2.2. PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2.1. Phƣơng pháp chiết pectin
- Chiết tách pectin từ cỏ biển E. acoroides theo phƣơng pháp [6].
Mẫu cỏ biển E. acoroides sau khi thu thập, đƣợc rửa sạch bằng nƣớc
biển. Sau đó mẫu đƣợc tiến hành xử lý loại màu, các hợp chất polyphenol và các hợp chất trọng lƣợng phân tử thấp với ethanol 98% theo tỉ lệ 1/10 w/v trong thời gian 7 ngày ở nhiệt độ phòng, hỗn hợp đƣợc lọc tách và cỏ biển đƣợc phơi khơ trong khơng khí ở nhiệt độ phòng.
100 (g) mẫu cỏ biển sau khi đã loại bỏ chất béo và các hợp chất màu đƣợc xử lý trong HCl 0,5% theo tỷ lệ 1/10 w/v ở nhiệt độ 50oC trong thời gian 3 giờ để phá vỡ thành tế bào và giải phóng polysaccharide khỏi các liên kết trong thành tế bào. Dịch xử lý đƣợc lọc tách thô qua vải lọc, phần nguyên liệu cỏ biển sau xử lý đƣợc rửa lại bằng nƣớc máy để loại bỏ acid trƣớc khi tiến hành chiết tách thu nhận pectin. Phần dịch xử lý acid đƣợc trung hòa bằng dung dịch NaOH 0,5% và thu nhận polysaccharide trong phân đoạn này bằng kết tủa ở nồng độ cồn 70%.
Cỏ biển sau khi đƣợc xử lý với HCl 0,5% đƣợc đem chiết với dung dịch amonium oxalate 2% ở nhiệt độ 70oC trong thời gian 3 giờ (lặp lại 2 lần với các điều kiện tƣơng tự). Dịch chiết của 2 lần chiết đƣợc gộp lại, lọc tách thô qua vải lọc, sau đó lọc lại bằng giấy lọc. Dịch chiết sau đó đƣợc acid hóa bằng dung dịch HCl 1N đến pH = 1-2 thu đƣợc kết tủa dạng keo là các pectin dạng axit và để lắng qua đêm. Tiếp theo, gạn bỏ phần dịch trong, kết tủa đem ly tâm ở 7.000 vòng/phút trong 10 phút. Tách phần kết tủa keo đem hòa tan lại trong dung dịch Amonium oxalate 2% và điều chỉnh về pH = 7, pectin trong dung dịch đƣợc kết tủa bằng cồn 98% theo tỷ lệ v/v = 1/4, để lắng 1–2 giờ. Thu kết tủa bằng ly tâm và rửa sạch bằng cồn 75% (2-3 lần rửa) và rửa lại bằng cồn 98%. Sau đó đem sấy khơ qua đêm ở nhiệt độ 50oC và thu đƣợc sản phẩm polysaccharide dạng thơ có chứa pectin.