Ban đầu là một tản nấm màu trắng và bắt đầu hình thành cơ quan sinh sản là những bọng mang bào tử sau 2 NSKC. Ở thời điểm 2 NSKC sẽ xuất hiện những bọng (túi) màu trắng chuyển dần sang màu nâu đến đen. Đến thời điểm 7 NSKC, tản nấm là một khối màu đen, hình thành những vịng đồng tâm màu đen và nhạt dần ra rìa đĩa mơi trường . Mặt dưới đĩa Petri có màu trắng ngà, sợi nấm phát triển thành dạng tia hình quạt và rìa tản nấm phát triển đều (Hình 3.12A & B).
40
3.2.5.3 Đặc điểm hình thái nấm Aspergillus niger
Cành bào đài trong suốt, mọc thẳng đứng, khơng có vách ngăn, có đường kính 10 µm và trên mỗi cành bào đài mang một bọng (túi) bào tử (Hình 3.12C). Bọng dạng hình chùy, khơng màu, có đường kính 42,5-95 µm và có nhiều cuống sinh bào tử khơng màu đính xung quanh bọng (Hình 3.12D). Bào tử đính thành dạng chuỗi trên những cuống sinh bào tử, khi cịn non bào tử khơng màu và có màu nâu khi trưởng thành. Bào tử có dạng hình cầu với nhiều gai xung quanh và đường kính 5- 10 µm (Hình 3.12E).
Hình 3.11: Triệu chứng thối do nấm Aspergillus niger gây hại trên trái và bộ phận cùi
chuối
A do ấ Aspergillus niger. ây ạ C D Hì d ế E do ấ Aspergillus niger F Sự p ể ủa ú o ử â đe ô B A D C F E
41
Hình 3.12: Đặc điểm hình thái nấm Aspergillus niger
A Sự p ể ủa ả ấ Aspergillus niger. ô ờ PDA (C) C o đ a ú o ử đ ợ q a s d ớ kí so ổ
D Hì dạ ọ o ử đ ợ q a s d ớ kí ể E40 E Hì dạ ử ấ Aspergillus niger q a s d ớ kí ể E40
D
B A
E C
42
Dựa vào cách phát triển và đặc điểm hình thái của nấm trên mơi trường nuôi cấy giống với những nghiên cứu của Barrnet và Hunter (1998); Nguyễn Văn Bá và ctv., (2005) về chi Aspergillus. Ngoài ra, dựa vào màu sắc của tản nấm có màu đen hay đặc điểm bào tử như bào tử có màu nâu, có nhiều khía (gai) xung quanh, kết quả này tương tự với mô tả của Burgess và ctv. (2009), Pitt và Hocking (2009) về loài
Aspergillus niger.
3.2.6 Bệnh thối cùi do nấm Curvularia lunata
3.2.6.1 Triệu chứng bệnh
Kết quả lây bệnh nhân tạo bắt đầu xuất hiện ở thời điểm 3 NSLB, mơ cùi có những sợi nấm màu xám trắng chuyển sang màu xanh xám trên bề mặt cùi chuối. Đến thời điểm 7 NSLB, có rất nhiều hệ sợi nấm màu xanh xám chuyển dần sang xanh đen phát triển bao phủ tồn bộ cùi và vùng mơ xung quanh cùi có màu nâu đen (Hình 3.13A & B).
Trong q trình lây nhiễm nhân tạo khơng ghi nhận sự gây hại của nấm trên trái chuối khỏe. Dựa vào triệu chứng thối cùi so với mô tả về bệnh sau thu hoạch trên chuối của Lassois và ctv. (2010), kết luận rằng nấm Curvularia lunata gây ra triệu chứng thối cùi chuối.
3.2.6.2 Đặc điểm tản nấm trên môi trường PDA
Tản nấm phát triển nhanh trên mơi trường PD ở nhiệt độ phịng đạt đường kính 8,5 cm ở thời điểm 7 NSKC. Ban đầu tản nấm có màu trắng xám sau đó chuyển dần sang màu xanh xám ở thời điểm 3 NSKC. Ở thời điểm 7 NSKC, mặt trên tản nấm nhơ cao ở giữa có màu nâu nhạt, xung quanh hình thành những vịng đồng tâm có màu xám xanh nhạt dần ra rìa, sợi nấm phát triển bện chặt vào nhau và rìa tản nấm có màu trắng ngà; mặt dưới tản nấm hình thành các vịng đồng tâm, với vòng trong cùng màu xanh đen, nhạt dần ra các vịng phía ngồi và rìa tản nấm phát triển khơng đều (Hình 3.13C & D).
3.2.6.3 Đặc điểm hình thái nấm Curvularia lunata
Sợi nấm Curvularia lunata màu nâu, có vách ngăn và cành bào đài được
hình thành từ sợi nấm. Cành bào dài to hơn sợi nấm, khơng phân nhánh, có nhiều vách ngăn, màu nâu, kích thước 67,5-250 µm x 3,75-5,0µm (Hình 3.13E & F). Bào tử được hình thành ở các vị trí mấu lồi xung quanh hay ở đỉnh của cành bào đài, dạng hình thuyền, hơi thon dài, có 3 vách ngăn, tế bào ở giữa hơi cong và phình to,
43
có màu nâu đậm và nhạt dần ở hai đầu bào tử, một đầu bào tử bầu tròn, đầu còn lại hơi nhọn hơn. Kích thước bào tử 15-26,3 x 7,5-11,3 µm (Hình 3.13G).
Hình 3.13: Triệu chứng thối cùi trên chuối và đặc điểm tản nấm, hình thái nấm
Curvularia lunata
(A) & do ấ C. lunata (C) D Đặ đ ể ả ấ ô ờ PDA
(E) & (F Hì dạ o đ đí ủa o ử đ ợ q a s d ớ kí sơ ổ kí ể ở ậ kí E40 (G M sắ ì dạ o ử q a s d ớ kí ể E40 A E F G B C D
44
Dựa vào sự phát triển, màu sắc của tản nấm trên PD , đặc điểm hình dạng và màu sắc của bào tử, kết quả này tương tự với những ghi nhận của Barrnet và