- Đưa cây invitro ra điều kiện bên ngoài: Để tìm giá thể thích hợp cho cây con
A- Chồi đỉnh của cây mầm vô trùng B Đoạn chồi non của cây hạt 2 năm tuổi.
3.3. ảnh hưởng của môi trường nuôi cấy đến hệ số nhân và sinh trưởng của
chồi thơng trong giai đoạn nhân chồi
Trong q trình nhân giống in vitro, việc bổ sung một số chất điều hồ sinh trưởng vào mơi trường ni cấy có vai trị quan trọng vì các mơ tách rời khơng có khả năng tổng hợp các chất này [19]. Mỗi một loại chất chất điều hồ sinh trưởng
có hiệu quả với mỗi lồi cây và các giai đoạn nuôi cấy khác nhau ở các nồng độ khác nhau. Việc phối hợp giữa các chất chất điều hoà sinh trưởng tỏ ra hiệu quả hơn so với khi chỉ bổ sung độc lập. Những nghiên cứu của Miller và Skooog (1963) cho thấy tác động phối hợp của auxin và cytokinin có tác dụng quyết định đến sự phát triển và phát sinh hình thái của tế bào và mơ. Tỷ lệ auxin/cytokinin cao thì thích hợp cho hình thành rễ, thấp sẽ kích thích q trình phát sinh chồi. Nếu tỷ lệ này ở mức độ cân bằng thì thuận lợi cho phát triển mô sẹo.
Mục tiêu của giai đoạn này là tìm được mơi trường thích hợp cho khả năng nhân chồi với số lượng lớn. Tuy nhiên, trên thực tế các môi trường cho hệ số nhân chồi cao thường có chất lượng chồi kém về chiều cao, hình dạng, màu sắc và thường xuất hiện nhiều mô sẹo. Việc lựa chọn môi trường nhân chồi tối ưu là căn cứ vào hệ số nhân và các chỉ tiêu về sinh trưởng và hình thái của chồi. Đây là giai đoạn quan trọng, quyết định hiệu quả và tốc độ của quá trình nhân giống in vitro.
Trong phạm vi nghiên cứu, chúng tôi lần lượt tiến hành nghiên cứu tác dụng của một số chất điều hoà sinh trưởng riêng lẻ hoặc phối hợp lên khả năng nhân và phát triển của chồi thơng nhằm tìm ra mơi trường tối ưu cho nhân giống thông.
Các cụm chồi non đã qua 5 – 7 lần cấy chuyển, có kích thước và chất lượng tương đối đồng đều được cấy trên các mơi trường nghiên cứu có bổ sung các chất điều hồ sinh trưởng theo từng nội dung và mục đích nghiên cứu. Sau 8 tuần nuôi cấy, tiến hành quan sát và đo đếm các chỉ tiêu theo dõi của tất cả các chồi.