Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………………………83
Nhận xét:
1. Ta thấy than hoạt tính có tác dụng tích cực đến việc hình thành rễ của CD5 và CD9. Ở cả 2 giống, theo chiều tăng của than hoạt tính thì số rễ/cây và chiều dài trung bình rễ đều tăng và ñạt cực ñại khi bổ sung 1g than hoạt tính, sau đó có xu hướng giảm dần, thấp nhất là công thức đối chứng khơng bổ sung than hoạt tính.
2. Tỷ lệ ra rễ cao nhất của CD5 bằng 95,83% khi bổ sung 1g than hoạt tính và thấp nhất bằng 45,0% khi khơng bổ sung than hoạt tính. Trong khi đó, tỷ lệ ra rễ của CD9 ñạt cao nhất, bằng 100% khi bổ sung 1,5g và 2,0g than hoạt tính và thấp nhất ở cơng thức đối chứng, bằng 60,83%.
3. Với CD5 số rễ/cây lớn nhất là 2,65 với ñộ dài rễ trung bình là 2,21cm khi bổ sung 1g than hoạt tính. ðộ dài rễ và chiều dài rễ thấp nhất khi khơng bổ sung than hoạt tính, lần lượt là 1,2 rễ/cây và 0,97cm.
3. Với CD9, chiều dài rễ và độ dài rễ trung bình lớn nhất khi bổ sung 1g than hoạt tính, lần lượt là 2,92 rễ/cây và 2,42cm. Ở cơng thức đối chứng có số rễ/cây và độ dài rễ trung bình thấp nhất, lần lượt là 1,01 rễ/cây và 1,03cm. 4. Ở độ tin 95%, các cơng thức đều khác nhau có ý nghĩa.
4.2.2 Ảnh hưởng của than hoạt tính và NAA đến sự ra rễ của CD5 và CD9
Sau khi tìm ra mức than hoạt tính tối ưu cho ra rễ của CD5 và CD9, chúng tôi tiếp tục nghiên cứu ảnh hưởng ra rễ của NAA bằng cách bổ sung NAA vào môi trường ra rễ ñã bổ sung lượng than hoạt tính tối ưu ở thí nghiệm trên là 1,0gam/lít. Kết quả sau 3 tháng theo dõi được trình bày trong bảng 4.12 dưới đây:
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………………………84
Bảng 4.12. Ảnh hưởng của than hoạt tính và NAA đến khả năng ra rễ, chất lượng rễ của CD5 và CD9
(sau 2 tháng theo dõi)
CD5 CD9 Công thức NAA (ppm) Tỷ lệ ra rễ Số rễ/cây ðộ dài rễ TB (cm) Tỷ lệ ra rễ Số rễ/cây ðộ dài rễ TB (cm) 1(ðC) 0 97,50 2,47 2,12 98,33 2,85 2,37 2 0,1 100,00 2,95 2,32 100,00 3,48 2,94 3 0,3 100,00 3,25 2,86 100,00 4,14 3,37 4 0,5 100,00 3,82 3,15 100,00 4,73 3,89 5 0,7 100,00 3,16 2,64 100,00 4,24 3,58 6 1,0 100,00 2,96 2,27 100,00 3,73 3,16 LSD0,05 0,08 0,10 CV% 2,1 2,20
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………………………85 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5 5 1 2 3 4 5 6 Công thức Số rễ/cây CD5 CD9
ðồ thị 4.13 Ảnh hưởng của than hoạt tính và NAA đến số rễ/cây
0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5 4 4,5 1 2 3 4 5 6 Công thức
Chiều dài TB rễ
CD5 CD9
ðồ thị 4.14 Ảnh hưởng của than hoạt tính và NAA đến
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………………………86
Nhận xét:
1. Bổ sung NAA vào môi trường tạo rễ tốt nhất của than hoạt tính đã có tác dụng tốt hơn hẳn môi trường chỉ có than hoạt tính khơng. Chiều dài trung bình rễ và số rễ/cây tăng dần, lớn nhất khi bổ sung 1g than hoạt tính và 0,5mg/l NAA, sau đó giảm dần khi nồng ñộ NAA tăng dần.
