Hình 2 .5 Cân trọng lượng chuột trước khi đưa vào các nghiệm thức
Hình 2.11 Hình minh hoạ mẫu ngâm tinh hoàn chuột nhắt trắng
2.3.4.9. Phương pháp xử lí số liệu
Tất cả số liệu của đề tài được xử lí theo các thuật tốn xác suất thống kê trên máy vi tính bằng phần mềm Minitab 18. Phân tích phương sai một yếu tố (One – way Anova). Các số liệu trung bình được trình bày ở dạng 𝑋̅ ± 95 % CI. Mức ý nghĩa được sử dụng để kiểm định sai khác có ý nghĩa các nghiệm thức là 0,05. Phân tích phương sai hai yếu tố (Two – way Anova) về thời gian và nghiệm thức thí nghiệm. Dùng hàm Turkey để kiểm định các số liệu.
Chương 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN
3.1. TÁC DỤNG KHÁNG ĐỘC TÍNH CHÌ CỦA DỊCH ÉP QUẢ CHANH DÂY LÊN ĐỘ TĂNG TRỌNG CỦA CHUỘT
Tổng cộng có 48 chuột được kiểm tra cân nặng trước khi được đưa vào bố trí thí nghiệm nhằm đảm bảo có sự tương động về khối lượng cơ thể. Cân nặng trung bình của chuột đưa vào thí nghiệm đạt 20,61±0,28 g (xem phụ lục mục 1.1). Kết quả bố trí chuột ngẫu nhiên vào các nghiệm thức có sự đồng đều về khối lượng (p = 0,262), (xem phụ lục mục 1.1). Vì thế, điều kiện ban đầu thí nghiệm của các chuột có sự tương đương về mặt cân nặng, điều này giúp cho sự đánh giá các kết quả thí nghiệm có độ tin cậy cao hơn.
3.1.1. Độ tăng trọng trung bình của chuột tại các nghiệm thức khảo sát sau mỗi 4 tuần thí nghiệm
Hình 3.1. Biểu đồ thể hiện độ tăng trọng trung bình của chuột sau mỗi 4 tuần ở các nghiệm thức
Từ phụ lục mục 1.2 và hình 3.1; ta có độ tăng trọng trung bình của các nghiệm thức khảo sát như sau:
Sau 4 tuần thí nghiệm, chuột ở các nghiệm thức Pb có độ tăng trọng thấp nhất (5,4 g) và khác biệt mang ý nghĩa thống kê so với các nghiệm thức còn lại (p < 0,01). Các nghiệm thức còn lại, chuột ở từng nghiệm thức có độ tăng trọng tương đồng với nhau về mặt ý nghĩa thống kê (tăng giao động từ 10,11-12,43 g; p > 0,05) và độ tăng trọng tăng gần gấp đơi so với nhóm chuột ở nghiệm thức Pb (10,11- 12,43 so với 5,4 g; p < 0,01; tương ứng). Trong đó, nghiệm thức CD có độ tăng trọng cao nhất và tương đương với độ tăng trọng ở nghiệm thức đối chứng (12,43 so với 12,20 g; p > 0,5; tương ứng). Kết quả cho thấy, chì làm chậm tốc độ tăng trọng rõ rệt; dịch ép chanh dây, vitamin C thương phẩm thể hiện được vai trò hỗ trợ tăng trọng đối với chuột bình thường lẫn chuột nhiễm chì.
Sau 8 tuần, chuột ở tất cả nghiệm thức đều có tốc độ tăng trọng tăng dần và tương đồng với nhau về mặt ý nghĩa thống kê (p > 0,05). Trong đó, nghiệm thức ĐC vẫn duy trì được độ tăng trọng cao nhất nhưng vẫn tương đương với các nghiệm thức có bổ sung dịch ép chanh dây hay nghiệm thức uống vitamin C (p > 0,05). Riêng ở nghiệm thức Pb, tốc độ tăng trọng của chuột gần như không khác biệt so với thời điểm 4 tuần thí nghiệm và có xu hướng bị giảm (5,30 g so với 5,45 g; p > 0,05; tương ứng) và giảm hẳn so với các nghiệm thức còn lại gần tới 2,6 - 3 lần (5,3 g so với 13,68 – 15,08 g; p < 0,01; tương ứng). Kết quả này cho thấy, chì vẫn tiếp tục làm giảm độ tăng trọng của chuột và làm cho khối lượng cơ thể chuột có xu hướng giảm xuống thấp hơn so với thời điểm 4 tuần thí nghiệm (25,60 g so với 26,35 g; p > 0,05; tương ứng). Dịch ép chanh dây vẫn duy trì được tốc độ tăng trọng của chuột ở mức ổn định tương ứng với nghiệm thức ĐC ở cả 2 nồng độ khảo sát, tuy nhiên, nồng độ chanh dây 20 mg/kg thể trọng có phần thể hiện hiệu quả tốt hơn so với nồng độ 30 mg/kg thể trọng (14,43 g so với 13,68 g; p > 0,05; tương ứng).
