CHƯƠNG 3 NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.6. Phương pháp kiểm tra định tính enzyme amylase và protease
3.6.1. Kiểm tra định tính enzyme amylase
Hoạt tính enzyme phân giải tinh bột do vi sinh vật tiết ra được kiểm tra trên môi trường thạch - tinh bột theo phương pháp của Archana Lal và Naowarat Cheeptham (2013): một khuẩn lạc riêng biệt được cấy ria hoặc cấy điểm trên mặt thạch đĩa; thành phần môi trường được trình bày ở bảng 3.2. Các đĩa cấy được ủ ở 37oC trong 24 - 48 giờ (hoặc lâu hơn, 3 - 5 ngày).
Bảng 3.2. Thành phần môi trường thạch - tinh bột
Thành phần Đơn vị Hàm lượng
Cao thịt bò g/L 3 Tinh bột hòa tan g/L 10
Agar g/L 12
Nước cất L 1,0
Kết thúc quá trình ủ, mặt thạch đĩa được nhuộm với dung dịch iodine. Sự kết hợp giữa tinh bột và iodine làm xuất hiện màu xanh đen. Nếu xung quanh khuẩn lạc có vịng phân giải màu sáng chứng tỏ có sự thủy phân tinh bột bởi vi sinh vật do sự tiết enzyme ngoại bào.
3.6.2. Kiểm tra hoạt tính enzyme protease
Hoạt tính enzyme phân giải protein do vi sinh vật tiết ra được kiểm tra trên môi trường thạch đĩa BCG (Bromocresol green reagent) - casein theo phương pháp của Ponnuswamy Vijayaraghavan và Samuel Gnana Prakash Vincent (2013): Vi khuẩn được cấy điểm trên môi trường thạch đĩa với các thành phần như ở bảng 3.3. Các đĩa cấy được ủ ở 37oC trong 48 giờ. Sự phân giải protein sẽ tạo ra vòng phân giải màu sáng trên thạch đĩa.
Bảng 3.3. Thành phần môi trường thạch đĩa BCG - casein
Thành phần Đơn vị Hàm lượng Cao thịt bò g/L 1,5 Cao nấm men g/L 1,5 Natri clorua g/L 5,0 Agar g/L 15 Casein g/L 10 BCG % (w/v) 0,0015 Nước cất L 1,0 pH = 7