2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU
2.2 Các phương pháp nhân giống lan
ðể tạo cây giống hoa lan phục vụ cho công tác ni trồng xuất khẩu, có thể nhân giống bằng hai cách: (1) nhân giống hữu tính và (2) nhân giống vơ tính [14].
2.2.1 Nhân giống hữu tính
Hoa lan là hoa lưỡng tính. Vì cấu trúc của hoa và sự chia của các cơ quan sinh dục trong hoa khơng đều nên bắt buộc phải giao phấn nhờ cơn trùng. Sự thụ phấn của lan có thể cùng cây, có thể khác cây. Trong các vườn ni trồng, vấn ñề thụ phấn cho lan thường do con người thực hiện. Việc thụ phấn ñược tiến hành như sau:
- Lấy và loại bỏ khối phấn bọc nhụy của cây lan chọn làm mẹ.
- Lấy khối phấn của hoa cây lan chọn làm bố thụ phấn cho cây lan mẹ. Chú ý phấn của cây lan thường có cấu tạo dính hay sáp nên khi thụ phấn cần dùng một cái kim hay một cái kẹp nhỏ ñể lấy khối phấn ra khỏi cây.
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………………………16
- ðưa ñỉnh khối phấn lấy ñược ở cây lan chọn làm bố vào phần lõm có chất keo dính được gọi là đầu nhụy của cây hoa chọn làm mẹ, khối phấn sẽ dính ngay vào đầu nhụy của cây mẹ và sự thụ phấn ñược thực hiện. Việc lấy phấn và thụ phấn tốt nhất nên ñược tiến hành sau khi hoa nở 4 ngày. Khi khối phấn trên nẩy mầm nó sẽ vào thụ tinh ở noãn cầu cây mẹ và tạo nên hạt sau này [14].
Toàn bộ bầu của hoa mẹ phát triển thành quả. Quả lan sau 5 -10 tuần thì chín. Việc thu hái quả ñược tiến hành khi quả lan từ màu xanh chuyển sang màu vàng và trước khi vỏ nứt. Sau khi thu hái cần phải xử lý quả nhằm mục đích loại trừ các nguyên nhân gây bệnh như nấm, vi khuẩn sau này tồn tại trên bề mặt của quả bằng các loại thuốc sát trùng như:
- Focmon (focmalin) nồng ñộ 0,5% phun lên quả, ñậy kín trong 2 giờ. - KMnO4 nồng ñộ 3%, ngâm trong 30 phút.
Sau đó các quả lan được hong khơ rồi cho vào bao giấy sạch ñể cho ñến khi quả nứt. Khi thấy quả ñã nứt và một số hạt ñã rơi trong bao giấy thì lấy các quả và dùng ngón tay gõ gõ nhẹ vào trái nứt để hạt cịn lại trong quả ra hết vào bao giấy ñể lấy hạt.
Hạt lan phải được gieo cấy ngay trong vịng 2 – 3 ngày sau khi hái. Nếu chưa có điều kiện gieo cấy ngay thì phải bảo quản trong máy sấy khô.
Về môi trường nuôi hạt: hạt lan rất bé và tỷ lệ nảy mầm trong thiên nhiên rất thấp nên để có tỷ lệ nảy mầm cao phải có sự phối hợp với nấm ký sinh Mycorrhiza. Nấm Mycorrhiza sống trên mặt hạt lan và cung cấp nước, chất hữu cơ làm kích thích sự nảy mầm, sức tăng trưởng của lan con. Môi trường nuôi cấy hạt có thể dùng mơi trường Vacin – Went hay mơi trường MS, môi trường KC (xem phần phụ lục).
Về gieo hạt: hạt trước khi ñem gieo phải ñược khử trùng bằng H2O2 3%. Công việc gieo hạt tiến hành trong phịng vơ trùng. Khi lan con mọc, những bình có mật độ cây con vừa phải thì để n cho đến khi cây tăng trưởng
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nơng nghiệp ………………………17
đạt kích thước đưa ra ngồi trồng vào chậu chung. Nếu những bình có mật độ cây con q dày phải chuyển bớt cây sang bình khác trong buồng cấy vơ trùng cùng công thức môi trường [14].
2.2.2 Nhân giống vơ tính
ðối với hoa lan, ngồi nhân giống hữu tính, ta có thể nhân giống bằng phương pháp vơ tính. Nhân giống vơ tính có thể thực hiện bằng hai phương pháp:
- Phương pháp tách chiết thông thường. - Phương pháp nuôi cấy mô.
2.2.2.1 Phương pháp tách chiết thông thường Thời vụ Thời vụ
Thời vụ tách chiết tốt nhất đối với đa số các lồi lan là vào ñầu mùa tăng trưởng. ðối với miền Bắc là ñầu mùa Xuân, ñối với miền Nam là ñầu mùa mưa. Nhưng nếu tạo ñiều kiện ẩm ñộ của vườn tốt cũng có thể tách chiết quanh năm [14].
Kỹ thuật tách
Vào thời kỳ cuối mùa sinh trưởng của cây, cắt rời cây lan thành từng ñơn vị, mỗi ñơn vị là 2 – 3 giả hành và vẫn giữ nguyên trong chậu. Khi bắt ñầu vào mùa sinh trưởng, lấy chậu lan ñã thực hiện cắt rời thành từng ñơn vị trên ngâm vào nước ñể lấy cây ra (ngâm khoảng 30 phút). Sau khi lấy ñược cây ra, ñem cắt bỏ các rễ hư rồi rửa bằng dung dịch khử trùng ñể tiêu diệt các mầm mống gây bệnh (nấm, vi khuẩn) rồi mới ñem sang trồng trong chậu mới [14], [31].
2.2.2.2 Phương pháp ni cấy mơ
Năm 1962, George Morel lần đầu tiên thành công trong việc nuôi cấy mô hoa lan [55].
Ngày nay, kỹ thuật nhân giống hoa lan bằng phương pháp ni cấy mơ đã được phổ biến rộng rãi. Nhiều nước, bên cạnh việc sản xuất các giống trên quy mơ cơng nghiệp cịn sản xuất cây giống ở quy mơ gia đình. Kỹ thuật nhân giống hoa lan bằng phương pháp nuôi cấy mơ được thực hiện qua các bước cơ bản như sau [14].
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………………………18
- Chọn cây giống và mơ phân sinh
+ Chọn cây lan có nhiều ñặc ñiểm tốt ñáp ứng mục ñích kinh doanh. + Lấy tế bào phân sinh từ các ñọt cây, chồi non, lá non trong chồi ngủ cho việc cấy mô. Những mô phân sinh ñược dùng ñể cấy mô nhân giống gọi là nguyên mô (explant).
- Chuẩn bị nguyên mô để ni cấy
+ Cắt các ñỉnh sinh trưởng, bóc các lá bao, rửa sạch phần thân còn lại với nước. + Khử trùng bằng dung dịch HgCl2 0,1% từ 5 – 10 phút rồi rửa lại bằng nước vơ trùng.
+ Bóc nhẹ nhàng các lá non đến khi nhìn thấy mầm nhỏ bên trong. + ðưa mầm vào môi trường nuôi cấy.
Tất cả những thao tác trên tiến hành trong buồng cấy vô trùng.