3.1.2. Sự tương quan giữa hai yếu tố nghiệm thức và thời gian nuôi ảnh hưởng lên độ tăng trọng trung bình của chuột
Khi xét về về sự tương quan giữa hai yếu tố nghiệm thức và thời gian nuôi ảnh hưởng lên độ tăng trọng của chuột (xem phụ lục mục 1.2):
Xét từng yếu tố riêng lẻ (nghiệm thức hoặc thời gian thí nghiệm), từng yếu tố đều ảnh hưởng đến độ tăng trọng của chuột (p < 0,01). Ở từng nghiệm thức, tốc độ tăng trọng tuân đều tăng theo thời gian từ tuần 4 đến tuần 8; riêng nghiệm thức chỉ xử lí chì thì độ tăng trọng giảm rõ rệt so với các nghiệm thức theo thời gian. Khi xét sự tương quan của cả 2 yếu tố (nghiệm thức và thời gian thí nghiệm) cho thấy cả 2 yếu tố này đều ảnh hưởng đến độ tăng trọng của chuột (p < 0,01).
Tóm lại, dịch ép chanh dây đã cho thấy được vai trị kích thích tốc độ tăng trọng của chuột và khả năng kháng độc chì trong việc duy trì tăng trọng của chuột sau 8 tuần thí nghiệm; hiệu quả này tương đương với hiệu quả của vitamin C thương mại cũng như điều kiện ni bình thường khơng bị nhiễm chì, trong đó nồng độ dịch ép chanh dây 20 mg/kg thể trọng thể hiện hiệu quả hơn sau 8 tuần thí nghiệm.
Bàn luận
Theo [45] cho thấy khối lượng cơ thể chuột bị giảm dưới tác động của chì acetate với nồng độ 1% sau 8 tuần; của [46] cho thấy khi chuột nhiễm chì acetate (150 mg/kg) có khối lượng cơ thể giảm đáng kể so với đối chứng khơng nhiễm chì (36,33 g so với 40,83 g, p < 0,5). Theo [47] khi cho chuột nhiễm chì acetate với nồng độ 100 mg/kg thể trọng trong vòng 4 tuần thu được khối lượng cơ thể chuột bị giảm đáng kể (140±2,9 g) so với đối chứng (175±5 g). Trong khi đó, chuột nhiễm chì được điều trị bằng Vitamin C (25 g/100 g Vitamin C) trong cùng khoảng thời gian thí nghiệm, kết quả cho thấy khối lượng cơ thể chuột cải thiện đáng kể (164±5 g). Kết quả tương tự ở [48], với chuột được xử lí với chì acetate (100 ppm được pha trong nước uống) làm khối lượng cơ thể giảm sau 4 tuần thí nghiệm; đồng thời việc bổ sung vitamin C (100 mg/kg) giúp cải thiện vấn đề này. Kết quả của [49] cho thấy khối lượng cơ thể chuột bị nhiễm chì acetate (10 mg/mL) thấp đáng kể so với chuột khơng bị nhiễm chì sau 28 ngày; cùng với nồng độ chì đó có sự bổ sung của vitamin C (200 mg/2 mL) có sự cải thiện khối lượng cơ thể chuột trong cùng khoảng thời gian. Như vậy, kết quả trong thí nghiệm của chúng tơi cho thấy có sự tương đồng với các kết quả đã được cơng bố: chì làm giảm khối lượng cơ thể chuột sau 4 - 8
tuần gây nhiễm; dịch ép chanh dây có hàm lượng vitamin C đã giúp cải thiện được tình trạng này tương đương với nghiệm thức đối chứng (khơng uống chì, khơng uống chanh dây).
