Chu trình Biến tính Bắt cặp Tổng hợp
1 96oC - 1 phút
2 – 26 96oC - 10 giây 50oC - 5 giây 60oC - 4 phút Bảo quản ở 10oC
- Các sản phẩm sau khi được khuếch đại bằng Big dye kit sẽ được tinh sạch bằng big Dye temination để loại bỏ toàn bộ big dye thừa và đem đọc trên máy giải trình tự gen ABI (Applied Biosystem).
- Các nucleotid trên gen sẽ được biểu hiện bằng các đỉnh (peak) với 4 mầu tương đương với 4 loại nucleotid A,T,G,C.
2.5.5.5. Phương pháp phân tích kết quả
- So sánh trình tự gen của bệnh nhân với trình tự gen chuẩn của Gen Bank (National center for biotechnology information, NCBI) NG_009009.1
bằng phần mềm CLC.
- So sánh trình tự các acid amin của bệnh nhân với trình tự acid amin chuẩn của Genebank NP_000312.2 bằng phần mềm Blast của NCBI.
2.6. Xử lý kết quả
Các số liệu được nhập bằng phần mềm SPSS 16.0. Tất cả số liệu và kết quả nghiên cứu được xử lý theo phương pháp thống kê y học, phân tích thóng kê mơ tả, so sánh, tính các giá trị trung bình, tỷ lệ phần trăm (%), phân tích một số mối tương quan.
2.7. Vấn đề đạo đức trong nghiên cứu
- Đề tài tuân thủ chặt chẽ theo đạo đức nghiên cứu Y học. Bệnh nhân và
gia đình hồn tồn tự nguyện tham gia vào nghiên cứu: có sự chấp thuận của bố mẹ bệnh nhân.
- Bệnh nhân và gia đình có thể rút khỏi nghiên cứu khi không muốn tham gia tiếp. Gia đình bệnh nhân sẽ được thơng báo kết quả xác định vị trí đột biến gen thơng qua bác sĩ điều trị, đồng thời được giải thích và tư vấn di truyền, về kết quả và tiên lượng, theo dõi điều trị.
- Bệnh nhân có trách nhiệm cung cấp đầy đủ các thông tin liên quan đến tình hình bệnh tật của mình và các thơng tin này sẽ được đảm bảo bí mật.
- Các xét nghiệm phân tích gen chỉ thực hiện khi có sự đồng ý của bố mẹ bệnh nhân.
- Nghiên cứu được tiến hành hồn tồn vì mục đích khoa học, khơng vì bất kỳ mục đích nào khác.
2.8. QUY TRÌNH NGHIÊN CỨU
43 Bệnh nhân được chẩn đốn xác định UNBVM
Mơ tả đặc diểm lâm sàng và cận lâm sàng
Phân tích xác định đột biến gen RB1
Bệnh nhân có đột biến gen RB1
CHƯƠNG 3
KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
3.1. Một số đặc điểm lâm sàng và cận lâm sàng
3.1.1. Đặc điểm lâm sàng
3.1.1.1. Phân bố bệnh nhân theo tuổi phát hiện bệnh
Tuổi phát hiện bệnh là tuổi bệnh nhân đi khám và được chẩn đoán xác định UNBVM được tính bằng số tháng.