Ảnh hƣởng pH lên hiệu suất gắn kháng thể với đồng vị phóng xạ 131I đã đƣợc thực hiệnsử dụngnồng độkháng thể là 500 g/ml, hoạt độ đồng vị phóng xạ
131I là 5 mCi, nồng độchloramin T là 20 g/ml, thời gian phản ứng thay 5 phút ở nhiệt độ phịng. Kết quả đƣợc trình bày trong bảng 3.2 sau đây:
Bảng 3.3.Hiệu suất gắn phóng xạ theo pH, (n=3)
Kết quả khảo sát cho thầy quá trình gắn kháng thể rituximab với 131I đạt hiệu suất cao trong miền pH từ pH 7 đến pH 8. Có thể giải thích kết quả là trong miền pH từ 7 đến 8, sự oxy hóa của 131I- tạo thành 131I+ dễ dàng, phản ứng gắn 131I vào phân tử kháng thể hiệu quả hơn, cấu trúc gắn đơn và đa 131I trên vòng phenol của kháng thể nhƣ sau:
HO CH2 C COOH CH2 C
Trong miền pH nhỏ hơn 6 hiệu suất gắn thấp hơn có thể là do sự phân ly của HOCl trong mơi trƣờng axit. Tại pH 9 hiệu suất gắn của kháng thể đạt 85%. Nếu pH lớn hơn 9, phức hợp kháng thể gắn phóng xạ khơng bảo quản đƣợc trong mơi trƣờng kiềm và có sự thay thế của nhóm khác vào vị trí gắn của Iot hoặc phản ứng trở nên mất hiệu quả vì có sự tạo thành IO3- theo phản ứng sau:
I2 + OH- IO3- + I + H2O
Sự tạo thành iodate sẽ là tác nhân oxy hóa I- thành I+ và sau đó I lại bị khử ngay lập tức và tạo thành iodide do sự có mặt của bisulfite:
IO3− + 5 I− + 6 H+ → 3 I2 + 3 H2O
I2 + HSO3− + H2O → 2 I− + HSO4− + 2 H+
pH Hiệu suất gắn (%) 5 65,0 ± 1,1 6 89,2 ± 0,7 7 97,1 ± 0,8 7,5 97,2 ± 0,4 8 98,5 ± 0,7 9 85,0 ± 0,5 NH2 H I I NH2 H I COOH HO
Quá trình này làm ảnh hƣởng đến hiệu suất gắn của 131I vào phân tử kháng thể. Hơn nữa phức hợp kháng thể gắn phóng xạ khơng bảo quản đƣợc trong mơi trƣờng kiềm, Vì vậy q trình gắn tạo phức hợp và bảo quản phức hợp kháng thể đƣợc chọn trong miền pH trung tính [Gopal B. Saha, 2012].
Hầu hết các phản ứng gắn phóng xạ và bảo quản dƣợc chất phóng xạ đều thực hiện tại pH trung tính, trừ một số phản ứng đặc biệt nhƣ gắn DMSA với Tc- 99m tại pH = 3, DTPA gắn với Tc-99m tại pH = 5, gắn Y-90 với các peptid và kháng thể tại pH = 6. pH trung tính đƣợc chọn vì khơng làm mất hoạt tính kháng thể [Daniel S. 1993], [Pescovitz M. D., 2006].