Những kết quả trên cho thấy chì là tác nhân gây độc làm giảm đáng kể khối lượng cơ thể chuột theo thời gian nhiễm và tích trữ trong cơ thể, từ đó trực tiếp ảnh hưởng đến tốc độ tăng trọng. Việc bổ sung vitamin C giúp cơ thể tăng cường khả năng cải thiện tác hại của độc tính chì gây ra đối với khối lượng cơ thể chuột. Dịch ép chanh dây và vitamin C thương mại đều có hiệu quả theo thời gian thí nghiệm (sau 4 và 8 tuần thí nghiệm). Khối lượng cơ thể chuột giảm có thể là do khi bị nhiễm chì, chuột biếng ăn hơn so với bình thường từ đó làm cho độ tăng trọng giảm [50]; chì tác động đến cơ thể làm tiêu hao lượng đạm và các năng lượng cơ bản từ đó gây giảm độ tăng trọng [51]. Ngồi ra, độc tính chì gây gián đoạn trong q trình hấp thu và chuyển hoá các chất dinh dưỡng trong thức ăn cần thiết cho cơ thể, dẫn đến thiếu chất dinh dưỡng [52] cũng góp phần làm giảm khối lượng cơ thể.
Dịch ép chanh dây giúp cải thiện trọng lượng cơ thể nhờ vào khả năng của vitamin C (252 mg/kg) giúp cho cơ thể tránh bị thất thoát về chất đạm cũng như năng lượng trong cơ thể; cải thiện được các ảnh hưởng có hại của chì lên trọng lượng [48]. Vitamin C có lợi ích trong việc kháng viêm nên có thể bảo vệ cơ thể khỏi các tổn hại của chì cũng như hạn chế hấp thụ chì ở ruột [53]; hạn chế rối loạn, tăng cường hấp thu và chuyển hố các chất dinh dưỡng. Có lợi trong việc đào thải chì khỏi cơ thể sớm ở giai đoạn phơi nhiễm [54]; có thể hạn chế ảnh hưởng của các phản ứng oxi hoá và các gốc tự do.
Tóm lại, dịch ép chanh dây đã thể hiện được khả năng kháng độc tính chì giúp cải thiện độ tăng trọng của chuột với cả 2 nồng độ sau 8 tuần thí nghiệm, trong đó nồng độ 20 mg/kg thể trọng thể hiện hiệu quả vượt trội hơn so với nồng độ 30 mg/kg.
3.2. TÁC DỤNG KHÁNG ĐỘC TÍNH CHÌ CỦA DỊCH ÉP QUẢ CHANH DÂY LÊN KHỐI LƯỢNG TINH HOÀN CHUỘT
3.2.1. Khối lượng trung bình của tinh hồn chuột tại các nghiệm thức khảo sát qua mỗi 4 tuần thí nghiệm
Hình 3.2. Biểu đồ thể hiện khối lượng trung bình tinh hồn chuột sau mỗi 4 ở các nghiệm thức
Sau 4 tuần thí nghiệm, khối lượng tinh hồn chuột ở nghiệm thức Pb cao hơn so với các nghiệm thức còn lại từ từ 1,33 - 1,5 lần (p < 0,05). Trong khi đó, khối lượng tinh hồn chuột của các nghiệm thức cịn lại có sự tương đồng với nhau và dao động từ 0,08 - 0,09 g (p > 0,05). Kết quả cho thấy, chì đã có ảnh hưởng đến khối lượng tinh hoàn chuột, làm cho khối lượng tinh hoàn chuột tăng; dịch ép chanh dây đã thể hiện được vai trị duy trì khối lượng tinh hồn ở mức bình thường và khả năng kháng độc chì lên khối lượng tinh hồn ở cả 2 nồng độ khảo sát.
Sau 8 tuần thí nghiệm, khối lượng tinh hoàn chuột ở các nghiệm thức có sự biến động khác nhau. Các nghiệm thức có uống dịch ép chanh dây đều có xu hướng làm tăng khối lượng tinh hoàn chuột so với thời điểm 4 tuần: nghiệm thức VC, PbCD1, PbCD2 đều tăng hẳn (0,11 g so với 0,08 g; 0,09 g so với 0,08 g; 0,01 so với 0,08 g; p < 0,05; tương ứng). Trong khi đó, ĐC khối lượng tinh hồn chuột có xu hướng giảm so với thời điểm 4 tuần thí nghiệm, nhưng chưa tạo được sự cách biệt về mặt thống kê (p > 0,05). Riêng ở nghiệm thức Pb, khối lượng tinh hoàn chuột giảm nhưng không nhiều và vẫn cao hơn các nghiệm thức cịn lại (p < 0,05), nhưng chưa có sự khác biệt rõ rệt về mặt thống kê với nghiệm thức VC (p > 0,05). Kết quả
cho thấy, chì vẫn ảnh hưởng lên khối lượng tinh hồn chuột dù khối lượng tinh hoàn chỉ giảm nhẹ; dịch ép chanh dây thể hiện được vai trị bảo vệ tinh hồn chuột, tăng khối lượng tương đồng với nghiệm thức ĐC và với nghiệm thức khơng có tác động của chì. Kết quả cũng cho thấy cả 2 nồng độ dịch ép chanh dây (20 mg/kg và 30 mg/kg) thể hiện hiệu quả như nhau và tương đương với hiệu quả của vitamin C thương mại.
3.2.2. Sự tương quan giữa hai yếu tố nghiệm thức và thời gian nuôi ảnh hưởng lên khối lượng tinh hoàn chuột
Khi xét về sự tương quan giữa hai yếu tố nghiệm thức và thời gian nuôi (xem phụ lục 2), cho thấy: xét từng yếu tố đơn lẻ, chỉ có yếu tố nghiệm thức có ảnh hưởng đến khối lượng tinh hoàn chuột (p < 0,01); yếu tố thời gian thì lại chưa ảnh hưởng đến khối lượng tinh hoàn chuột (p > 0,05). Khối lượng tinh hoàn chuột tại các nghiệm thức chỉ dao động và chênh lệch ở các nghiệm thức VC, PbCD1 và PbCD2; cịn lại khơng đáng kể từ tuần 4 đến tuần 8 (p > 0,05); riêng nghiệm thức chỉ uống chì (Pb) vẫn ln khác biệt với đối chứng qua mỗi 4 tuần (p < 0,05). Khi xét sự tương quan giữa hai yếu tố, cả 2 yếu tố đều cùng tác động gây ảnh hưởng lên khối lượng tinh hồn chuột (p < 0,01).
Tóm lại, dịch ép chanh dây thể hiện được khả năng duy trì khối lượng tinh hồn ở mức ổn định sau 8 tuần thí nghiệm ở cả 2 nồng độ khảo sát dưới tác động của chì; hiệu quả của của 2 nồng độ khảo sát tương đương nhau.
Bàn luận
Theo [55] cũng cho thấy kết quả tương tự, họ quan sát thấy chuột nhiễm chì cấp tính (75 mg/kg) khi tiêm vào phúc mạc cũng làm tăng khối lượng tinh hoàn ở chuột trưởng thành liên tiếp trong 3 ngày. Theo [56] cho thấy chì actate (20 mg/kg) làm tăng khối lượng tinh hoàn chuột cao hơn đối chứng sau 5 ngày liên tiếp. Theo [46], chì acetate (150 mg/kg) cũng làm tăng mạnh khối lượng của tinh hoàn chuột. Nghiên cứu [57], cho kết quả tương tự với khối lượng tương đối của tinh hoàn tăng mạnh khi tiếp xúc với chì (20 mg/kg) trong vịng 7 ngày. Như vậy, kết quả của
chúng tơi có sự tương đồng với các cơng bố này là chì đã làm tăng khối lượng tinh hoàn chuột.
Tuy nhiên, hiện nay có một số cơng trình cơng bố cho kết quả ngược lại: chì làm giảm khối lượng tinh hồn chuột. [58] lại cho kết quả chì acetate (1,25 mg/kg) làm giảm khối lượng tinh hoàn chuột sau 45 ngày nhiễm và việc bổ sung vitamin C (2 mg/kg) giúp cho khối lượng tinh hoàn tương đương với đối chứng. Theo [40], cũng cho thấy kết quả tương tự với tinh hoàn chuột dưới tác động của chì actate (0,2 %/kg) và vitamin C (500, 1000, 1500 mg/kg) trong 8 tuần. Kết quả của [59] cho thấy cũng tương tự khi tiếp xúc với chì acetate (10 mg/kg) và được bổ sung vitamin C (10 mg/kg) trong 8 tuần. Theo [38] cũng chỉ ra sự giảm sút về khối lượng của tinh hoàn chuột thấp hơn đối chứng nhưng không đáng kể sau 6 tuần khi bị xử lí chì acetate (20 mg/kg).