2. Số rễ/cây và ñộ dài rễ trung bình cao nhất của CD5 đạt 3,82 rễ/cây và 3,15cm ở công thức bổ sung 1g than hoạt tính và 0,5mg/l NAA. Cũng tương tự CD5, khi bổ sung 1g than hoạt tính và 0,5mg/l NAA, CD9 ñạt số rễ/cây lớn nhất (4,73 rễ/cây) và chiều dài rễ trung bình cũng lớn nhất (3,89cm/rễ).
3. Ở cả CD5 và CD9, công thức ñối chứng (bổ sung 1g than hoạt tính) cho kết quả về số rễ/cây và độ dài rễ trung bình thấp nhất. Với CD5 lần lượt là 2,47 rễ/cây và 2,12cm. Với CD9, lần lượt là 2,85 rễ/cây và 2,37cm.
4. Ở độ tin 95%, các cơng thức đều khác nhau có ý nghĩa.
4.3 Giai đoạn vườn ươm
Trước khi trồng trong ruộng sản xuất, các cây con in vitro vốn đang sống trong mơi trường nhân tạo hoàn toàn thuận lợi cần phải được thích nghi một thời gian. Vì vậy, việc nghiên cứu giá thể để đưa cây con ra đóng một vai trò hết sức quan trọng.
4.3.1 Ảnh hưởng của giá thể ñến tỷ lệ sống và sinh trưởng phát triển của
CD5 và CD9 sau 1 tháng theo dõi
ðể nghiên cứu vấn ñề này, chúng tôi tiến hành trồng các cây con ñủ tiêu chuẩn ñược tạo từ giai đoạn tạo cây hồn chỉnh (có từ 3 – 4 rễ trở lên) vào 3 nền giá thể khác nhau là: (1) rong biển, (2) xơ dừa và (3) 1/2 rong biển + 1/2 xơ dừa.
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………………………87
Bảng 4.13. Ảnh hưởng của giá thể ñến tỷ lệ sống của CD5 và CD9 sau 1 tháng theo dõi
Tỷ lệ sống Giá thể
CD5 CD9
Rong biển 95,00 92,50
Xơ dừa 66,67 58,33
1/2 rong biển + 1/2 xơ dừa 83,33 70,83
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 CD5 CD9 Giống Tỷ lệ sống
Xơ dừa Rong biển 1/2 rong biển +1/2 xơ dừa
ðồ thị 4.15 Ảnh hưởng của giá thể tới tỷ lệ sống của CD5 và CD9
Nhận xét:
1. Qua theo dõi thấy rằng, các giá thể khác nhau ảnh hưởng rõ rệt tới tỷ lệ sống của CD5 và CD9. Sau 1 tháng theo dõi, ở tất cả các công thức đều có
Trường ðại học Nơng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………………………88
cây con chết. Nguyên nhân chết là do cây mới ñưa ra khỏi bình, chúng phải trải qua giai ñoạn thích nghi, bộ rễ chưa ổn định nên dễ bị tổn thương và chết. 2. Tỷ lệ chết nhiều nhất của CD5 và CD9 là ở giá thể xơ dừa, lần lượt là 33,33% và 41,67%, do xơ dừa giữ ẩm kém hơn các giá thể còn lại nên cây con thường bị khô, dễ chết.
3. Giá thế rong biển có khả năng giữ ẩm tốt nên cây con dễ thích nghi, bộ rễ nhanh chóng được ổn định và phát triển. Tỷ lệ sống nhiều nhất của CD5 và CD9 trên loại giá thể này lần lượt là 95,0 và 92,5%.
