) đến kích thước và hình thái lá chè
4.2.6.Đánh giá tính đa hình di truyền của các dòng chè đột biến mới được tuyển chọn
Qua theo dõi không thấy xuất hiện các bệnh lạ trên các dòng, các bệnh thông thường khác xuất hiện không có gì đặc biệt so với các giống chè đang được trồng phổ biến.
4.2.6. Đánh giá tính đa hình di truyền của các dòng chè đột biến mới được tuyển chọn chọn
Khi sử dụng phương pháp gây đột biến để chọn tạo các dòng chè mới, việc đánh giá các biến dị qua theo dõi trên đồng ruộng không thể cho ta được một bức tranh toàn cảnh và những câu trả lời cặn kẽ về bản chất di truyền của các dòng. Những biến dị không theo một quy luật nào và sự sai khác không rõ so với những biến dị tự nhiên ở sinh vật là không rõ rêt. Để đánh giá các sai khác về bản chất di truyền của các dòng, người ta phải sử dụng đến các kỹ thuật sinh học phân tử. Một trong những phương pháp tiên tiến nhất hiện nay là kỹ thuật đánh giá tính đa hình di truyền của một số giống chè bằng kỹ thuật RAPDs (Random Amplified Polymorphic DNA).
Trong nghiên cứu này, Viên di truyền nông nghiệp đã sử dụng các mồi thuộc nhóm OPA, OPC, BIO để tiến hành thí nghiệm. Các phản ứng RAPD được tiến hành ở thể tích 5µl, bao gồm lượng mẫu ADN là 5 ng, enzym tag polymeraza 1U,
100 µm dNTP, 2,5 mM MgCl2, 10 mM Tris HCl, 50 mM KCl (dung dịch đệm
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
Chương trình PCR với 40 chu kỳ. Kết quả PCR được kiểm tra trên gel agaroza 1,2%.
Số liệu từ các mồi RAPDs được thống kê và phân tích trên phần mềm NTSYS-Pc 2.1. Từ đó, thiết lập được bảng hệ số tương đồng di truyền như sau:
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
Bảng 4.19: Hệ số tương đồng di truyền của các dòng đột biến
TRI777 T-0.8 T-1.0 T-1.5 T-2.0 T-2.5 T-3.0 T-3.5 T-4.0 T-4.5 T-5.0 PH1 P-0.8 P-1.0 P-1.5 P-2.0 P-2.5 P-3.0 P-3.5 P-4.0 P-4.5 P-5.0 TRI777 1,00 TRI777 1,00 T-0.8 0,37 1,00 T-1.0 0,37 0,57 1,00 T-1.5 0,37 0,57 0,67 1,00 T-2.0 0,65 0,37 0,37 0,37 1,00 T-2.5 0,37 0,90 0,57 0,57 0,37 1,00 T-3.0 0,37 0,69 0,79 0,67 0,37 0,57 1,00 T-3.5 0,15 0,15 0,15 0,15 0,15 0,15 0,15 1,00 T-4.0 0,37 0,69 0,67 0,65 0,37 0,69 0,67 0,15 1,00 T-4.5 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,15 0,33 1,00 T-5.0 0,33 0,61 0,57 0,57 0,37 0,61 0,57 0,15 0,37 0,37 1,00 PH1 0,09 0,09 0,09 0,09 0,09 0,09 0,09 0,90 0,90 0,90 0,90 1,00 P-0.8 0,13 0,13 0,19 0,20 0,26 0,19 0,21 0,19 0,16 0,22 0,12 0,59 1,00 P-1.0 0.13 0,15 0,20 0,19 0,22 0,19 0.50 0,19 0,19 0,25 0,16 0,54 0,19 1,00 P-1.5 0,15 0,15 0,22 0,19 0,26 0,23 0,17 0,23 0,16 0,19 0,09 0,59 0,10 0,67 1,00 P-2.0 0,16 0,19 0,26 0,23 0,25 0,19 0,21 0,21 0,13 0,19 0,26 0,69 0,14 0,33 0,59 1,00 P-2.5 0,19 0,15 0,28 0,19 0,25 0,13 0.50 0,18 0,15 0,24 0,22 0,15 0,33 0,85 0,19 0,67 1,00 P-3.0 0,10 0,10 0,18 0,15 0,23 0,18 0,16 0,23 0,29 0,29 0,26 0,15 0,57 0,09 0,10 0,33 0,47 1,00 P-3.5 0,14 0,18 0,10 0,20 0,23 0,23 0.50 0,20 0,17 0,23 0,25 0,19 0,09 0,74 0,14 0,09 0,70 0,59 1,00 P-4.0 0,16 0,19 0,14 0,21 0,25 0,20 0,18 0,18 0,29 0,11 0,09 0,43 0,43 0,63 0,43 0,43 0,63 0,09 0,63 1,00 P-4.5 0,20 0,20 0,19 0,21 0,24 0,23 0.50 0,23 0,29 0,31 0,51 0,48 0,54 0,57 0,48 0,39 0,57 0,52 0,57 0,63 1,00 P-5.0 0,37 0,23 0,19 0,19 0,37 0,13 0,23 0,17 0,20 0,33 0,19 0,59 0,65 0,71 0,65 0,59 0,64 0,45 0,58 0,43 0,67 1,00
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
Trong thí nghiệm chúng tôi đã xử dụng 22 mẫu chè là các dòng chè đột biến có triển vọng, được tuyển chọn ra từ các cá thể có biểu hiện về hình thái và sinh trưởng tốt của hai quần thể đột biến có nguồn gốc từ hai giống PH1 và TRI-777. Trong giới hạn đề tài này chúng tôi tập trung phân tích tính đa hình di truyền của các dòng có nguồn gốc TRI-777, các dòng còn lại chỉ mang tính tham khảo.
