(Dương Thanh Liêm, 2004)
huy t tương. Trong huy t tương hơn 90% ñ!c t % d ng liên k t v i albumin (Wong, 1980). Ngoàu ra AF còn liên k t v i thành ph n lysin c a albumin huy t tương t o thành d ng Shiff base (Sabbioni, 1987; trích d n Lê Anh Ph ng, 2002).
• Phân b : Sau khi qua h th ng tĩnh m ch c&a, AF t p trung ch y u % gan.
Đi u này có th do: tính th m cao c a màng t bào gan, ho t đ!ng chuy n hố cao và
kh năng t o các liên k t c!ng hố tr v i các đ i phân t& (Wilson, 1985).
F lồi nhai l i th n có th ch a hàm lư ng AF cao nh t và c d ng hydroxyl hố c a đ!c t là AFM1 (Stublefield, 1983; trích d n Lê Anh Ph ng, 2001).
Trên loài c m m c AF cao nh t thư ng th y % m , gan, th n c a gà th t, gà ñC
ñư c cho ăn kh"u ph n ăn có 0,5-3,3ppb AFB1 trong 18-35 ngày (Wolzak, 1996; trích d n Lê Anh Ph ng, 2001).
F cá khơng th y có AFB1 và các ch t bi n dư ng c a nó trong th t c a cá khi cho ăn th c ăn nhi m AFB1 mà có nhi u nh t % gan (trích d n Lê Anh Ph ng, 2001).
• Chuy n hố: Lư ng AF ăn vào thư ng ñư c cơ th bài th i ho2c bi n ñ@i % gan qua h th ng mono oxy hoá (MFO), Glutathione (GSH) ho2c bài ti t qua m t. Do mono-oxygenase trong cytochrom P450, AFB1 đư c ho t hố thành AFB1-epoxide có
đ!c tính (Neal, 1998; trích d n Bùi Ng c Trang, 2005).
Theo Cambell (1976), các chuy n hố % gan đóng vai trị ch y u trong chuy n hoá AFB1 t o ra các ch t có đ!c tính th p hơn. Cơ ch gi i ñ!c ch y u c a gan là t o k t h p AFB1-epoxide v i GSH, ho2c chuy n đ@i AFB1-epoxide thành dihydrodiol, ngồi ra các enzyme có Nicotamide Adenine Dinucleotide Phosphate (NADP) có th kh& AFB1, AFB2 thành aflatoxicol và cyclopentanol có ñ!c tính th p hơn (trích d n Tr n
Th B o Trân, 2003)
• Bài th i: AF đư c chuy n hố và bài xu t ch y u qua m t, nư c ti u, phân v i t l 70:15:15. Ngoài ra, đ!c t này cịn đư c bài th i v i s lư ng ít qua s a ho2c tr ng.
B2ng 2.3. T n dư Aflatoxin B1 trong mô bào c a heo
(Johanna Fink-Gemmels, 1989, Tài li u t@ng h p, trích d n Đ u Ng c Hào và Lê Th Ng c Di p, 2003)
T n dư (ppb) Hàm lư ng AFB1
trong th c ăn Ch t t n dư Gan Th n Cơ
100-400ppb AFB1 AFM1 0,3-2,7 0,2-2 0,3 0,1-0,2 0,2 0,04-0,4 250-417ppb AFB1 AFM1 51-92 3-4 10-50 3-6 4000ppb AFB1 AFM1 6 3 0,2 1 0,1 0,05 662ppb AFB1 0,07 0,27 0,07
AFB1 b nhi m trong th c ăn t nhiên AFB1 AFB1 AFM1 Aflatoxicol 0,1 0,15-0,26 0,51-1,7 0,1-0,2 0,6 1,1-2,6 0,4
2.2.3.4 Tác h;i c0a aflatoxin ñ#i v i gia súc và con ngư7i
• Nhi m đ!c c p tính
Ít g2p trong t nhiên, ch x y ra khi ñ!ng v t ăn ph i m!t lư ng l n ñ!c t và ñư c th hi n b ng li u gây ch t LD50. Thư ng thú non m n c m hơn thú trư%ng thành, các loài gia c m m n c m hơn gia súc (Lê Anh Ph ng, 2001)