Do hạn chế về thời gian nên chúng tơi chưa có điều kiện để có thể kiểm nghiệm lại quy trình nhân nhanh 2 giống CD5 và CD9. Tuy nhiên, qua tất cả các thí nghiệm trên, chúng tơi có thể tính tốn được hệ số nhân của quy trình này như sau:
Với HSN của cây ở giai ñoạn tạo vật liệu ban ñầu và giai ñoạn nhân nhanh, giả thiết tỷ lệ sống của cây ñưa ra là 100%, với 1 mẫu ñưa vào, sau 1 năm nhân liên tục thì hệ số nhân trung bình của giống CD5 là 300 và của CD9 là 233 cây. Trên ñây là HSN tính theo lý thuyết, thực tế cịn nhiều vấn ñề ảnh hưởng ñến HSN này. Sau ñây, chúng tôi tạm đưa ra quy trình nhân giống cho 2 giống CD5 và CD9 như sau:
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………………………89
Qui trình nhân nhanh CD5 và CD9
Cây trưởng thành Giả hành
Cây con
Môi trường tạo cây hoàn chỉnh: MS + 1g THT + 0,5mg/l NAA Mầm chồi mang ñỉnh sinh trưởng ðỉnh sinh trưởng Tách lá Khử trùng HgCl2 0,1%, 1 phút rửa nước cất 3 lần Khử trùng HgCl2 0,1%, 7 phút Cụm chồi/protocorm
Môi trường VW + 120ml nước dừa + 2,0mg/l BAP + 0,5mg/l Ki + 10g ñường + 7g agar + 1g than hoạt tính với CD5 và 0,7mg/l Ki cho CD9
Cụm chồi phát triển
Môi trường nhân nhanh: MS + 1BAP + 0,3NAA (cho CD5) và 0,5NAA (cho CD9)
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………………………90
5. KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ 5.1 Kết luận 5.1 Kết luận
Trên cơ sở các kết quả nghiên cứu, chúng tôi rút ra một số kết luận sau:
1. Việc bổ sung các chất ñiều tiết sinh trưởng thuộc nhóm Auxin và Cytokinins có tác dụng quyết ñịnh ñến sự phát sinh chồi và chất lượng chồi. Ở giai ñoạn nhân nhanh, khi bổ sung 1mg/l BAP và 0,3mg/l NAA vào môi trường MS bổ sung 6,5g agar, 1g than hoạt tính đã cho HSN cao nhất ñối với CD5, ñạt 20,46.
Với CD9, khi bổ sung 1mg/l BAP và 0,5mg/l NAA vào môi trường MS chứa 6,5g agar, 1g than hoạt tính đã ñạt HSN cao nhất là 18,47.
Việc bổ sung riêng rẽ 1 chất hay tổ hợp các chất BAP, Kinetin, NAA và IBA đều có kết quả thấp hơn khi bổ sung 2 chất BAP và NAA.
2. Mơi trường tạo cây hồn chỉnh tốt nhất cho CD5 và CD9 là MS bổ sung 1g than hoạt tính và 0,5mg/l NAA sẽ tạo ra số rễ nhiều nhất và chất lượng rễ tốt nhất.
3. Giá thể tốt nhất ñể ra cây CD5 và CD9 là rong biển.
4. Với các kết quả thí nghiệm trên và do hạn chế về thời gian ñể kiểm chứng quy trình trên, chúng tơi đã đưa ra một quy trình nhân nhanh 2 giống CD5 và CD9 như trên. Với quy trình này, một năm từ một mẫu đưa vào ban ñầu, HSN của CD5 ñạt 300, với CD9 HSN ñạt 233.
5.2 ðề nghị
Các nghiên cứu của chúng tơi mới chỉ dừng lại ở những bước đầu tiên. ðể có những kết quả nghiên cứu đầy đủ hơn về 2 đối tượng này, chúng tơi có một số ñề nghị sau:
1. Do hạn chế về thời gian nên quy trình chưa có điều kiện để kiểm chứng lại. Do đó, chúng tơi đề nghị tiếp tục kiểm nghiệm quy trình nhân nhanh để có kết
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………………………91
quả thuyết phục hơn.
2. Tiếp tục nghiên cứu ảnh hưởng của ñiều kiện ngoại cảnh ñến sinh trưởng và phát triển của cây trên vườn ươm và vườn sản xuất. Nghiên cứu các hiện tượng biến dị trong nuôi cấy in vitro.
