Hợp chất 2 phân lập được dưới dạng chất bột vơ định hình, màu vàng. Phổ NMR của hợp chất 2 rất giống với các dữ liệu NMR của hợp chất 1, ngoại trừ sự xuất hiện thêm tín hiệu của một nhóm oxymethylene tại [δC 59.8/δH 3.64 (2H, brs)] và tín hiệu của một nhóm oxymethylene tại [δC 70.1/ δH 3.82/ 3.64 (2H)] của hợp chất 1 đã được thay thế bằng nhóm oxymethine tại (δC 81.9/ δH 3.25) của hợp chất 2. Thêm vào đó, hằng số tương tác lớn (J = 9.5 Hz) của hai proton anome tại δH 4.81, 4.75 và các tương tác HSQC của hai proton này lần lượt với carbon tại δC 74.0, 73.3 đã khẳng định sự có mặt của hai phân tử đường C-glycoside.
Như vậy phân tử đường C-arabinopyranose ở hợp chất 1 đã được thay thế bằng một phân tử C-glucopyranose ở hợp chất 2. Ngoài ra, trên phổ 1H-NMR của 2
vẫn có sự xuất hiện 2 tín hiệu doublet tại δH 8.02 (2H, d, J = 8.5 Hz) và 6.90 (2H, d, J = 8.5 Hz), chỉ ra sự hiện diện của 1 nhóm phenyl thế para; 1 tín hiệu singlet tại δH 6.81 thuộc về H-3 của khung flavone.
Trên phổ 13C-NMR và HSQC của hợp chất 2 cho thấy xuất hiện tín hiệu của 27 carbon, bao gồm: 2 nhóm methylene tại δC 59.8, 61.2; 15 nhóm methine
tại δC 74.0, 71.9, 78.8, 70.5, 81.9, 73.3, 70.9, 77.8, 69.0, 80.8, 102.6, 129.0 x 2, 115.9 x 2; 9 carbon không liên kết trực tiếp với proton tại δC 164.0, 158.5, 107.5, 161.2, 105.3, 155.0, 103.8, 121.5, 161.2 và một nhóm carbonyl tại δC 182.3. Trong đó, 15 carbon thuộc về phần khung flavone, 12 carbon còn lại là của 2 phân tử đường. Trên phổ HSQC, một bộ tín hiệu của carbon tại δC 74.0, 71.9, 78.8,
70.5, 81.9 (5CH), 59.8 (CH2) có tương tác lần lượt với các proton tại δH 4.81,
77.8, 69.0, 80.8, 61.2 có tương tác lần lượt với các proton tại δH 4.75, 3.88, 3.31, 3.39, 3.33, 3.51/3.76 một lần nữa khẳng định trong cấu trúc của hợp chất 2 có 2 phân tử đường C-glucopyranosyl. Vị trí của 2 phân tử đường này tại C-6 và C-8 được xác nhận bằng các tương tác HMBC của H-1ʹʹ (δH 4.81) với C-7 (δC 161.2), C-8 (δC 105.3, C-9 (δC 155.0), H-1ʹʹʹ (δH 4.75) với C-5 (δC 158.5), C-6 (δC 107.5), C-7 (δC 161.2). Dữ liệu phổ NMR của hợp chất 2 được so sánh với dữ liệu phổ của hợp chất apigenin 6,8-di-C-β-D-glucopyranoside và cho thấy có sự trùng
khớp hồn tồn [37]. Như vậy hợp chất 2 được xác định là 6,8-di-C-β-D-
glucopyranoside.
Bảng 3.2. Số liệu NMR của hợp chất 2 và hợp chất tham khảo
No. #,aδC [37] a,bδC a,cδH (mult., J in Hz)
2 164.1 164.0 - 3 102.6 102.6 6.81 (s) 4 182.3 182.3 - 5 158.5 158.5 - 6 107.5 107.5 - 7 161.2 161.2 - 8 105.3 105.3 - 9 155.1 155.0 - 10 103.8 103.8 - 1′ 121.5 121.5 - 2′, 5′ 129.0 129.0 8.02 (d, 8.5) 3′, 6′ 115.8 115.9 6.90 (d, 8.5) 4′ 160.7 161.2 - 5-OH 13.7 (s) 1′′ 74.0 74.0 4.81 (d, 9.5) 2′′ 71.9 71.9 3.50 (dd, 9.5, 9.0) 3′′ 78.8 78.8 3.29 (t, 9.0) 4′′ 70.5 70.5 3.40 (t, 9.0) 5′′ 81.8 81.9 3.25 (m) 6′′ 60.5 59.8 3.64 (brs) 1′′′ 73.3 73.3 4.75 (d, 9.5) 2′′′ 70.8 70.9 3.88 (dd, 9.5, 9.0) 3′′′ 77.8 77.8 3.31 (t, 9.0) 4′′′ 69.1 69.0 3.39 (t, 9.0) 5′′′ 80.8 80.8 3.33 (m) 6′′′ 61.3 61.2 3.51 (dd, 11.5, 5.5) 3.76 (dd, 11.5, 5.5)
Được đo tronga)DMSO-d6, b)125 MHz, c)500 MHz; δC của Apigenin 6,8-di-C-β-D-
glucopyranoside [37].