B2ng 2.4. LD50 c a aflatoxin B1 trên m!t s lồi đ!ng v t (Linsell C.A, 1997; trích
d n Lê Anh Ph ng, 1996) Lồi đ!ng v t LD50 (mg/kg th tr ng) Lồi đ!ng v t LD50 (mg/kg th tr ng) Th? Mèo Heo Cá h i Chó C#u 0,3 0,55 0,6 0,8 0,5-1 1-2 Chu!t lang Kh đ u chó Gà Chu!t c ng cái Chu!t c ng ñ c Chu!t b ch 1,4-2 2 6,3 5,5-7,2 17,9 9
Cơ ch và con ñư ng gây đ!c c p tính c a aflatoxin: đ có th gây đ!c đ i v i t bào gan cũng như t o kh i u, AF ph i tr i qua m!t quá trình bi n đ@i sinh h c ph c t p, t o thành 2,3-dihydrodiol % trong gan (AFB1-dhd). Theo gi thi t c a Neal và ctv (1981), h p ch t này ñư c th& nghi m v kh năng c ch t@ng h p protein trong ng nghi m. Nguyên nhân gây ch t là do gan b huJ ho i r t nhanh (necrosis). S m n c m c a các lồi v t ni khác nhau là do q trình chuy n hố này. F đây nhóm dialdehyd ph n ng v i nhóm amin c a protein ñ t o thành ki m ship (shiff’s base). Các ki m ship có th c ch sinh t@ng h p AND và gây ra nhi m đ!c c p tính (Đ u Ng c Hào và Lê Th Ng c Di p, 2003).
Tri u ch ng: kém ăn, u ng nư c nhi u, còi c c, rũ, tiêu ch y và có các tri u ch ng th n kinh như n m li t, co gi t r i ch t sau m!t th i gian ng*n thư ng dư i 72 gi (Lê Anh Ph ng, 2001).
B nh tích: ch y u trên gan như gan sưng c p tính, gan nh t màu, ho i t&, tăng sinh các ng d n m t nh?. Ngồi ra cịn có th n viêm, ti u c u th n sưng, thối hóa
• Nhi m đ!c mãn tính
Trên gia súc gia c m thư ng ch g2p nhi n ñ!c mãn ho2c bán c p tính. Do thú tiêu th m!t lư ng th p AF nhưng th i gian ti p xúc kéo dài.
Tri u ch ng: thú kém ăn và ch m l n, đơi khi sút cân, gi m s c s n xu t.
B nh tích: gan t huy t, xu t huy t, ho i t& v i ñ2c trưng tăng sinh niêm m c ng d n m t, thoái hoá m t bào gan, th m nhi m lympho bào vào khu v c quanh c&a. Nhi m đ!c kéo dài có th th y th n t huy t, đơi khi cũng có viêm ru!t xu t
huy t, xu t hi n ung thư gan (Lê Anh Ph ng, 1996).
M c AF thú có th ch u ñ ng đư c mà khơng gây bi n ñ@i b nh lý và không
nh hư%ng ñ n năng su t trong th c ăn h'n h p: Th c ăn gia c m con <50ppb AFB1 Th c ăn gia c m l n <100ppb AFB1 Th c ăn heo con <50ppb AFB1 Th c ăn heo l n <200ppb AFB1 Th c ăn trâu bò <300ppb AFB1
(Merck manual, 1991; trích d n Phan Th Thu Phương, 2007)
• Gây c ch mi n d ch
AF làm con v t kém ăn, gi m t@ng h p protein d n t i gi m t@ng h p globulin trong máu (Adinara Yanaiah và ctv, 1993). AFB1 làm gi m kh năng th c bào c a các t bào ñơn nhân ngo i vi (Thakton và ctv, 1974) và làm gi m s t o lympho bào t# tuJ xương (Ghanhg, 1979). Nguyên nhân ch y u d n ñ n suy gi m mi n d ch % gà là do s t@n thương các cơ quan như teo túi Fabricius, teo tuy n c, teo lách (trích d n Tr n B*c Vi, 2005).
