Mỗi nghiệm thức bố trí 8 chuột
2.3.1. Phương pháp chăm sóc chuột
Chuột nhắt trắng đực (Mus musculus var. albino) 5 tuần tuổi được mua từ
Viện Pasteur Thành phố Hồ Chí Minh. Chuột được ni ổn định ở điều kiện phịng thí nghiệm trong 2 tuần cho đạt trọng lượng 18 - 22 g (7 tuần tuổi) trước khi tiến hành thí nghiệm.
Điều kiện nuôi: chuột được ni trong lồng kính kích thước 30x19x19 cm3, dưới nền chuồng lót trấu, trên nắp chuồng đậy bằng lưới kẽm (4 con/chuồng); chu kì sáng tối (10 giờ sáng và 14 giờ tối) ở nhiệt độ phịng (27 - 28oC), có độ ẩm từ 76- 80% được ghi nhận bởi máy đo nhiệt kế điện tử đặt trong phòng. Thức ăn cho chuột là viên thức ăn tổng hợp chuyên cho chuột, nước uống là gồm nước sinh hoạt của phịng thí nghiệm. Chuột được cho ăn, bổ sung nước uống vào lúc 8 giờ và 18 giờ hàng ngày. Chuồng nuôi được thay trấu 2-3 ngày/lần tùy vào lượng trấu lót ở mỗi chuồng.
2.3.2. Cơ sở chọn nồng độ chì, dịch ép quả chanh dây và vitamin C thương mại
Cơ sở chọn nồng độ chì:
Kế thừa kết quả nghiên cứu của đề tài cơ sở mã số CS.2019.19.29 [43] cho thấy với nồng độ chì 70 mg/kg thể trọng có ảnh hưởng đến số lượng tế bào máu và cấu trúc gan, thận, lách, nên nồng độ 70 mg/kg thể trọng được chọn để làm mơ hình đánh giá khả năng kháng độc tính chì của dịch ép quả chanh dây.
Cở sở chọn nồng độ dịch ép thịt quả chanh dây:
Căn cứ vào [39] cho thấy acid ascorbic (40 mg/kg thể trọng) giúp tinh hoàn chuột có cấu trúc vi thể bình thường khi bị nhiễm chì; [41] cho thấy với nồng độ 30 mg vitamin C/kg có tác dụng kháng độc tính của chì; của [42] cho thấy nồng độ 27 mg vitamin C/kg có tác dụng kháng độc tính của chì. Sau khi thăm dò thử nghiệm 3 nồng độ vitamin C từ dịch ép chanh dây là 20, 30 và 40 mg/kg thể trọng trên chuột nhắt trắng trong 2 tuần, cùng với trong phạm vi nghiên cứu của đề tài này, chúng tôi chọn 2 nồng độ dịch ép chanh dây để kháo sát: 20 mg và 30 mg mg/kg thể trọng. Ngồi ra, chúng tơi cũng chọn vitamin C thương mại (30 mg/kg thể trọng) để làm đối chứng dương cho thí nghiệm.
2.3.3. Bố trí thí nghiệm
Chuột đạt tiêu chuẩn làm thí nghiệm được phân chia vào các nghiệm thức và đánh dấu theo thứ tự cố định ở đuôi cho từng con ở từng nghiệm thức. Thí nghiệm gồm 48 chuột, chia làm 6 nghiệm thức (8 chuột/nghiệm thức) (Hình 2.3), bao gồm:
Nghiệm thức 1 - Đối chứng (ĐC): chuột cho uống nước máy khử clo bình thường. Nghiệm thức 2 - Đối chứng âm (Pb): chuột được uống nước pha Pb2+ từ chì nitrate với nồng độ 70 mg/kg thể trọng.
Nghiệm thức 3 - Đối chứng dương (VC): chuột được uống nước pha Pb2+ từ chì nitrate với nồng độ 70 mg/kg thể trọng kết hợp với vitamin C thương mại (30 mg/kg thể trọng).
Nghiệm thức 4 (CD): chuột chỉ uống dịch ép chanh dây với nồng độ 30 mg/kg thể trọng và nước sinh hoạt bình thường, khơng uống chì.
Nghiệm thức 5 (PbCD1): chuột uống chì với nồng độ 70 mg/kg thể trọng + dịch ép chanh dây nồng độ 20 mg/kg thể trọng.
Nghiệm thức 6 (PbCD2): chuột uống chì với nồng độ 70 mg/kg thể trọng + dịch ép chanh dây nồng độ 30 mg/kg thể trọng.