3. Nghiên cứu ảnh hưởng của dinh dưỡng ñến sinh trưởng và phát triển của cây trong giai ñoạn vườn ươm và vườn sản xuất.
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………………………92
TÀI LIỆU THAM KHẢO
Tài liệu tiếng Việt
1. Nguyễn Tiến Bân (1990), Các cây hạt kín ở Việt Nam, tuyển tập các
cơng trình nghiên cứu sinh thái và tài nguyên sinh vật, NXB Nông Nghiệp
2. Nguyễn Tiến Bân (1997), Cẩm nang tra cứu và nhận biết các họ thực
vật hạt kín (Magnoliophyta angios permae) ở Việt Nam, NXB Nông Nghiệp Hà Nội.
3. Võ Văn Chi, Lê Khả Kế (1969), Cây cỏ thường thấy ở Việt Nam, NXB Khoa học, trang 57 – 80
4. Võ Văn Chi (1978), Phân loại thực vật, NXB Giáo dục và ñào tạo 5. Võ Văn Chi, Dương ðức Tiến (1978), Phân loại thực vật – thực vật
bậc cao, NXB ðại học và trung học chuyên nghiệp.
6. Nguyễn Văn Chương, Trịnh Văn Thịnh (1991), Từ ñiển bách khoa
Nông Nghiệp, Trung tâm quốc gia biên soạn, Hà Nội
7. Việt Chương, Nguyễn Việt Thái (2002), Kỹ thuật trồng và kinh doanh
phong lan, NXB Thành phố Hồ Chí Minh
8. Nơng Văn Duy, Nguyễn Thị Lang và cs (2001), Các loại lan ở Lâm ðồng, Thông tin khoa học công nghệ Lâm ðồng, số 1, 2001
9. Nguyễn Hữu Duy, Phan Ngọc Cấp, Mấy nét về cội nguồn phong lan – đặc sản của các lồi nhiệt đới, Việt Nam hương sắc, số 1, trang 15 – 16
10. Nguyễn Thanh Hảo (2008), Nghiên cứu nhân giống và ni trồng giống địa lan Hồng Hoàng Sapa Cymbidium sp., Luận văn tốt nghiệp,
ðại học Nơng Nghiệp Hà Nội
11. Phạm Hồng Hộ (1992), Cây cỏ miền nam, quyển 1 – 2, Bộ Giáo dục – trung tâm học liệu
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………………………93
13. Vũ Thị Hoài (2006), Nghiên cứu một số khâu kỹ thuật trồng lan cấy mô, Luận văn thạc sỹ nông nghiệp, ðại học Nông Nghiệp Hà Nội
14. Trần Hợp (1989), Hoa, lan, cây cảnh và vấn ñề phát triển sản xuất,
kinh doanh, xuất khẩu, NXB thành phố Hồ Chí Minh.
15. Trần Hợp (1990), Phong lan Việt Nam, NXB Khoa học kỹ thuật 16. Trần Hợp (2001), Phong lan Việt Nam, NXB Khoa học kỹ thuật
17. Trần Văn Hn, Văn Tích Lượm (2002), Kỹ thuật ni trồng cây lan, NXB Thành phố Hồ Chí Minh
18. Trần Văn Hn, Văn Tích Lượm (2007), Kỹ thuật ni trồng cấy lan, NXB Mỹ thuật (sản xuất hoa trên thế giới).
19. Dương Công Kiên (2002), Nuôi cấy mô thực vật, NXB ðại học quốc
gia TP. HCM
20. Hoàng Xuân Lam (2006), Nghiên cứu một số biện pháp kỹ thuật nhằm
tăng năng suất, phẩm chất một số giống hoa phong lan hồ ñiệp nhập nội, Luận văn thạc sỹ nông nghiệp, ðại học Nông Nghiệp Hà Nội