Cơ th suy gi m s c đ kháng cịn do gi m protein huy t thanh trong đó
albumin b nh hư%ng hơn c . α, β, γ globulin ñ u gi m, IgG b nh hư%ng hơn IgM. Liporotein, carotenoid, cholesterol, triglycerid, uric acid, calci, lactate cũng b gi m (Đ u Ng c Hào và Lê Th Ng c Di p, 2003).
• Gây ung thư
AF ñã ñư c nghiên c u và ch ng minh là tác nhân gây ung thư % ñ!ng v t thí nghi m và v t ni. B ng ch ng này ñư c 2 t@ ch c thu!c Trung tâm nghiên c u ung
Cơ ch g*n AF vào chu'i AND: ñ gây ñư c ung thư, AF ph i xâm nh p ñư c vào các gen di truy n, làm thay ñ@i m t mã di truy n, t o ra s phân chia b t bình
thư ng c a t bào. Cơ ch gây kh i u chưa hồn tồn đư c bi t đ n, song có th th y vai trò quan tr ng c a 2,3 epoxide như m!t nhân t tác đ!ng. Như v y, nó ph i đư c hình thành trong q trình chuy n hố c a cơ th , c th s chuy n hoá AFB1 thành d ng AF-dhd, ho t ch t này chuy n hoá nhanh sang d ng 2,3 epoxide. Quá trình liên k t gi a AFB1 v i 2,3 epoxide x y ra % v trí 7N Guanin c a chu'i AND. Đây là m!t liên k t đ ng hố tr r t b n v ng, k t qu d n ñ n làm c ch ho2c sai l ch sinh t@ng h p protein do “sao chép” sai l ch c a AND (Cliford, 1967; trích d n Đ u Ng c Hào và Lê Th Ng c Di p, 2003).
2.2.3.5 Đ' phòng và x9 lý th)c ăn nhi1m aflatoxin
Phòng
Theo Dương Thanh Liêm (2004) ñ ñ phòng n m m c phát tri n c n có các bi n pháp sau:
- Trư c khi thu ho ch: tránh thu ho ch vào mùa "m ư t, ch n gi ng t t hay phun thu c tr# sâu, thu c di t n m, v sinh ñ ng ru!ng ch ng úng, kh& chua,…
- Sau khi thu ho ch: s y k nguyên li u trư c khi vào kho d tr . Ki m tra, kh ng ch ñ! "m và nhi t ñ! thích h p trong vi c d tr nguyên li u. Ki m sốt và tr# kh&
cơn trùng, sâu m t trong kho. S& d ng hố ch t đ ch ng n m m c như: acid propionic, acid sorbic, Na2CO3, aureoffugin, thiramtan, bordeaux…
X& lý th c ăn nhi m n m m c
• Bi n pháp v t lý: lo i b? ph n nhi m m c, r&a b ng nư c, x& lý nhi t, chi u x (tia X, tia gamma, tia UV), ly trích b ng dung môi, dùng các ch t h p ph đ!c t .
• Bi n pháp hố h c: s& d ng m!t s ch t có tính acid, ki m (ammonia, sút), ch t có tính oxy hố (peroxyd hydrogen, ozon), các ch t kh& (bisulfit), các ch t có chlor, các mu i…
• Bi n pháp sinh v t h c: có th dùng m!t s vi khu"n có kh năng phân gi i AF như Flavobacterium aurantiacum, Bacillus subtilis… n m men sacharomyces cerevisiae (Đ u Ng c Hào, 2003)
• Các phương pháp khác: c i ti n kh"u ph n, ph i h p các h t nhi m v i h t lành sao cho ñ!c t n m ñưa vào cơ th % m c th p hơn m c t i thi u gây ñ!c cho thú,
b@ sung thêm methionine, vitamin nhóm B…đ tăng kh năng gi i ñ!c c a cơ th (Lê Anh Ph ng, 2002).
