1. Khái niệm công nghệ gen
CNG là quy trình tạo ra những TB hoặc sinh vật có gen bị biến đổi hoặc có thêm gen mới từ đó tạo ra cơ thể với những đặc điểm mới.
Kĩ thuật tạo ADN tái tổ hợp để chuyển gen từ TB này sang TB khác đóng vai trò trung tâm của công nghệ gen
2. Quy trình chuyển gena. Tạo ADN tái tổ hợp a. Tạo ADN tái tổ hợp
Gồm các bớc
- Tách lấy thể truyền (vectơ): Thể truyền là một phân tử ADN đặc biệt có khả năng nhân đôi độc lập với ADN trong nhân TB, có thể mang thêm một đoạn gen khác và có thể gắn vào hệ gen của TB.
Thể truyền thờng đợc sử dụng là:
+ Plasmit trong TBC của vi khuẩn: là ADN vòng mạch kép. + Thể thực khuẩn lamđa (phagơ λ).
+ NST nhân tạo.
- Tách lấy ADN mang đoạn gen cần chuyển: gen cần chuyển mã hoá loại sản phẩm mong muốn. - Dùng enzim cắt giới hạn Restrictaza để cắt thể truyền và cắt lấy đoạn gen cần chuyển ở những điểm xác định tạo ra các đầu dính.
- Nối đoạn gen cần chuyển vào thể truyền nhờ enzim nối ligaza tạo ra ADN tái tổ hợp.
b. Chuyển ADN tái tổ hợp vào TB nhận
Có thể chuyển ADN tái tổ hợp vào TB nhận bằng 2 cách
- Biến nạp: Trộn các phân tử ADN tái tổ hợp với các TB nhận, dùng muối CaCl2 hoặc xung điện làm dãn màng sinh chất để ADN tái tổ hợp dễ dàng chui qua màng vào trong TB. làm dãn màng sinh chất để ADN tái tổ hợp dễ dàng chui qua màng vào trong TB.