Chƣơng 2 : THỰC NGHIỆM
2.4. Thăm dò ảnh hưởng của một số phức chất rắn tổng hợp được đến sự nảy
2.4.3. Thăm dò ảnh hưởng của hàm lượng phức chất đến một số chỉ tiêu sinh
của mầm hạt đậu đen
Cân mỗi mẫu 3 gam giá đậu đen nghiền bằng cối chày sứ, thêm vào 50 ml dung dịch đệm photphat có pH = 6. Trộn đều, sau đó để trong tủ lạnh trong 10 giờ ở 4oC lọc và li tâm, lấy phần dịch trong. Dịch này đem xác định một số chỉ tiêu sinh hóa: protein, proteaza và α-amilaza
Thăm dị ảnh hưởng của các phức chất đến hàm lượng protein của mầm hạt đậu đen
Lấy mỗi mẫu 0,2 ml dịch chiết cho vào các ống nghiệm có đánh số, thêm vào mỗi ống nghiệm 5 ml dung dịch D, bổ sung thêm nước cất đến cùng thể tích 9 ml, lắc đều, để yên 15 phút. Sau đó lại thêm vào mỗi ống 1 ml dung dịch E, lắc đều và tiếp tục để yên 30 phút.
Mẫu so sánh khơng có dịch chiết: 5 ml dung dịch D, 4 ml nước và 1 ml dung dịch E.
Đo độ hấp thụ quang của các mẫu thí nghiệm ở bước sóng 750 nm [1]. Đối chiếu với đường chuẩn protein, tính số mg protein có trong mỗi mẫu. Hàm lượng protein được tính theo cơng thức:
X= 100%
m HSPL a
Trong đó:
X: Hàm lượng protein (% khối lượng khơ). a: Số đo trên máy (mg/ml).
HSPL: Hệ số pha lỗng. m: Khối lượng mẫu (mg).
Thăm dị ảnh hưởng của các phức chất đến hàm lượng proteaza của mầm hạt đậu đen
Cho vào mỗi ống nghiệm có đánh số thứ tự 2 ml dung dịch tyrosin 1μmol/ml , 1 ml dịch chiết của từng mẫu, lắc đều, để yên ở 300
C trong 10 phút. Thêm vào mỗi ống 5 ml axit tricloaxetic 5%, lắc đều, tiếp tục giữ ở 300
C trong 30 phút.
Mẫu kiểm tra làm tương tự như trên nhưng cho dung dịch axit tricloaxetic 5% vào trước. Mẫu so sánh thay 2 ml dung dịch tyrosin 1μmol/ml bằng nước cất.
Cho vào các ống nghiệm khác 1 ml dung dịch lọc của mỗi mẫu thí nghiệm, mẫu kiểm
tra và mẫu so sánh, thêm vào mỗi ống 4 ml dung dịch Na2CO3 6% và 1 ml thuốc thử Folin-Ciocalto đã pha loãng 5 lần, lắc đều và giữ 30 phút ở nhiệt độ phòng.
Đo độ hấp thụ quang của các mẫu thí nghiệm và mẫu kiểm tra ở bước sóng 750 nm. Đối chiếu với đường chuẩn proteaza tính lượng μmol tyrosin tương ứng. Từ đó tính đơn vị hoạt độ (ĐVHĐ) của proteaza theo cơng thức:
ĐVHĐ/ml = m t HSPL k n ) ( Trong đó:
n: Số đo trên máy mẫu thí nghiệm (mg/ml). k: Số đo trên máy mẫu kiểm tra (mg/ml). HSPL: Hệ số pha loãng.
t: Thời gian ủ enzim với cơ chất (phút). m: Khối lượng mẫu (mg).
Thăm dò ảnh hưởng của các phức chất đến đến hàm lượng α-amilaza của
mầm hạt đậu đen
Cho vào mỗi ống nghiệm có đánh số thứ tự 1ml dung dịch tinh bột 1%, 1ml dung dịch NaCl 0,1%, 2ml dung dịch đệm photphat 0,05M (pH= 6), lắc đều và giữ ở 30oC trong 15 phút , thêm vào mỗi hỗn hợp 1ml dung dịch chiết của từng mẫu, lắc đều và tiếp tục giữ ở 30oC trong 30 phút sau đó cho 5ml dung dịch axit sunfusalisilic 20%.
Mẫu so sánh gồm 1ml dung dịch chiết của mỗi mẫu thí nghiệm, 9ml dung dịch iốt đã pha loãng 150 lần.
Đo mật độ quang A của các dung dịch ở bước sóng 560 nm [1]. Tính đơn vị hoạt độ (ĐVHĐ) của α-amilaza theo cơng thức:
ĐVHĐ/ml = m HSPL n k ) ( Trong đó:
n: Số đo trên máy mẫu thí nghiệm (mg/ml). k: Số đo trên máy mẫu kiểm tra (mg/ml). HSPL: Hệ số pha loãng.
m: Khối lượng mẫu (mg).
Kết quả xác định hàm lượng protein, hoạt độ proteaza và α-amilaza của mầm hạt đậu đen (đã được xử lí bằng các phức chất ở các nồng độ khác nhau) được trình bày ở bảng 3.11 và 3.12.
Thăm dị ảnh hưởng của các phức chất, muối và phối tử đến một số chỉ tiêu sinh hóa của mầm hạt đậu đen
Cách tiến hành tương tự như phương pháp thăm dò sự ảnh hưởng của phức chất đến đến một số chỉ tiêu sinh hóa của mầm hạt đậu đen.