Kết quả của chúng tôi cho thấy chì là tác nhân độc hại làm tăng khối lượng tinh hồn chuột, chỉ số có hướng giảm sau 8 tuần nhưng vẫn cao cách biệt với đối chứng. Việc bổ sung dịch ép chanh dây với 2 nồng độ (20 mg/kg và 30 mg/kg thể trọng) đã giúp khối lượng tinh hoàn chuột tương đương với nghiệm thức đối chứng và nghiệm thức uống vitamin C thương mại.
Độc tính chì được biết đến là ảnh hưởng đến hầu hết các hệ thống cơ quan. Sự gia tăng khối lượng tương đối hay tuyệt đối của tinh hồn chuột có thể do teo tinh hồn và phù nề tuyến kẽ; kết quả đó từ sự tích tụ chất lỏng trong tinh hồn dưới tác động của chì [56], có thể cịn do sự dày lên của màng đáy tinh hoàn. Do tiếp xúc lâu với chì nên tinh hồn bị mất cân bằng các hormone và bị tổn thương do các loại phản ứng oxi hố [56], có thể gây viêm nhiễm lên cấu trúc tinh hồn. Độc tính chì ảnh hưởng mạnh làm cho các mạch máu tinh hoàn tắt nghẽn, cũng như tắt nghẽn các mạch máu ở tuyến kẽ [60] cũng có thể dẫn đến làm tăng khối lượng tinh hoàn.
Chanh dây giúp bổ sung vitamin C (252 mg/kg) có thể hạn chế được tổn thương do chì gây ra đối với tinh hoàn. Do bản chất vitamin C từ dịch ép chanh dây là một chất chống oxi hố hiệu quả nên có thể ngăn cản các loại phản ứng oxi hoá tác động đến tinh hoàn. Việc bổ sung vitamin C giúp tăng cường khả năng miễn
dịch của cơ thể; đồng thời giúp bảo vệ cấu trúc mô học của tinh hồn [38], từ đó làm cho tinh hồn tăng trưởng bình thường theo tuần tuổi trong giai đoạn phát triển của chuột.
Tóm lại, dịch ép chanh dây nồng độ 20 mg/kg và 30 mg/kg thể trọng đã thể hiện được khả năng duy trì khối lượng tinh hồn chuột ổn định sau 8 tuần dưới ảnh hưởng của chì.
3.3. TÁC DỤNG KHÁNG ĐỘC TÍNH CHÌ CỦA DỊCH ÉP QUẢ CHANH DÂY LÊN KÍCH THƯỚC TINH HỒN CHUỘT
3.3.1. Kích thước trung bình tinh hồn chuột tại các nghiệm thức khảo sát qua mỗi 4 tuần thí nghiệm
Kết quả đo kích thước tinh hồn chuột ở các nghiệm thức thí nghiệm được thể hiện ở bảng 3.1.
Bảng 3.1. Kích thước trung bình của tinh hồn chuột Kích thước Kích thước
(cm)
Nghiệm thức
Thời gian khảo sát (tuần)
W4 W8 Chiều dài ĐC 0,47±0,05Aa 0,43±0,04Ab Pb 0,50±0,05Aa 0,52±0,04Aa VC 0,35±0,05Ab 0,4 ±0,04Bab CD 0,4 ±0,05Aa 0,47±0,04Aab PbCD1 0,40±0,05Aab 0,43±0,04Ab PbCD2 0,47±0,05Aa 0,48±0,04Aab Chiều rộng ĐC 0,24±0,03Aab 0,19±0,03Bb Pb 0,27±0,03Aa 0,26±0,04Aa VC 0,21±0,03Aab 0,25±0,03Aab CD 0,24±0,03Aab 0,23±0,03Aab PbCD1 0,20±0,03Ab 0,22±0,03Aab PbCD2 0,23±0,04Aab 0,23±0,03Aab
A, B: thể hiện sự khác biệt theo hàng ở độ tin cậy 95%
a, b: thể hiện sự khác biệt theo cột ở độ tin cậy 95%
Sau 4 tuần thí nghiệm, chiều dài tinh hồn chuột ở các nghiệm thức Pb, ĐC, CD, PbCD2, PbCD1 có sự tương đồng nhau (p > 0,05), nghiệm thức Pb có chiều dài lớn nhất (dài hơn từ 0,03 - 0,15 cm) và cách biệt với nghiệm thức VC (p < 0,05). Riêng nghiệm thức VC, chiều dài tinh hoàn ở chuột thấp nhất nhưng vẫn chưa cách