2.2.3.6 Nh8ng quy ñ%nh v' m)c aflatoxin ñư.c phép trên th)c ăn h=n h.p cho gia súc
B2ng 2.5. Quy ñnh v m c ñ! t i ña ñ!c t aflatoxin trong th a ăn h'n h p
Lo;i v6t ni AF B1 (µg/kg) AF t>ng s# (µg/kg)
Gà con t# 1-28 ngày tu@i 20 30
Nhóm gà cịn l i 30 50
V t con t# 1-28 ngày tu@i Khơng có 10
Nhóm v t cịn l i 10 20
L n con t# 1-28 ngày tu@i 10 30
Nhóm l n cịn l i 100 200
Bị ni l y s a 20 50
(Quy t ñ nh s 10/2001/QĐ-BNN c a B! Nông nghi p và Phát tri n Nông thơn, 2001)
B2ng 2.6. M c đ! t i đa AF ñư c phép % m!t s nư c trên th gi i (Dương Thanh Liêm, 2004)
Qu#c gia quy đ%nh Lo;i nơng s2n M)c quy ñ%nh t#i ña AF (ppb)
H t ngũ c c 5
Pháp
H t có d u 1
M Th c ph"m, th c ăn chăn nuôi 20-25 Nh t B n Khô d u ph!ng cho th c ăn chăn nuôi 1000
Malaysia T t c các lo i th c ph"m 0
2.3. LƯ?C DUY T M T S CƠNG TRÌNH NGHIÊN C U CĨ LIÊN QUAN
Tr n Minh Sơn (2005) phân tích trên 56 m u th t th t bò, heo và gà t i Tp HCM t n dư clenbuterol chi m 46,30% v i hàm lư ng bi n ñ!ng t# 0,13-2,46 ppb.
Lưu Th Tuy t Âu (2006) phân tích 150 m u th t heo trên ña bàn Tp HCM, k t qu t l t n dư clenbuterol là 23,33%.
Phan Th Nhã Tú (2006) phân tích 65 m u gan và 65 m u th t heo trên heo trên
ñ a bàn Tp HCM t l m u gan có t n dư β-agonist là 24,61%, th t là 18,46%.
Năm 1992 và 1993 k t qu c a chương trình đi u tra t n dư β-agonist % các
qu c gia Châu Âu có kho ng 30.000 con thú t# các qu c gia thành viên ñư c ki m tra t n dư β-agonist. K t qu m u dương tính l y t# các tr i hay lị m' bi n đ!ng t# 0-7%.
F Belgium 1993 t l các m u dương tính v i β-agonist l y ng u nhiên t# các CSCN là
17,5%. F Netherland t# năm 1993-1995 có hơn 250 CSCN ñư c ñi u tra và hơn 4000 m u nư c ti u, hơn 400 m u TĂGS ñư c xét nghi m. Su t giai ño n này t l ph n
trăm m u nư c ti u dương tính gi m t# 30% xu ng còn <5%, và t l m u dương tính TĂGS kho ng 11-15%.
F B Đào Nha gi a tháng 1/1991 và 31/12/1993 nư c ti u c a bị đư c thu th p đ phân tích t n dư β2-adrenergic agonist. Trong 1031 m u 24 m u có ch a
clenbuterol và 1 m u có salbutamol.
Bridge và ctv (2001) kh o sát tình hình t n dư β-agonist trên th c ph"m có
ngu n g c đ!ng v t t i Anh ñã phát hi n 0,94% (1/107) m u th n bị có t n dư β-
agonist.
Theo k t qu ñi u tra trên th c ăn gia súc có ngu n g c t# Châu Âu. Năm 2003 có 12 m u phát hi n th y có β-agonist trên t@ng s 806525 m u. Và năm 2004 là 45
m u trên t@ng 807000 m u trên bị trong đó có 1 m u salbutamol, 1 m u isoxsuprine còn l i là clenbuterol. F heo có 13 m u có β-agonist năm 2003, 11 m u năm 2004.
Thêm vào đó 1 m u dương tính v i salbutamol đư c tìm th y trên gia c m và 4 m u trên c#u.
Đ2ng Th Duyên (2005) kh o sát tình hình nhi m aflatoxin B1 trong th c ăn
h'n h p c a Heo và gà % t nh Bà R a-Vũng Tàu: t l phát hi n AFB1 67,9%, trong đó t l nhi m trên th c ăn cho heo th t là 65%.
L i Ki u Oanh (2003) kh o sát tình hình nhi m aflatoxin B1 trên th c ăn h'n
h p cho heo t i Thành ph H Chí Minh: t l phát hi n AFB1 là 82,1%, trong đó t l nhi m trên th c ăn cho heo th t là 96,1%.
H Hoa Phương Th o (2006) kh o sát tình hình nhi m aflatoxin B1 trong th c
ăn h'n h p c a Heo t i t nh Bà R a-Vũng Tàu: t l phát hi n AFB1 là 67%, trong đó t
l nhi m trên th c ăn cho heo th t là 73,5%.
Tr n Minh Đ c (2002) kh o sát tình hình nhi m aflatoxin B1 trong th c ăn h'n h p c a Heo t i th xã Cao Lãnh, t nh Đ ng Tháp: t l phát hi n AFB1 là 100%.
Lê Anh Ph ng và ctv (1999) kh o sát tình hình nhi m aflatoxin trên th c ăn h'n h p cho heo t i Tp HCM năm 1998: t l nhi m AFB1 là 100%.
Chương 3
N I DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C U
3.1 Th7i gian và ñ%a ñi<m 3.1.1 Th7i gian
Th i gian th c hi n ñ tài: t# ngày 22/01/2008 ñ n 15/06/2008.
3.1.2 Đ%a ñi<m
Nơi l y m u: 30 cơ s% chăn nuôi heo th t trên đa bàn thành ph H Chí Minh có quy mơ đàn heo th t trên 100 con.
Nơi xét nghi m: - Phòng xét nghi m B! mơn Hố Lý, Tr m Ch"n đốn – Xét nghi m và Đi u tr thu!c Chi c c Thú Y Thành ph H Chí Minh.
- Trung tâm ñào t o và phát tri n s*c ký (79 Trương Đ nh Q1).
3.2 Đ#i tư.ng kh2o sát
Nư c ti u heo th t t i các cơ s% chăn ni đư c ch n ñ kh o sát ch tiêu t n dư. Th c ăn h'n h p cho heo th t t i các cơ s% chăn nuôi (t i kho và t i máng).
3.3 N"i dung kh2o sát
N!i dung 1: Đánh giá tình hình s& d ng nhóm β-agonist và diethylstilbetrol trong th c ăn heo th t.
N!i dung 2: Kh o sát tình hình nhi m đ!c t aflatoxin trong th c ăn gia súc. Ch tiêu kh o sát:
- T l m u th c ăn và nư c ti u t n dư DES. - T l m u th c ăn và nư c ti u t n dư β-agonist.
- T l m u th c ăn và nư c ti u t n dư β-agonist theo ngu n g c m u. - T l các T l các CSCN s& d ng β-agonist theo mơ hình tr i.
- Hàm lư ng các ch t thu!c nhóm β-agonist trong các m u dương tính. - T l nhi m aflatoxin trong th c ăn h'n h p cho heo th t.
- M c nhi m AFB1 trên th c ăn t tr!n và TĂHH heo. - Hàm lư ng aflatoxin trong các m u vi ph m.
3.4 Hoá ch-t
+ Beta – agonist ELISA kit (Bioo Scientific USA)
+ Diethylstilbetrol (DES) ELISA kit (Bioo Scientific USA) + Florisil 100-200 mesh, lo i dùng cho s*c ký c!t