21. Bùi Văn Lệ (2001), Thực tập Công nghệ sinh học thực vật, NXB
Trường ðại học Khoa học tự nhiên TP. HCM
22. Phạm Thị Liên, Nguyễn Xuân Linh (1999), Nghiên cứu ảnh hưởng của
giá thể trồng tới sinh trưởng và phát triển của một số loại địa lan, tạp chí
23. Phạm Thị Liên (2001), Nghiên cứu và ñánh giá một số lồi địa lan ở
miền bắc Việt Nam, Luận án tiến sỹ nông nghiệp
24. Nguyễn Xuân Linh (1998), Hoa và kỹ thuật trồng hoa, NXB Nông Nghiệp Hà Nội, tr 145 – 162.
25. Nguyễn Xuân Linh, Phạm Thị Liên, Nguyễn Thị Xuân Lý, ðoàn Duy Thanh (2000), Kỹ thuật trồng hoa, NXB Nông Nghiệp Hà Nội
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………………………94
26. Nguyễn Xuân Linh (2002), Kỹ thuật trồng hoa cây cảnh, NXB Nông Nghiệp, trang 92 – 108.
27. Trần Văn Minh (1999), Giáo trình Cơng nghệ sinh học Thực vật, Viện sinh học nhiệt đới
28. Hồng Thị Nga, Nguyễn Quang Thạch, ðỗ ðức Thịnh, Hoàng Minh Tú (2008), “Xây dựng quy trình nhân nhanh giống ñịa lan Hồng Hồng Cymbidium iridioides bằng kỹ thuật ni cấy mơ tế bào”, Tạp chí Khoa
học và Phát triển, tập 6, số 4, tr. 387 – 394
29. Nguyễn Công Nghiệp (2000), Trồng hoa lan, NXB Trẻ
30. Vũ Thị Phượng (2005), Nghiên cứu hiện trạng sản xuất hoa Lan và một
số biện pháp kỹ thuật nuôi trồng lan Hồ ðiệp ở Hà Nội và một số vùng phụ cận, Luận văn thạc sỹ nông nghiệp, ðại học Nông Nghiệp Hà Nôi
31. Trần Duy Quý (2005), Sổ tay người Hà Nội chơi lan, NXB Nông Nghiệp Hà Nội
32. Phạm Thị Quyên, Nghiên cứu nhân in vitro giống hoa phong lan Dendrobium hollyday night first love, Luận văn tốt nghiệp, ðại học Nông Nghiệp Hà Nội
33. Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Thị Lý Anh, Hoàng Thị Nga, Nguyễn Xuân Trường, ðỗ ðăng Vịnh (2003), Nghiên cứu xây dựng quy trình nhân giống và nuôi trồng phong lan Phalaenopsis, Báo cáo tại hội nghị
sinh học toàn quốc.
34. Nguyễn Quang Thạch, Hoàng Thị Nga, Hoàng Minh Tú (2004), Nghiên
cứu xây dựng quy trình nhân giống địa lan bằng kỹ thuật ni cấy mơ,
http://www.rauhoaquavietnam.vn
35. Nguyễn Quang Thạch, Hồng Thị Nga, Lê Văn Vy, Hoàng Minh Tú (2008), “Nghiên cứu xây dựng quy trình kỹ thuật ni trồng cây địa lan Cymbidium spp cấy mơ”, Tạp chí Nơng Nghiệp và Phát triển, tập 4.
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………………………95
36. Hồng Ngọc Thuận (2000), Giáo trình hoa cây cảnh, NXB Trường ðại học Nông Nghiệp I Hà Nội.
37. Hoàng Ngọc Thuận (2005), Hoa, cây cảnh, Giáo trình dùng cho học viên cao học, Trường ðại học Nông Nghiệp I Hà Nội
38. Nguyễn Hạc Thúy (2001), Cẩm nang sử dụng chất dinh dưỡng cho cây
trồng và phân bón cho năng suất cao, NXB Nơng Nghiệp Hà Nội
39. Nguyễn Huy Trí, ðồn Văn Lư (2008), Trồng hoa cây cảnh trong gia đình, NXB Thanh Hóa, tr.48 -53
40. Vũ Văn Yến (1987), Trồng lan sau ống nghiệm, NXB Thành phố HCM
Tài liệu Internet
41. http://www.apsnet.org/education/IllustratedGlossary/PhotosI- M/meristem 42. http://www.chonongnghiep.com/forum.aspx?g=posts&t=218 43. http://www.congnghemoi.com.vn 44. http://www.dalat.gov.vn/rauhoadl/DesktopDefault.aspx?tabid=73&Mid =673&ItemID=14 45. http://www.hochiminhcity.gov.vn