Chúng tôi tiến hành chạy điện di để xác định khối lƣợng phân tử enzyme tách từ cua biển Việt Nam. Qua các kết quả khảo sát từ các thí nghiệm trên, chúng tôi chia ra làm 2 mẫu tƣơng ứng với việc dịch nổi ban đầu
63
Số hóa bởi Trung tâm Học Liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
nhƣ nhau sau khi nghiền, li tâm sau đó đƣợc tủa bằng tỉ lệ 70% cồn 960
C; bằng muối amoni sulphate 60% để loại bớt một số protein đồng thời kết hợp với các quá trình tinh sạch khác. Kết quả thu đƣợc nhƣ sau:
Bảng 3.19. Kết quả mẫu đem chạy điện di
Hạng mục Mẫu 1 ĐC Mẫu 2 Mẫu 3 Mẫu 4 Mẫu 5 (NHTB 4)2SO4
TB Cồn 70% Hoạt tính đặc hiệu
(U/mg) 7.253 6.197 6.315 5.734 5.982 6.256 5.858
Hiệu suất thu hồi
(%) TB (NH4)2SO4 =(Mẫu2+Mẫu3)/2; TB Cồn 70%=(Mẫu4+Mẫu5)/2 86.25 80.77
Kết quả: Với dịch nổi ban đầu nhƣ nhau, nếu tủa bằng (NH4)2SO4, hiệu suất thu hồi đạt cao nhất 86.25%, với hoạt tính protease còn lại là 6.256 U/mg. Tủa với cồn 80%, hiệu suất thu hồi thấp hơn so với khi tủa bằng (NH4)2SO4 không đáng kể (80.77%), trong khi đó hoạt tính protease còn lại là 5.858U/mg.
Hình 3.7. Điện di đồ sau khi tủa bằng (NH4)2SO4 60% và tỉ lệ cồn 70%
1 2 M 3 4 5 65 45 35 18 14 kDa
64
Số hóa bởi Trung tâm Học Liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
Mẫu 1 : mẫu trƣớc tủa
Mẫu 2 : mẫu không pha loãng khi tủa bằng (NH4)2SO4
M : thang protein chuẩn
Mẫu 3 : mẫu pha loãng 2 lần khi tủa bằng (NH4)2SO4
Mẫu 4 : mẫu không pha loãng khi tủa bằng cồn 70% Mẫu 5 : mẫu pha loãng 2 lần khi tủa bằng cồn 70%
Từ bảng điện di trên gel polyacrylamid cho thấy: Mẫu chế phẩm Việt Nam có các protein ở các khối lƣợng (lần lƣợt từ trên xuống dƣới): 60; 35; 28; 17 và 15 kDa (mũi tên chỉ trên hình 3.7).
Những kết quả chạy điện di tren gel polyacrylamid là phù hợp so với các công trình nghiên cứu đã đƣợc công bố ở nƣớc ngoài: theo tác giả Cunningham và các cộng sự [17], tổ hợp enzyme phân giải protein có khối lƣợng phân tử nhỏ hơn 30kDa; còn Balov AA và công sự [10], tổ hợp emzyme chứa colagenase gồm 3 thành phần có khối lƣợng phân tử từ 18- 27kDa.
Nhƣ vậy, việc xử lý dịch protein tổng số bƣớc đầu bằng cồn và (NH4)2SO4 cũng đã loại bớt đƣợc một số protein tạp giúp cho việc tinh sạch protease sau này dễ dàng hơn.