- Nhiệt độ nóng chảy; 110112 °c.
3.1.2. Tổng hợp câc dẫn chất II-VI: * Sơ đồ chung:
* Sơ đồ chung:
Acyl hoâ -OH của DHA bằng câc tâc nhđn acyl clorid khâc nhau để tạo ra câc ester dự kiến. Sơ đồ phản ứng như sau:
CH3 CH3
0
-C- -R
DHA
Với mong muốn tìm được điều kiện tốt nhất để thực hiện phản ứng acyl giữa DHA với câc acyl clorid chúng tôi tiến hănh khảo sât câc điều kiện phản ứng đó.
Do câc tâc nhđn acyl clorid có tính chất rất giống nhau nín chúng tôi chỉ khảo sât đại diện phản ứng giữa DHA với lauroyl clorid lăm cơ sở để thực hiện câc phản ứng acyl hoâ giữa DHA với câc acyl clorid còn lại. Việc khảo sât điều kiện thực hiện phản ứng nhằm mục đích chọn ra được một điều kiện phản ứng tối ưu. Qua đó khi thực hiện phản ứng sẽ đảm bảo được sử dụng tiết kiệm hoâ chất, dung môi mă vẫn thu được hiệu suất cao nhất, Câc điều kiện chúng tôi khảo sât lă:
a) Tỷ lí mol siữa lauroyl clorid vă DHA tham sia phản ứns:
Theo lý thuyết về phản ứng giữa DHA vă câc tâc nhđn acyl clorid thì tỷ lệ 1:1 lă đủ để phản ứng hoăn toăn. Nhưng trín thực tế phản ứng khó có thể đạt được hiệu suất 100%. Nguyín nhđn có thể do câc acyl clorid dễ bị phđn huỷ trong môi trường nước, trong khi đó câc dung môi sử dụng lại rất khó loại nước hoăn toăn được. Để đạt được hiệu suất cao, người ta thường cho dư một trong hai chất. Tiíu chí để chọn ra một chất dư trong phản ứng thường lă rẻ tiền, dễ kiếm vă dễ tâch loại sau phản ứng. Vă câc tâc nhđn acyl clorid có đủ câc tiíu chí đó. Vì vậy chúng tôi lấy dư lauroyl clorid, thực hiện 4 phản ứng với tỷ lệ mol lauroyl clorid vă DHA khâc nhau trong thời gian 24 giờ (để đảm bảo lượng sản phẩm tạo ra lă nhiều nhất). Câc phản ứng được tiến hănh trong cùng một điều kiện. Chiết tâch bằng câc hoâ chất, dung môi thích hợp. Chạy sắc ký cột silica gel thu được sản phẩm tinh khiết rồi tính hiệu suất phản ứng. Kết quả thu được thể hiện ở bảng dưới đđy:
DHA (mmol) Lauroyl clorid (mmol) Tỷ lệ lauroyl clorid/ DHA Hiệu suất (%) 2 3 1,5/1 51,5 2 4 2/1 55,7 2 6 3/1 67,4 2 8 4/1 66,3
Bảng 3: Mối liín quan tỷ lệ mol câc chất tham gia phản ứng với hiệu suất.
Qua bảng trín ta thấy rằng tỷ lệ mol lauroyl clorid/DHA = 3/1 cho hiệu suất cao nhất. Vì vậy chúng tôi chọn tỷ lệ 3/1 để tiến hănh phản ứng giữa lauroyl clorid với DHA để khảo sât thời gian phản ứng cho hiệu suất cao nhất.
b) Khảo sât thời sian tiến hănh phản ứns:
sđn |.iliảm
DHA
Sau 30’ Ih 2h 3h 4h
Hình 4: Hình ảnh sắc ký đồ tại câc thòi điểm khâc nhau.
Tiến hănh phản ứng tổng hợp lauroyl clorid vód DHA theo tỷ lệ mol lă 3/1. Chấm sắc ký lớp mỏng với lượng dung dịch phản ứng như nhau tại câc thời điểm 30 phút đầu, Ih, 2h, 3h, 4h trín cùng một bản mỏng. Khai triển sắc ký trong hệ dung môi n-hexan : aceton với tỷ lệ 10:1. Do DHA vă sản phẩm acyl hoâ không hiện mău dưới đỉn tử ngoại nín bản mỏng được nhúng văo dung dịch acid sulfuric 10% rồi đốt nóng ở 105 °c trong 10 phút để hiện vết. So sânh lượng sản phẩm tạo ra ở câc thời điểm đó dựa văo độ đậm nhạt của câc vết để tìm ra thời điểm phản ứng cho hiệu suất cao nhất. Kết quả sắc ký lớp mỏng thu được như hình 4.
Kết quả cho thấy ở thời điểm 3 giờ vă 4 giờ vết sản phẩm lă đậm nhất. Tức lă khi đó lượng sản phẩm tạo ra lă lớn nhất. So sânh độ đậm của vết giữa hai thời điểm 3 giờ vă 4 giờ thấy rằng lượng sản phẩm tạo ra không thay đổi, vì vậy có thể coi thòi điểm sau 3 giờ phản ứng xảy ra với hiệu suất cao nhất.
Thông qua sự khảo sât hai điều kiện trín đđy chúng tôi đê lựa chọn tỷ lệ acyl clorid/DHA = 3/1 vă khoảng thời gian 3 giờ để tiến hănh câc phản ứng acyl hoâ khâc giữa DHA vă câc tâc nhđn acyl clorid.
3.I.2.I. Tổng hợp lip-h exan oyl dihydroartemisinỉn (II):
* Sơ đồ phản ứns:
* Duns cu:
Bình cầu 50ml, mây khuấy từ, bình gạn, micropipet, cột chạy sắc ký, bình chạy sắc ký lớp mỏng, mây cất quay chđn không.
* Tiến hănh:
Cđn 0,57 g DHA (2 mmol) cho văo bình cầu, cho DCM văo vă khuấy từ cho đến khi tan hết DHA. Lăm lạnh bình phản ứng bằng nước đâ, cho 0,3 ml pyridin, để khoảng 15 phút rồi nhỏ từ từ 0,8 ml hexanoyl clorid (6 mmol) văo. Để phản ứng trong thời gian 3 giờ.
Chiết tâch: hỗn hợp phản ứng được chuyển sang bình chiết, thím 30 ml DCM rồi lắc với dung dịch acid hydrocloric 10% ba lần, mỗi lần 30 ml, gạn lấy lớp dưới. Dịch gạn lại lắc 3 lần với dung dịch NaHCƠ3 bêo hoă, mỗi lần 30 ml, để phđn lớp rồi tâch lấy lớp dưới. Dịch thu được lắc với 30 ml nước muối bêo hoă, để phđn lớp vă gạn lấy lớp DCM ở dưới. Lớp dịch năy được lăm khan bằng câch cho đi qua natri sulfat khan đê chuẩn bị sẵn trín phễu. Dịch đê được lăm khan sẽ được cất quay chđn không để thu được sản phẩm thô.
Chuẩn bị cột sắc ký silica gel: nhồi cột silica gel cao 35 cm, đường kính 1 cm, khối lượng silica gel lă 21 g bằng hệ dung môi n-hexan vă aceton có tỷ lệ lă 40:1.
Chạy sắc kỷ cột: hoă sản phẩm thô trong một lượng tối thiểu dung môi aceton vă rót nhẹ nhăng lín trín cột sao cho không lăm xâo trộn lớp silica gel. Dùng hệ dung môi n-hexan : aceton (16:1) lăm pha động để triển khai sắc ký cột. Mở van cho dịch chảy ra khỏi cột vă thu hồi văo câc ống nghiệm với thể tích lă 1,5-2 ml.
Sắc ký lớp mỏng: chấm sắc ký lớp mỏng câc dung dịch trong ống nghiệm trín, chạy sắc ký ở hệ dung môi n-hexan : aceton (8:1). Sau một thời gian lấy bản mỏng ra, để bay hơi hết dung môi hữu cơ.
Phât hiện vết chất trín SKLM: nhúng văo dung dịch acid sulfuric 10%. Đốt bản mỏng ở nhiệt độ 105 trong khoảng 10 phút, chất hấp phụ trín bản mỏng sẽ chây vă tạo thănh vết đen dễ thấy.
Chọn ra những ống nghiệm có duy nhất một vết chất duy nhất trín sắc ký lớp mỏng với Rf = 0,58 để cất quay chđn không. Sản phẩm tinh khiết thu được dạng dầu đặc, hơi văng vă có khối lượng lă 0,50 g.
* Kết quả:
- Hiệu suất: 65%.
- Độ tan: 12P-hexanoyl dihydroartemisinin không tan trong nước, tan trong ethanol, methanol, tan tốt trong DCM, aceton vă cloroform.
- Rf: với hệ dung môi khai triển n-hexan : aceton (8:1) thì Rf của nó lă 0,58.
3.I.2.2. Tổng hợp 12ß-octanoyl dỉhydroartemỉsinin (III): * Sơ đồ phản ứne: HƯ ÌH3 ÔH DHA H3C - C H3 ^ ÌH3 + HCI CH3 ( K / ( C H 2 ) 6 — CH3 Ö III * Duns cu:
Bình cầu 50 ml, mây khuấy từ, bình gạn, micropipet, cột chạy sắc ký, bình chạy sắc ký lớp mỏng, mây cất quay chđn không.
* Tiến hănh:
Cđn 0,57 g DHA (2 mmol) cho văo bình cầu 50 ml, cho DCM văo vă khuấy từ cho đến khi tan hết DHA. Lăm lạnh bình phản ứng bằng nước đâ, cho 0,3 ml pyridin, để khoảng 15 phút rồi cho từ từ 1,0 ml octanoyl clorid (6 mmol) văo. Sau khi phản ứng đủ thời gian 3 giờ, tiến hănh câc bước chiết tâch, chuẩn bị cột sắc ký, chạy sắc ký cột, SKLM, phât hiện vết chất như 3.1.2.1. Điểm khâc trong câc bước đó lă cột sắc ký được nhồi bằng silica gel trong hệ dung môi n-hexan : aceton có tỷ lệ 30:1, hệ dung môi dùng triển khai sắc ký cột lă n-hexan : aceton có tỷ lệ 15:1 vă hệ dung môi chạy SKLM lă n-hexan : aceton có tỷ lệ 10:1. Thu hồi câc ống nghiệm mă trín sắc ký đồ cho một vết chất duy nhất với Rf = 0,52 để cất quay chđn không loại dung môi. Sản phẩm tinh khiết thu được thể lỏng, hơi văng vă có khối lượng lă 0,50 g.
* Kết quả:
- Độ tan: 12P-octanoyl dihydroartemisinin không tan trong nước, tan trong ethanol, methanol, tan tốt trong DCM, aceton vă cloroform.
- Rf: với hệ dung môi khai triển n-hexan : aceton (10:1) thì Rf của nó lă 0,52.
3.I.2.3. Tổng hợp 12P-nonanoyl dihydroartemisiniĩi (IV):
* Sơ đồ phản ứns:
CH3
+C1— C----(CH2)7—