CHƯƠNG 1 : TỔNG QUAN TÀI LIỆU
2.3. PHÂN LẬP CÁC HỢP CHẤT
Mẫu thân, lá P. foetida (5.0 kg) được thái nhỏ, phơi trong bóng râm, nghiền nhỏ thành bột, chiết siêu âm với methanol (MeOH) 15L (3 lần, mỗi lần 2 h) sau đó loại bỏ dung mơi dưới áp suất thấp thu được cặn chiết MeOH (PF, 150.0 g). Cặn chiết này được phân bố đều trong nước cất và lần lượt chiết với n-hexan, dichloromethane và ethyl acetate thu được các phân đoạn n-hexan (PF1, 12g), dichloromethane (PF2, 9 g), ethyl acetate (EtOAc) (PF3, 15.0 g) và nước (PF4). Phần nước PF4 được cất loại bỏ dung mơi hữu cơ, sau đó đưa lên cột diaion HP-20, loại đường bằng nước, rửa giải bằng hệ dung môi MeOH:H2O (0:100 100:0, v/v) lần lượt thu được 2 phân đoạn PF4A-PF4B. Phân đoạn PF4B (25g)
được chạy sắc ký trên cột silica gel với hệ dung môi dichloromethane:MeOH (30:1 1:1, v/v) thu được 5 phân đoạn nhỏ hơn ký hiệu là PF4B1-PF4B5.
Phân đoạn PF4B2 (5g) được phân tách trên cột YMC RP-18 với hệ dung môi Acetone:H2O (1:2, v/v) thu được 6 phân đoạn nhỏ hơn ký hiệu là PF4B2A – PF4B2F. Phân đoạn PF4B2A (120 mg) được phân tách trên hệ thống HPLC, sử dụng cột J’sphere ODS H-80 (250 mm × 20 mm, 4 μm, 8 nm), rửa giải với dung dịch acetonitrile 14% trong nước, tốc độ chảy là 3 mL/phút, thu được hợp chất 6 (17 mg). Hợp chất 7 được tinh chế từ phân đoạn PF4B2C (80 mg) bằng hệ thống HPLC sử dụng cột J’sphere ODS H-80 (250 mm × 20 mm, 4 μm, 8 nm), rửa giải với dung dịch acetonitrile 20% trong nước, tốc độ chảy là 3 mL/phút. Phân đoạn PF4B2D (105 mg) được tách trên hệ thống HPLC, sử dụng cột J’sphere ODS H- 80 (250 mm × 20 mm, 4 μm, 8 nm), rửa giải với dung dịch acetonitrile 20% trong nước, tốc độ chảy là 3 mL/phút, thu được hợp chất 5 (5 mg). Phân đoạn PF4B2F (70 mg) được tiếp tục phân tách trên hệ thống HPLC, sử dụng cột J’sphere ODS H-80 (250 mm × 20 mm, 4 μm, 8 nm), rửa giải với dung dịch acetonitrile 20% trong nước, tốc độ chảy là 3 mL/phút, thu được hợp chất 3 (3.5 mg) và hợp chất
4 (5mg).
Sử dụng cột YMC RP-18 với hệ dung môi rửa giải là acetone/nước (1/4, v/v) để phân tách phân đoạn PF4B5 (2.5 g) thu được 3 phân đoạn nhỏ hơn, ký hiệu từ PF4B5A-PF4B5C. Phân đoạn PF4B5A (150 mg) được phân tách trên hệ thống HPLC, rửa giải với dung dịch acetonitrile 17% trong nước, tốc độ chảy là 3 mL/phút, thu được hợp chất 1 (23.0 mg). Cuối cùng, hợp chất 2 được tinh chế từ phân đoạn PF4B5C (180 mg) bằng cột sephadex với hệ dung môi rửa giải là methanol/water (1/1 v/v). Như vậy, từ cặn chiết methanol của loài Lạc tiên, đã phân lập được 7 hợp chất sạch.
Hình 2.2. Sơ đồ phân lập các hợp chất từ loài Lạc tiên