Kết quả cho thấy: Hệ số tương đồng ở 22 mẫu chè dao động từ 0,09 đến 0,9. Sự sai khác về bản chất di truyền với đối chứng được thể hiện rất rõ, hệ số di truyền đều dưới 9,0. Điều này thể hiện mức dao động về tương đồng di truyền giữa các dòng với đối chứng là rất rõ ràng. Đặc biệt, hai cặp mẫu của (dòng T-3.5 và TRI- 777) và (dòng T-5.0 và TRI-777) có sự sai khác di truyền lớn nhất (Hệ số tương
đồng lần lượt là 0,15 và 0,33). Điều này chứng tỏ tác nhân đột biến tia γ (Co60) đã
tác động vào bản chất di truyền của các dòng đột biến và gây ra sự sai khác rất lớn về mặt di truyền so với giống đối chứng TRI-777.
Ở mức tương đồng 0,45, theo sơ đồ hình cây về mối quan hệ di truyền giữa các dòng chè ta thấy:
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn PH1 P-2.0 P-0.8 P-1.5 P-5.0 P-4.0 P-3.0 P-2.5 P-1.0 P-3.5 P-4.5 T-4.5 T-1.0 T-3.0 T-1.5 T-4.0 T-2.5 T-0.8 T-5.0 TRI777 T-2.0 T-3.5 0,09 0,45 0,9
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
Với mức tương đồng 0,45, 22 dòng chè được chia thành 7 nhóm, trong đó, có 3 nhóm có nguồn gốc từ giống PH1 và 4 nhóm có nguồn gốc TRI-777. Điều này thể hiện rất đúng bản chất của các dòng khi hệ số tương đồng của các dòng có khác nguồn gốc là rất nhỏ.
Các dòng có nguồn gốc TRI-777 chia thành các nhóm như sau:
Nhóm I: Bao gồm các dòng 0.8; 1.0; 1.5; 2.5; 4.0; 4.5 và 5.0 có hệ số tương đồng cao từ 0,57 đến 0.90. Nhóm này lại được chia thành hai nhóm phụ:
+ Phân nhóm phụ thứ nhất với ba dòng 1.0; 1.5; 4.0 và 4.5 với mức độ tương đồng di truyền 0,65.
+ Phân nhóm phụ thứ hai với ba dòng 0,8; 2.5 và 5.0 với mức độ tương đồng di truyền 0,61. Đặc biệt trong phân nhóm phụ này có hai dòng 0.8 và 2.5 có hệ số tương đồng khá cao là 0.90.
Nhóm II: Bao gồm các giống TRI-777 và dòng 2.0 có hệ số tương đồng cao từ 0,65. Nhóm này không có phân nhóm phụ.
Nhóm III: Chỉ có duy nhất dòng 3.5
Nhóm III: Chỉ có duy nhất dòng 4.5
Các kết quả trên cho thấy sự đa dạng về di truyền giữa các dòng chè. Cây mẹ TRI-777 và các con lai đều có sự sai khác di truyền khá lớn, trừ dòng 2.0 nằm cùng phân nhóm với mẹ TRI-777 có tương đồng di truyền khá với mẹ các dòng còn lại đều sự sai khác lớn về mặt di truyền với cây mẹ.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn