Dụng cụ, trang thiết bị

Một phần của tài liệu khóa luận tốt nghiệp nghiên cứu phát hiện đột biến mất đoạn gen dystrophin trên bệnh nhân loạn dưỡng cơ duchenen bằng kỹ thuật mlpa (Trang 26 - 29)

- Tủ lạnh : 40C, -20 ºC ( SANYO)

- Pipet định mức và đầu côn các loại 1000µl, 200µl, 100µl, 20µl, 10µl, 2.5µl

- Ống Eppendorf

- Bình thủy tinh, cốc đong

- Cân điện tử

- Lò vi sóng

- Máy ly tâm để bàn Eppendorf (Đức): Centrifuge 5424R và Hitachi (Nhật).

- Máy Votex

- Máy rung lắc nhiệt: Thermomixer 5437 và Thermomixer comfort cho ống 1,5ml và Mixmate cho ống 2ml.

- Máy điện di: Mupid (Nhật Bản)

- Máy soi gel và chụp ảnh tự động: EC3 Imaging system

- Máy đọc huỳnh quang

- Máy đo OD: Nanodrop 1000

- Máy PCR: Eppendorf

- Máy chạy MLPA

2.3.2. Hóa chất

- Hóa chất tách chiết DNA:

+ Dung dịch Lysis buffer RBC gồm: 4,3g NH4 Cl + 0,5g KHCO3 + 0,03g EDTA + 500ml H2 0, pH 7,1-7,4

+ PBS 1X: 8g NaCl + 0,2g KCl + 2,68g Na2 HP04 .7H2 O + 0,24g KH2PO4 + 1000 ml H2O, pH 7,4

+ Lysis buffer HD ( phá bạch cầu): 1,5 ml Tris HCl 1M + 1ml EDTA 0.5M + 5ml SDS 10% + 42,5 ml H2 O. Tổng thể tích 50 ml

+ Proteinase K (10mg/ml)

+ Dung dịch Phenol : Chloroform : Isoamyl (25 : 24 :1)

+ Dung dịch Chloroform : Isoamyl (24 : 1)

+ Sodium acetat CH3COONa 3M (pH=5.2).

+ Dung dịch hòa tan DNA: đệm TE (Tris - EDTA)

- Hóa chất cho PCR:

+ GoTag chứa: dNTPs, Taq polymerase, MgCl2 + Primers: mồi xuôi, mồi ngược

+ Nước cất 2 lần dH2O - Hóa chất cho giải trình tự:

+ Ethanol 95%

+ Đệm buffer

+ Hi - Di™ Formamide (bảo quản lạnh -20oC)

+ Big dye

- Hóa chất chạy điện di:

+ Dung dịch đệm TBE (Tris Borate EDTA) 1X gồm: Tris base, boric acid và EDTA (pH 8.0). Khi sử dụng pha thành 10X

+ Agarose( dạng bột)

+ Ethidium bromid - Hóa chất chạy MLPA:

Kit Salsa MLPA bao gồm các thành phần sau:

• MLPA buffer( ống nắp vàng)

• Probemix ( ống nắp đen)

• Ligase-6 buffer A ( ống nắp không màu)

• Ligase-65 buffer B (ống nắp trắng)

• Ligase-65 ( ống nắp xanh lá cây)

• SALSA PCR buffer

• SALSA PCR- primers( ống nắp nâu)

Một phần của tài liệu khóa luận tốt nghiệp nghiên cứu phát hiện đột biến mất đoạn gen dystrophin trên bệnh nhân loạn dưỡng cơ duchenen bằng kỹ thuật mlpa (Trang 26 - 29)

Tải bản đầy đủ (DOCX)

(61 trang)
w